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游仆虫Rab家族成员Eorab1f基因的克隆、表达及多克隆抗体制备被引量：7: 2005年; Rab家族蛋白在真核细胞囊泡转运过程中起关键作用。为进一步研究该家族成员的功能, 本研究从八肋游仆虫(Euplotes octocarinatus) 大核基因组中克隆得到Rab蛋白家族中一个新Rab蛋白基因(命名为Eorab1f)的编码区。该开放读框长624 bp, 含有两个通用终止密码子TGA。通过定点突变将TGA突变为TGC。突变后的Eorab1f克隆入原核表达载体pRSETc 中, 工程菌E coli BL21 (DE3) /pRSETc Eorab1f 经IPTG诱导表达,SDS- PAGE分析表明, 有一分子量约为26 kD的特异蛋白条带出现。表达产物经IMAC金属螯合亲和层析及Re source- Q阴离子交换层析纯化, 获得电泳纯的蛋白。Brandford法检测表明每升发酵液中可获得纯化的目的蛋白1 353 mg。Western blotting印迹分析表明该蛋白为融合有6个His的Eorab1f蛋白。纯化的Eorab1f融合蛋白免疫大鼠制备多克隆抗体, ELISA法测得抗体效价为1∶5 000。用制备的多克隆抗体检测八肋游仆虫的蛋白提取物,表明Eorab1f蛋白在游仆虫细胞内表达, 同时表明所得的多克隆抗体特异性良好。; 智慧柴宝峰梁爱华王伟; 关键词：游仆虫多克隆抗体真核细胞囊泡转运纤毛虫

八肋游仆虫一种富含三核苷酸重复序列的新基因GARP的克隆与序列分析被引量：3: 2007年; 人类基因中三核苷酸重复序列拷贝数的异常扩增,可导致多种神经系统疾病。一种富含GAA三核苷酸的GARP(glutamicacid-richprotein)基因从八肋游仆虫(Euplotesoctocarinatus)大核文库中筛选获得。大核中该基因的染色体全长460bp,基因两端具有下毛类纤毛虫大核特有的端粒序列(C4A4C4A4C4A4C4),开放读框内含有一个TGA(88-90)密码子,在游仆虫中编码为半胱氨酸。经DNAStar软件分析,该基因编码的蛋白质由112个氨基酸组成,预测其分子量为13kDa,等电点为3.82,含有四个α螺旋和一个β折叠。小核中对应的该基因含有两个内部删除序列,IES1和IES2。IES1和IES2分别长41bp,IES1以GA二核苷酸直接重复为删除信号,IES2以TA二核苷酸直接重复为删除信号。RT-PCR证明该基因具有转录活性。; 许静王伟柴宝峰梁爱华; 关键词：八肋游仆虫三核苷酸重复

流化床中甲烷在活性炭上裂解制氢研究被引量：8: 2006年; 采用几种工业成型的活性炭为催化剂,在流化床反应器中研究了甲烷裂解制氢的反应,详细考察了流化床操作条件及活性炭性质对甲烷裂解反应的影响。结果表明:在流化床中甲烷初期转化率最高,随着反应进行由于不断积炭转化率逐渐降低直至一个平稳的阶段。这与在固定床反应器中的规律相似,但是在流化床中甲烷表现了较高的裂解初始速率。流化床操作条件对甲烷裂解影响很大,流速增大甲烷整体转化率降低;温度升高提高了初始转化率,但活性炭稳定性降低;根据Arrhenius方程确定的反应活化能为134.1 kJ/mol。较小粒度的活性炭,其甲烷裂解初始速率较高,但整体催化性能变化不大。流化床反应器能实现失活催化剂的移出和新鲜催化剂的加入,适用于大规模的甲烷在活性炭上裂解制氢反应体系。; 白宗庆陈皓侃李文李保庆; 关键词：甲烷裂解制氢活性炭流化床

热重-质谱联用研究焦炭在甲烷气氛下的热行为被引量：19: 2005年; 利用热重-质谱联用技术对焦炭在甲烷气氛下的热行为及气体逸出情况进行了初步研究。考察了温度、停留时间、甲烷体积分数及流量、焦炭品质等因素对焦炭增重的影响,同时对焦炭在甲烷气氛下及惰性气氛下加热时的气体逸出情况进行了分析。结果表明,在实验进行的时间范围内焦炭的增重随着温度的升高、停留时间的增长、甲烷体积分数的提高而增加;实验采用的两种气体流量对焦炭增重影响不大;焦炭品质越差,增重程度越明显。质谱分析的结果表明,焦炭在惰性气氛下加热时的失重主要是由于CO2和H2O的逸出引起的;甲烷在焦炭存在下800℃以后开始分解析出H2,在恒温停留阶段H2的逸出速率变化不大,同时焦炭的质量增加,说明甲烷分解成碳和氢气。焦炭对甲烷的分解存在一定的催化作用。; 白宗庆陈皓侃李文李保庆; 关键词：焦炭甲烷

Polyclonal antibody against an insect excitatory toxin BmKIT from Buthus Martensii karsch and detection of BmKIT expressed in transgenic cotton: 2008年; An insect excitatory toxin gene from Buthus martensii Karsch(BmKIT)was cloned into the expres-sion vector,pET-28a.BmKIT was expressed as inclusion bodies in Escherichia coli BL21(DE3)hostcells.The authenticity of in vitro expressed protein was confirmed by Western blot.The inclusion bodyprotein band in SDS-PAGE was excised and the protein,BmKIT,was extracted.Polyclonal antibodies tothe purified protein were raised in rabbits.The antibody reacted specifically with the expressed BmKITand was used to quantify its presence in transgenic cotton.; 郝婵娟; 关键词：神经毒素原核

Intein介导的重组昆虫毒素BmKIT在大肠杆菌中的可溶性表达、纯化及活性分析被引量：4: 2007年; 为获得重组蝎昆虫毒素BmKIT,通过PCR方法在BmKIT基因的3′端融合了编码6个组氨酸残基的核苷酸序列,将其插入原核表达载体pTWIN1的内含肽Ssp DnaB Intein基因下游的多克隆位点(MCS)。将获得的表达质粒转化大肠杆菌BL21(DE3)中,用IPTG诱导融合蛋白表达。用Ni-NTA亲和层析柱从菌体裂解液中纯化了CBD-Intein-BmK IThis6融合蛋白,并在柱上诱导Intein自剪切,成功去除融合子CBD-Intein。通过Superdex75凝胶过滤层析获得了纯度达95%以上的BmK IThis6蛋白,该蛋白不仅具有正确的二级结构而且有生物活性。; 许成钢范晓军张志云付月君梁爱华; 关键词：原核表达

八肋游仆虫Rab家族新成员Eo-rab-1 N基因的克隆与序列分析被引量：7: 2006年; Rab蛋白家族属于小分子GTP结合蛋白家族Ras超家族中最大的亚家族，主要在囊泡运输中起作用。实验运用PCR、RT-PCR等技术，从八肋游仆虫中克隆到一种新的tab基因。序列分析结果表明：在大核中，该基因全长884bp，除去两端的端粒与非编码区，该基因在大核中由723bp组成。从小核中克隆相应的基因片段，此基因片段序列与大核中序列一致，表明该基因在小核中无内部删除序列的存在。通过RT-PCR，从mRNA获得的该基因的开放读框为663bp，表明该基因在转录过程中有内含子的删除。大核基因序列和cDNA序列比较，发现60bp的内含子序列位于大核基因的153～212bp之间，并符合一类内含子GU-AG剪切规则。在遗传密码使用上，该基因内部含有2个TGA，在游仆虫中编码半胱氨酸。同时首次发现，八肋游仆虫基因使用TAG作为终止密码子。NCBI上序列比对表明该基因翻译的蛋白与其他物种Rabl蛋白的同源性达49％～52％，因此我们将它命名为Eo-rab-1N，GenBank登录号为DQl05562。Eo-rab-1N与其他物种的Rab1蛋白构建进化树，发现该蛋白的进化与物种的进化保持一致，表明该基因在细胞中具有重要功能。; 李凌燕柴宝峰梁爱华孙永华王伟; 关键词：八肋游仆虫内含子

酸处理对活性炭性质及其催化裂解甲烷制氢性能的影响被引量：13: 2006年; 考察了不同酸处理方式的活性炭的性质变化及其对甲烷催化裂解反应性能的影响.结果发现:经过不同酸处理后的活性炭,比表面积都显著增加,孔容也有相应增加;硝酸处理的活性炭在TPD过程中溢出的CO和CO2的量增加,这说明用硝酸处理使活性炭表面含氧官能团增加.酸处理同时能脱除活性炭大部分的灰分.三种酸处理方式均使木质活性炭催化裂解甲烷初始速率增加,而煤质活性炭只有在硝酸60℃水浴下处理后才使甲烷裂解初始速率增加;经酸处理的各类活性炭失活趋势与未经酸处理的规律相似.甲烷在活性炭上的裂解是受多种因素影响,而不能简单地归结于一种因素.SEM测试表明,反应后煤质活性炭表面有纤维碳生成,这归结于活性炭灰分中含有的Fe.; 白宗庆陈皓侃李文李保庆; 关键词：活性炭甲烷裂解酸处理灰分

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山西省自然科学基金(20041033)

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