国家科技支撑计划(2009BA178805)
- 作品数：2 被引量：3H指数：1
- 相关作者：汪世平高冬梅陈秀春何卓余路新更多>>
- 相关机构：中南大学长治医学院更多>>
- 发文基金：国家科技支撑计划国家重点基础研究发展计划山西省自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 日本血吸虫核糖体蛋白S4基因的克隆、表达、纯化及免疫诊断价值的初步研究被引量：3
- 2010年
- 目的 体外重组日本血吸虫核糖体蛋白S4（SjRPS4）,并评价其在日本血吸虫病免疫诊断中的应用价值.方法 从日本血吸虫尾蚴cDNA文库获得了SjRPS4蛋白相关基因,将该段基因克隆入pQE30表达载体并转化到大肠杆菌M15中,异丙基-β-D-硫代半乳糖苷（IPTG）诱导融合蛋白表达.融合蛋白经Ni2＋-NTA树脂柱进行亲和层析纯化,并通过十二烷基磺酸钠一聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS-PAGE）鉴定蛋白反应,通过Western blot和ELISA对其免疫原性进行鉴定.结果 成功构建了pQE30/SjRPS4重组菌.重组菌诱导培养后,SDS-PAGE电泳分析可见在相对分子质量约30×103处有SjRPS4融合蛋白的表达,经纯化获得纯度达90%以上的表达蛋白.Western blot检测结果表明该重组蛋白能被日本血吸虫病患者血清识别.用ELISA法检测疑似血吸虫病患者血清,敏感性为90.91%（70/77）,特异性为92.59%（25/27）,SjRPS4重组表达蛋白阳性率为67.30%（70/104）,与肺吸虫病患者血清无交叉反应.结论 成功克隆表达了SjRPS4蛋白,初步证实了SjRPS4在诊断血吸虫病中具有良好的应用价值.
- 高冬梅汪世平余路新何卓陈秀春
- 关键词：血吸虫重组蛋白质类免疫学试验
- 日本裂体吸虫HMGB1基因克隆与原核表达载体构建
- 2013年
- 目的:利用RT-PCR方法扩增日本裂体吸虫HMGB1基因,构建原核表达载体。方法:日本裂体吸虫尾蚴感染纯种新西兰兔后8周,检获肠系膜下静脉血管中的成虫;匀浆成虫,提取总RNA,经RT-PCR扩增出含SjHMGB1的目标片段,克隆于pMD-19T载体,转化DH5α大肠杆菌增殖克隆,测序鉴定。以pMD-19T-SjHMGB1为模板进行二次PCR扩增,分别获得SjHMGB1、A-box和B-box片段,经BamHⅠ+XhoⅠ双酶切消化PCR产物,分别亚克隆至高效蛋白表达载体pET-26b(+)。结果:用RT-PCR从日本裂体吸虫成虫扩增出含SjHMGB1、A-box和B-box的基因片段,构建成功含目标基因的pMD-19T克隆载体,测序表明序列正确,进一步亚克隆,分别构建成功相应的融合蛋白表达载体pET-26b(+)-SjHMGB1、pET-26b(+)-SjHMGB1-Abox和pET-26b(+)-SjHMGB1-Bbox,经酶切电泳鉴定证实表达载体的构建正确。结论:克隆日本裂体吸虫HMGB1基因,并构建成功SjHMGB1的基因克隆载体和SjHMGB1、A-box、B-box的蛋白表达载体,为进一步获得目标蛋白及其相关研究奠定了基础。
- 刘明社赵中夫汪世平刘益萍张芸张国英
