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黑龙江省自然科学基金(ZD201118)
作品数:
2
被引量:2
H指数:1
相关作者:
刘晔
金艾顺
韩晓建
毕冬梅
梁媛
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相关机构:
哈尔滨医科大学
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发文基金:
黑龙江省自然科学基金
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相关领域:
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哈尔滨医科大...
作者
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金艾顺
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宗卫娇
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国际免疫学杂...
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2015
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体外诱导外周血B淋巴细胞分化浆细胞方法的建立及评价
被引量:1
2013年
目的建立体外活化外周血单个核细胞(PBMCs)中B淋巴细胞扩增和分化浆细胞的方法,为高亲和力治疗性人源单克隆抗体的研发提供研究基础。方法从3名接种过流感疫苗健康志愿者(〉10个月)的末梢血中分离PBMCs,加入TLR9激动剂CpGDNA2006和细胞因子等培养;流式细胞分析、酶联免疫吸附试验(ELISA)、酶联免疫斑点试验(ELISPOT)、细胞计数法评价B淋巴细胞体外活化效果。结果与对照组相比,刺激组中CD19阳性细胞和CD138阳性细胞的比率明显增高(t=2.625,3.571,P〈0.05);培养上清中总IgG和抗原特异性IgG含量增加,且分泌IgG和抗原特异性IgG的浆细胞数量明显增加(t=2.942,3.196,P〈0.05),刺激组比未刺激组细胞生存率提高(t=2.182,P〈0.05)。通过体外活化方法,只需约10ml外周血即可检测到足量的抗原特异性抗体分泌细胞。结论本试验所建立的体外活化方法能够有效地诱导外周血B淋巴细胞扩增和分化!浆细胞。
梁媛
芦凤亮
宗卫娇
刘晔
高翔
金艾顺
关键词:
B淋巴细胞
浆细胞
体外活化
外周血单个核细胞
自外周血记忆B细胞体外活化和分化抗原特异性浆细胞的方法研究
被引量:1
2015年
目的建立自人外周血淋巴细胞(PBMCs)中的记忆B细胞活化和分化特异性抗体分泌细胞(如浆细胞)的体外活化方法,为抗体药物研发提供研究基础。方法采集两名接种过乙型肝炎疫苗3年和25年健康成年志愿者(z和L)外周血,分离PBMCs,通过白细胞介素(IL)-2、IL-4和Toll样受体诱导剂(CpG、R848)体外诱导活化记忆B细胞。采用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测培养上清中总抗体和HBsAg特异性抗体的含量;通过酶联免疫斑点试验(ELISPOT)检测培养细胞中总抗体分泌细胞(ASC)数量的变化和HBsAg特异性抗体细胞数量。结果活化第6天,对照组和两个活化组[CpGDNA2006联合IL-2(C组)和R848联合IL-2(R组)]细胞培养上清总免疫球蛋白(Ig)G浓度分别为37.06ng/mL、80.87ng/mL和85.97ng/mL,两个活化组(C组和R组)均明显高于对照组(t=23.318,60.639,P均〈0.05)。ELISPOT检测ASC数量,结果显示,C组和R组数量均多于对照组,并且R组明显多于C组。两种活化方法均能在体外诱导B细胞活化,但R组活化效果更佳,确立R组为最佳活化方法。用该方法活化两名乙型肝炎疫苗接种者PBMCs,ELISA检测活化组特异性抗体浓度,R组显著高于对照组(t=5.031,11.561,P均〈0.05)。不同细胞数量诱导的分组,ELISPOT检测HBsAg特异性抗体分泌细胞数量,R组均明显多于对照组。结论确立诱导剂R848和细胞因子IL-2联合能够有效地诱导外周血记忆B细胞体外活化和分化抗原特异性浆细胞,为今后抗体药物研发提供了研究基础。
毕冬梅
韩晓建
石佳宁
刘晔
金艾顺
关键词:
外周血单个核细胞
体外活化
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