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江苏省“六大人才高峰”高层次人才项目(2009C09)
作品数:
1
被引量:2
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相关作者:
郝波
施瑞华
王璐
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凌亭生
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王璐
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施瑞华
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郝波
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2012
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RNA干扰蛋白激酶B对Eca109细胞功能及血管生成拟态的调节机制
被引量:2
2012年
目的探讨蛋白激酶B(Akt)对Eca109细胞生物学功能的影响及其与血管生成拟态(VM)相关基因表达的关系。方法应用倒置荧光显微镜观察Akt的干扰质粒转染食管癌细胞Eca109后绿色荧光蛋白的表达;平板克隆形成实验检测转染前后细胞增殖能力的变化;Transwell方法检测干扰前后细胞迁移能力的变化;三维培养观察并计数转染前后各组细胞的管状结构数量;将Eca109(未转染组)、Ecal09/Neo(空载体组)、Ecal09/小干扰RNA(siRNA)Akt细胞(稳定转染组)培养后检测细胞凋亡率,了解抑制Akt基因对细胞凋亡的影响;以Western印迹检测各株细胞中Akt蛋白与基质金属蛋白酶2(MMP-2)基因蛋白表达的关系。结果Western印迹结果显示稳定转染组Akt蛋白表达低于空载体组及未转染组(0.03±0.0l比1.49±0.39和1.47±0.41,均P〈0.05)。Transwell实验结果,稳定转染组穿过人工膜的细胞数明显少于空载体组与未转染组[(48-4-9)比(122±11)和(128±10)个,均P〈0.05];稳定转染组的克隆形成数目显著低于空载体组及未转染组[(63±7)比(148±11)和(163±15)个,均P〈0.05]。流式细胞仪以膜联蛋白V/AAD双标法显示稳定转染组凋亡率高于空载体组与未转染组(12.2%4-1.6%比4.2%±0.8%和4.8%4-0.8%,均P〈0.05)。空载体组及未转染组在基质胶上均能形成典型的血管网状样结构,稳定转染组管状结构数目明显少于未转染组与空载体组[(14.0±1.2)比(30.0±1.2)和(27.74-1.5)个,均P〈0.05];稳定转染组MMP-2蛋白表达均低于未转染组及空载体组(均P〈0.05)。结论磷脂酰肌醇三磷酸激酶(PI,K)/Akt通路参与调控了食管鳞癌VM的形成,可能是PI,K/Akt通路通过调节MMP-2来影响食管癌细胞VM的形成。阻断Akt通路有可能成为治疗人食管鳞癌的新靶点。
丁宗励
王璐
朱宏
凌亭生
郝波
施瑞华
关键词:
RNA干扰
基质金属蛋白酶2
血管生成拟态
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