广东省科技攻关计划(2008A010900003)
- 作品数：6 被引量：33H指数：4
- 相关作者：胡文锋杨虹坤李雪玲罗文华陈永泉更多>>
- 相关机构：华南农业大学汕头鱼露厂有限公司暨南大学更多>>
- 发文基金：广东省科技攻关计划广东省教育部产学研结合项目国家生猪现代产业技术体系建设项目更多>>
- 相关领域：生物学轻工技术与工程农业科学更多>>
- 甘氨酸甜菜碱对植物乳杆菌YSQ18的渗透压胁迫耐受性的影响被引量：3
- 2012年
- 从传统泡菜中分离出一株耐盐的酸菌,对其进行形态学、生理生化特性及16S rRNA序列分析鉴定,确定其种属地位;并初步研究相容性溶质甘氨酸甜菜碱在高渗透压环境下对所筛菌株的生长曲线和发酵糖耗速率的影响。结果表明:筛选出的乳酸菌中有一株符合乳杆菌属植物乳杆菌的鉴别特征,与16S rRNA序列鉴定和发育树分析结果一致。在含有1.2mol/L NaCl和1.5mol/L NaCl的化学合成培养基中,该植物乳杆菌的生长受到完全的抑制。在培养基中添加0.80mmol/L的甘氨酸甜菜碱对植物乳杆菌有较明显的保护作用,能减弱高渗胁迫,有效缩短迟滞期,提高耐盐能力。发酵中糖耗速率测定结果表明添加0.80mmol/L的甘氨酸甜菜碱能有效保持细菌活性。因此,在高渗环境发酵过程添加甘氨酸甜菜碱也许能有效提高微生物的活性,如传统的酿制酱油以及腌制泡菜等。
- 胡文锋余世琴袁尧李芬芳魏鲁宁刘秉杰杨益衡吴惠玲李铁桥陈永泉
- 关键词：植物乳杆菌甘氨酸甜菜碱相容性溶质
- 植物甜蛋白Mabinlin Ⅱ在大肠杆菌中的表达被引量：4
- 2011年
- 本研究从马槟榔种子中扩增得到天然植物甜蛋白Mabinlin Ⅱ的全长cDNA序列(M1),并通过特异引物PCR去除部分5’端序列得到修饰型的基因序列(M2)。将M1与M2分别克隆至表达载体pET43.1a(+),并分别转化表达宿主菌Escherichia coli BL21(DE3)和Rosetta(DE3),成功构建出BL21(DE3)/pET43.1a-M1(缩写B-M1)、BL21(DE3)/pET43.1a-M2(缩写B-M2)、Rosetta(DE3)/pET43.1a-M1(缩写R-M1)、Rosetta(DE3)/pET43.1a-M2(缩写R-M2)四个表达系统。经IPTG诱导表达后证明,R-M1的重组甜蛋白表达量最高,并可检测到轻微甜味和后甜感。同时利用镍柱对R-M1诱导表达的目的蛋白进行纯化,得到单一条带的重组甜蛋白。
- 王昌博黄东彦胡文锋罗文华李雪玲颜少帆陈永泉
- 关键词：甜味蛋白马槟榔大肠杆菌
- 植物乳杆菌YSQ规模化生产的低成本培养基配方优化被引量：5
- 2012年
- 通过单因素试验、Plackett-Burman试验设计及响应面法筛选适于植物乳杆菌YSQ株大规模发酵的低成本培养基。结果表明:单因素试验确定培养基成分:碳源为玉米粉、次粉+蔗糖;氮源为豆粕;番茄汁作为生长因子供体。利用Plackett-Burman试验设计筛选出影响植物乳杆菌生长的4个主要因子:次粉、豆粕、K2HP O4和MnSO4。最陡爬坡、中心优化组合及响应面分析确定培养基各组分的最适添加量为:玉米粉10g/L、豆粕15.5g/L、次粉1.2g/L、蔗糖5g/L、番茄汁150mL/L、K2HPO41.1g/L、MnSO40.28g/L、MgSO40.3g/L。优化后,植物乳杆菌发酵18h的菌落总数从优化前的8.73×108CFU/mL(玉米粉、豆粕、次粉的混合料)提高到2.68×1010CFU/mL。
- 胡文锋张春丽刘秉杰杨益衡罗文华李雪玲
- 关键词：发酵培养基优化响应面法
- 猪脂联素球状结构域gAd蛋白在重组乳酸乳球菌中表达条件的优化
- 2013年
- 为获得含猪脂联素球状结构域gAd基因的重组乳酸乳球菌的高效表达,对其表达条件和培养基配方进行了优化。首先采用单因素分析法确定重组乳球菌最佳诱导剂浓度、诱导时间点(OD600)和诱导后培养温度,以及培养基中的乳糖浓度、氮源浓度、Na2HPO4浓度和MgSO4浓度对表达量的影响;之后通过正交试验,确定重组乳酸乳球菌的最佳表达条件。结果显示,其最佳诱导剂nisin浓度为30ng/mL、诱导的时间点是OD600≈0.4、诱导后培养温度为25℃;最佳培养基配方是:乳糖添加量为7%、大豆蛋白胨为2.7%、酵母膏为1.3%、Na2HPO4浓度为0.25%、MgSO4浓度为0.02%。优化后,脂联素的表达量为29.4%的总蛋白含量。
- 杨虹坤刘霭莎胡文锋李岩吴同山王进军
- 关键词：脂联素乳酸乳球菌正交试验
- 直投式乳酸菌发酵剂的研制被引量：17
- 2012年
- 本研究旨在研制出一种菌活高、使用简单,无需复杂的无菌操作技术与设备的直投式乳酸菌发酵剂,可用于发酵乳、泡菜以及动物饲料发酵和生产。本发酵剂以嗜酸乳杆菌LH1F为菌种,实验过程优化番茄汁增菌培养基的配方,细胞数目达4.25×1010CFU/mL。最佳的抗冷冻保护剂的配方为:脱脂奶粉2.5%,甘油1%,葡萄糖2.5%,蔗糖1%,Vc 2.5%。真空冷冻干燥的条件为4000 r/min,20 min离心获得菌体后真空冷冻干燥6 h。通过优化的直投式乳酸菌发酵剂的活菌数可以达到1.27×1012CFU/g;于4℃存放三个月后,乳酸菌活菌数仍达到3×1010CFU/g。因此,经过优化乳酸菌发酵条件及保护剂配方,所得的冻干型直投式菌种可用于乳品及动物饲料的发酵。
- 方义川杨虹坤何谦韩笑刘秉杰李适云杨益衡胡文锋
- 关键词：直投式发酵剂乳酸菌
- 猪脂联素球状结构域gAd基因在乳酸乳球菌中的表达被引量：4
- 2012年
- 本研究旨在克隆猪脂联素球状结构域gAd基因,构建重组质粒并将其转化至乳酸乳球菌NZ9000中进行表达,并在体外对重组猪脂联素球状结构域进行生物学活性分析。提取猪脂肪组织总RNA,扩增得到脂联素基因全长并测序,设计引物引入酶切位点和His-tag,把gAd亚克隆到表达载体pNZ8048,将重组质粒转化乳酸乳球菌NZ9000中诱导表达。通过Ni 2+亲和层析柱对重组蛋白纯化后再Western blotting检测。然后,将gAd蛋白注射到高糖饲喂的小鼠体内鉴定生物学活性。结果表明成功获得了gAd基因并在乳酸乳球菌NZ9000中表达,表达产物相对分子质量约17ku。经纯化后用Western blotting检验具有反应原性,动物试验证明制备的gAd蛋白能显著降低小鼠的血糖水平。本研究为利用外源重组脂联素球状结构域调节猪的脂肪代谢打下了良好的基础。
- 刘霭莎李岩胡文锋吴同山李加琪陈真伟江冠尧黎立
- 关键词：脂联素乳酸乳球菌
