江苏省自然科学基金(BK1999084)
- 作品数：8 被引量：50H指数：5
- 相关作者：夏春林邵福源孙茂民陆志方王宇卉更多>>
- 相关机构：苏州大学第二军医大学首都医科大学更多>>
- 发文基金：江苏省自然科学基金江苏省高校自然科学研究项目国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 新生大鼠大脑皮质O-2A祖细胞的体外诱导分化被引量：8
- 2004年
- 目的 在获取高纯度O 2A祖细胞的基础上 ,探讨O 2A祖细胞在体外分化的形态学特点。方法 采用“两次恒温摇床振荡法”和差速贴壁法 ,结合使用神经营养因子 (bFGF、PDGF AA) ,进行O 2A祖细胞体外纯化和扩增培养 ,并观察O 2A祖细胞在有血清和无血清培养条件下的分化情况 ,用免疫细胞化学鉴定分化成熟的 2型星型胶质细胞和少突胶质细胞。结果 培养的O 2A祖细胞能形成克隆球 ,具有增殖能力 ,经免疫细胞化学鉴定细胞纯度达 90 %以上。在含血清的培养基中能定向分化为 2型星形胶质细胞 ,其胞体较大 ,从胞体上伸出细长突起 ,由突起上再发出更为细小的分支 ,GFAP和A2B5抗体标记均为阳性 ;在无血清的化学条件培养基中能定向分化为少突胶质细胞 ,其胞体较小 ,突起短而细 ,相互交织呈“蜘蛛网”样 ,CNPase抗体标记阳性。结论 (1)培养的O 2A祖细胞保持定向干细胞的特性 ,具有增殖和双向分化的潜能 ;(2 )O 2A祖细胞定向分化为 2型星形胶质细胞过程中经历较长的增殖期 ,而分化为少突胶质细胞过程中则增殖期较短 ;(3)分化的 2型星形胶质细胞和少突胶质细胞在形态学和抗原表达上存在差异。
- 孙燕王劼夏春林
- 关键词：祖细胞大脑皮质新生大鼠增殖期贴壁法
- 巢蛋白和阶段特异性胚胎抗原-1在大鼠2型星形胶质细胞中的表达被引量：16
- 2007年
- 目的观察1型和2型星形胶质细胞(T1A、T2A)是否表达神经干细胞的标志物、是否具有神经干细胞的特性。方法取新生大鼠脑皮质,体外培养纯化的O-2A祖细胞、T1A和T2A,应用激光共焦双重免疫荧光标记技术检测巢蛋白和阶段特异性胚胎抗原-1(SSEA-1)的表达;观察O-2A祖细胞、T1A和T2A在碱性成纤维生长因子(bFGF)和表皮生长因子(EGF)的培养液中生长方式的改变。结果巢蛋白在O-2A祖细胞和T2A中表达,T1A不表达;SSEA-1仅在T2A中表达。在干细胞培养基中培养10d,T2A形成能增殖和连续传代的细胞球,细胞球巢蛋白标记阳性,贴壁后分化细胞具有神经元、星形胶质细胞和少突胶质细胞样形态;但相同培养条件下的O-2A祖细胞和T1A生长方式无改变。结论巢蛋白和SSEA-1在两型星形胶质细胞中的表达存在差异,T2A具有神经干细胞的某些生物学特性。
- 李春鹏张晔夏春林沈慧张静陆志方
- 关键词：巢蛋白免疫细胞化学
- 大鼠短暂局灶性大脑中动脉缺血后calpain的表达被引量：14
- 2003年
- 目的 :研究calpain在缺血性脑损伤中的作用 ,进一步探讨缺血性脑血管病的分子机制 ,为治疗研发提供理论依据。方法 :用Belayev改良的Langa线栓法制备大鼠局灶性大脑中动脉 (MCA)缺血 /再灌注模型 ,TTC染色观察梗死灶的形成 ,分别用原位杂交及免疫组化技术检测鼠脑中calpainmRNA与活性蛋白的表达。 结果 :缺血 2h再灌注 2 4h ,TTC染色见明显的梗死灶形成 ,正常脑组织、假手术组及MCAO缺血对侧脑中有少量的calpainmRNA表达 ,但活性蛋白几无表达 ;缺血脑组织calpainmRNA表达及蛋白质活化均显著增加 ,呈双峰式 ,MCA缺血 2h增加 ,再灌注 4h减少 ,至 2 4h更明显增高 ,而 4 8h又有所下降。结论 :Calpain参与了缺血性脑损伤过程 ,尤其在迟发性神经元死亡中起重要作用。
- 王宇卉夏春林强华邵福源
- 关键词：CALPAIN基因表达再灌注损伤
- 巢蛋白和阶段特异性胚胎抗原-1在O-2A谱系细胞中的表达被引量：2
- 2007年
- 目的观察O-2A(oligodentrocyte-type-2 astrocytes)谱系细胞是否是表达神经干细胞的标志物。方法取新生大鼠脑皮质体外培养纯化的O-2A祖细胞、少突胶质细胞和2型星形胶质细胞,应用激光共聚焦双重免疫荧光标记技术检测巢蛋白(nestin)和阶段特异性胚胎抗原-1(SSEA-1)的表达。结果nestin在O-2A祖细胞和2型星形胶质细胞中表达,在少突胶质细胞中不表达;SSEA-1仅在2型星形胶质细胞中表达。结论nestin和SSEA-1在O-2A谱系细胞中的表达存在差异,可能具有神经干细胞的特征。
- 李春鹏孙文阁夏春林
- 关键词：巢蛋白免疫细胞化学
- 大鼠海马神经元缺氧/复氧后caspase-3活性的变化被引量：5
- 2002年
- 目的:研究caspase-3在体外培养的海马神经元缺氧/复氧损伤中的作用及其抑制剂的干预效果,为缺血性脑损伤的治疗提供实验资料。方法:诱导体外培养的大鼠海马神经元缺氧3 h,再复氧12～48 h,并在缺氧前1 h用不同剂量的caspase-3抑制剂Ac-DEVD-CMK进行干预处理,应用MTT比色法测定细胞存活率,底物裂解法检测caspase-3活性。结果:缺氧/复氧后大鼠海马神经元存活率逐渐降低,caspase-3活性明显增强,复氧24 h达高峰;用Ac-DEVD-CMK预处理的海马神经元caspase-3活性降低,细胞存活率增高,并呈剂量依赖性。结论:体外培养的大鼠海马神经元缺氧及缺氧/复氧后出现迟发性死亡,caspase-3介导的细胞凋亡机制在这种损伤过程中起一定的作用,通过抑制其活性可产生神经保护作用。
- 王宇卉邵福源夏春林孙茂民
- 关键词：海马神经元CASPASE-3
- 胰甘油三酯脂酶在大鼠两型星形胶质细胞中的表达被引量：4
- 2008年
- 目的比较胰甘油三酯脂酶在1型星形胶质细胞(T1A)和2型星形胶质细胞(T2A)中的表达情况。方法取新生大鼠脑皮质,体外分离培养纯化的T1A和T2A,应用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR))技术检测胰甘油三酯脂酶mRNA在两型星形胶质细胞中的表达差异,并且通过激光共焦免疫荧光双标技术从蛋白水平进一步证实。结果胰甘油三酯脂酶在T1A中不表达或低表达,主要定位于细胞核中;而在T2A中表达水平较高,分布广泛,在胞浆、胞核及细胞突起中均有表达。结论胰甘油三酯脂酶在两型星形胶质细胞中的表达存在差异,胰甘油三酯脂酶在T2A中高表达,提示T2A在中枢神经系统脂代谢方面起重要的作用。
- 严美娟陆志方夏春林孙茂民刘
- 关键词：细胞培养逆转录聚合酶链反应免疫组织化学
- Caspase-3抑制剂对大鼠短暂局灶性脑缺血模型的神经保护作用被引量：1
- 2005年
- 目的:研究caspase 3抑制剂ⅢAc DEVD CMK干预治疗对大鼠短暂局灶性脑缺血模型的神经保护作用。方法:大鼠或不进行预处理(MCAO组),或分别经左侧侧脑室注射Ac DEVD CMK(DEVD组)、溶剂二甲亚砜(DMSO组)后,用线拴法制作大鼠左侧大脑中动脉(MCA)缺血/再灌注模型;通过Klenow标记及TUNEL染色技术检测鼠脑中单、双链DNA断裂;分别用原位杂交及免疫组化技术检测鼠脑中caspase 3和calpain mRNA及活性形式蛋白质的表达。结果:与MCAO组相比,DMSO组鼠脑缺血侧DNA单、双链断裂,caspase 3和calpain mRNA及活性蛋白质的表达均无明显差异;DEVD组缺血侧脑中Klenow及TUNEL阳性细胞数均明显减少,caspase 3及calpain的表达也明显减少。结论:Caspase 3 抑制剂干预治疗短暂局灶性脑缺血具有潜在的临床应用价值。
- 王宇卉夏春林强华邵福源
- 关键词：CASPASE-3CALPAINCASPASE-3抑制剂
- 新生大鼠大脑O-2A细胞系的分离纯化和双向分化培养被引量：6
- 2003年
- 目的 在体外培养条件下获取纯度较高的O - 2A细胞系细胞并探索其分化规律。方法 根据星形胶质细胞、O - 2A祖细胞的生长时间差异及细胞的粘附特性不同 ,采用振荡法和差速贴壁法 ,结合 1型星形胶质细胞条件培养液 ,培养、分离纯化O - 2A祖细胞。结果 纯化的O - 2A祖细胞胞体呈椭圆形 ,具有典型的双极突起 ;经免疫细胞化学染色鉴定 ,细胞的纯度达 90 %。在有血清的情况下 ,O - 2A祖细胞定向分化为 2型星形胶质细胞 ;在无血清的情况下 ,定向分化为少突胶质细胞。结论 通过振荡法和差速贴壁法 ,结合 1型星形胶质细胞条件培养液分离纯化培养的O - 2A祖细胞具有双分化潜能。
- 孙燕夏春林孙茂民施婵宏万明辉
- 关键词：星形胶质细胞大脑新生大鼠
