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一个ALS家系突变SOD1编码蛋白的相互作用蛋白筛选被引量：1: 2008年; 目的:筛选与突变SOD1编码蛋白相互作用的蛋白。方法:应用Clontech酵母双杂交系统3,对人胎脑cD-NA文库进行筛选。把构建成功的质粒pGBKT7-mSOD1cDNA转染酵母菌AH109,再与含有已克隆到pACT2载体上的人胎脑cDNA文库的酵母菌Y187杂交融合。突变的SOD1cDNA与相应的人胎脑cDNA片段编码的蛋白发生相互作用后,可激活基因的表达,筛选出阳性克隆,对阳性克隆的质粒进行测序分析。在GenBank中作匹配及生物信息学分析。结果:共筛选出15个阳性克隆,其中包括9个为已知蛋白,6个为未知蛋白。其中包括PTPN2(protein tyrosinephos phatase,non-receptor type2)。结论:突变SOD1可能通过这些相互作用的蛋白进行相互调控,改变了正常SOD1酶的信号传导通路,从而使机体患病。; 陈桂生李露斯史树贵陈康宁周振华吴军罗高兴袁顺宗彭旭; 关键词：相互作用蛋白

一个肌萎缩侧索硬化家系的SOD1基因突变被引量：23: 2004年; SHI Shu-gui, LI Lu-si, CHEN Kang-nin, LIU Xing. (Department of Neurology, Southwest Hospital, Third Military Medical University, Chongqing, 400038 P.R. China.) Objective To identify the mutation of Cu/Zn superoxide dismutase ( SOD1) gene in an amyotrophic lateral sclerosis (ALS) family with unique phenotype. Methods Five exons of SOD1 gene were amplified by PCR.The differences of these products were analyzed by PCR-single strand conformation polymorphism and visualized by silver staining. Results Abnormal bands were found in exons 2 and 5 of SOD1 gene in several familial members. DNA sequence analysis verified that a base pair insertion occurred in the codon area of exon 2 and in the intron area of exon 5. And the insertion mutation of exon 2 led to a frameshift mutation and premature stop. It is a new type of SOD1 mutation which may be associated with familial amyotrophic lateral sclerosis. Conclusion Insertion mutation of exon 2 may be responsible for the disease of an ALS family in Chongqing.; 史树贵李露斯陈康宁刘昕; 关键词：肌萎缩侧索硬化铜锌基因突变

一个肌萎缩侧索硬化症家系突变的SOD1基因的生物信息学研究被引量：3: 2008年; 目的利用生物信息学理论和方法对新突变基因Cu/Zn超氧化物歧化酶(SOD1)的基因序列和蛋白序列进行分析,预测和分析突变SOD1功能以及探讨生物信息学在新突变基因研究中的作用。方法以人类基因组数据库为基础,利用BLAST程序对SOD1的基因结构进行分析和序列相似性搜索;进行基因的染色体定位和基因组织结构分析;DNAstar软件进行ORFfinder和编码蛋白进行序列预测和功能分析。结果通过分析得出,突变SOD1定位于染色体21q,其开放阅读框为108bp,编码36个氨基酸,编码氨基酸具有保守性,与人的SOD1具有很高的同源性,为一胞内蛋白,突变后蛋白质的二级结构发生改变。结论突变SOD1可能是新的SOD1成员,可能突变的SOD1酶的活性以及信号通路发生改变从而影响神经细胞的生物功能,生物信息学为新基因的功能研究提供了很好的方法。; 陈桂生李露斯史树贵陈康宁胡俊周振华; 关键词：肌萎缩侧索硬化症生物信息学

变性高效液相色谱法在FALS突变位点检测中的应用被引量：1: 2005年; 目的检测一个肌萎缩侧索硬化症(amyotrophic lateral sclerosis,ALS)家系的铜、锌超氧化物歧化酶(Cu/Zn superoxide dismutase,SOD1)基因的突变位点,同时观察变性高效液相色谱法(denaturing high performance liquid chromatography,DHPLC)的实用价值。方法对PCR-SSCP检测阴性的外显子,应用DHPLC法及DNA直接测序技术,再次进行SOD1基因的突变位点检测。结果经DHPLC检测,家系成员Ⅲ1SOD1基因的第4外显子有突变峰,DNA直接测序证实存在杂合子,发生了GAA→GGA错义突变,使编码的氨基酸由谷氨酸变为甘氨酸。结论DHPLC技术与PCR-SSCP相比有更高的敏感性,可作为大样本筛查突变位点的一种便捷可靠手段。; 胡俊史树贵李露斯吴玉章倪兵; 关键词：家族性肌萎缩侧索硬化症变性高效液相色谱法突变

突变SOD1 cDNA在大鼠皮层神经元定位和作用: 2008年; 目的:分析一个ALS家系突变铜、锌超氧化物歧化酶(Cu/Zn superoxide dismutase,SOD1)基因在原代培养的大鼠皮层神经元中的定位及作用。方法:将构建好的含有SOD1正常基因与突变基因在内的增强型绿色荧光蛋白真核表达载体(pEGFP-hSOD1和pEGFP-mSOD1)分别转染大鼠皮层神经元,转染后观察绿色荧光在细胞内的分布情况,同时设对照组,检测神经元的SOD1活性、MDA含量及细胞活性。结果:转染后荧光物质表达于胞浆内,与转染pEGFP-mSOD1质粒的神经元相比,转染pEGFP-hSOD1质粒神经元的SOD1活性、MTT值显著增高,而MDA、LDH水平显著降低。结论:突变SOD1蛋白的酶活性下降,使脂质过氧化物相对增多,导致神经元损伤,可能是该家系发病的主要原因之一。; 胡俊吴亚光史树贵谭浩李露斯陈康宁范文辉张良刘媛龙在云曾琳; 关键词：肌萎缩侧索硬化症神经元

一个ALS家系突变SOD1的表达及其空间构象的分析被引量：1: 2009年; 目的:对一个肌萎缩侧索硬化症(Amyotrophic lateral sclerosis,ALS)家系的突变铜、锌超氧化物歧化酶(Cu/Zn su-peroxide dismutase,SOD1)基因进行研究,了解其与野生型SOD1在不同部位神经组织中表达的差异性。采用软件进行模建,对突变SOD1蛋白质的二、三级结构进行预测和分析。方法:采用Northern杂交对突变SOD1 mRNA进行分析;克隆出突变SOD1 cD-NA和野生型SOD1 cDNA,采用含有人多种神经组织mRNA的预制Northern杂交膜,了解突变SOD1与野生型SOD1在不同部位神经组织中表达的差异性;采用软件对突变蛋白质的二、三级结构进行模建分析。结果:Northern blot分析证实2号外显子mRNA缩短。野生型和突变的SOD1基因具有相似的组织表达差异性,在大脑皮层表达最高,在脊髓表达最弱。突变后的SOD1蛋白质二级、三级结构与野生型SOD1基本相似。结论:突变后SOD1酶活性的功能下降可能是引起该家系发病的原因,SOD1基因在不同神经组织表达的差异性,可能是该家系ALS患者临床表现以下运动神经元损害为主的原因。; 胡俊吴亚光王峰超李露斯陈康宁史树贵; 关键词：肌萎缩侧索硬化症铜锌超氧化物歧化酶空间构象

突变的SOD1 cDNA与人MAP/MARK1片段在人胚肾293细胞中的相互作用: 2007年; 目的用酵母双杂交方法显示突变的SOD1cDNA与人MAP/MARK1的片段结合,进一步探讨二者能否在哺乳动物表达系统人胚肾293细胞中发生相互作用,以验证酵母双杂交的结果。方法采用PCR方法及双酶切的方法构建含突变SOD1cDNA片段的真核表达质粒pCMV-Myc和含人MAP/MARK1的片段真核表达质粒pCMV-HA,分别或共同转染人胚肾293细胞,进行免疫共沉淀检测。结果免疫共沉淀结果表明,重组含突变的SOD1cDNA质粒pCMV-Myc分别与空载体pCMV-Myc、pCMV-HA共转染,免疫沉淀物中均未检测到结合蛋白,只有重组含突变SOD1cDNA真核表达质粒pCMV-Myc与重组含人MAP/MARK1的片段真核表达质粒pCMV-HA共转染时,在免疫沉淀物中能检测到结合蛋白,表现在蛋白免疫印迹上有特异性目的条带。结论突变的SOD1cDNA与人MAP/MARK1片段在人胚肾293细胞中存在蛋白水平的相互作用。; 陈桂生史树贵李露斯陈康宁袁顺宗彭旭吴军罗高兴; 关键词：CDNA 免疫共沉淀相互作用

肌萎缩侧索硬化症家系铜锌超氧化物歧化酶基因突变位点的检测被引量：4: 2005年; 目的:检测一个具有特殊临床表型的肌萎缩侧索硬化症(ALS)家系的铜、锌超氧化物歧化酶(SOD1)基因突变位点,同时比较单链构象多态性(SSCP)和变性高效液相色谱法(DHPLC)的实用价值。方法:采用SOD1基因的5对引物对部分家系成员基因组DNA进行PCR扩增,分别采用SSCP和DHPLC分析各外显子的多态性,异常样本进行DNA直接测序。结果:①两种方法均发现家系成员Ⅱ5、Ⅲ1、Ⅲ3、Ⅲ13、Ⅲ20、Ⅳ1、Ⅳ20的第2外显子和家系成员Ⅲ1、Ⅲ11、Ⅲ20第5外显子存在突变,直接测序证实第2外显子编码区和第5外显子非编码区均插入了一个碱基A。②DHPLC还发现家系成员Ⅲ1的第4外显子有杂合子色谱,直接测序证实其第4外显子存在杂合子,发生了GAA→GGA错义突变。结论:①该家系SOD1基因第2、4、5外显子均存在突变,第2外显子的突变可能是引起该家系发病的原因。②DHPLC技术与PCR-SSCP相比有更高的敏感性,可作为大样本筛查突变位点的一种便捷、可靠的手段。; 胡俊史树贵李露斯吴玉章倪兵; 关键词：肌萎缩侧索硬化症铜锌超氧化物歧化酶变性高效液相色谱法

变性高效液相色谱法检测单核苷酸多态性的研究进展被引量：5: 2005年; 胡俊史树贵李露斯; 关键词：变性高效液相色谱法单核苷酸多态性 DNA多态性 SNPS 单碱基突变

神经系统疾病与超氧化物歧化酶被引量：8: 2005年; 目的:认识国内外有关自由基在脑缺血再灌注、家族性肌萎缩侧索硬化症、帕金森病及阿尔茨海默病上的作用,探讨超氧化物歧化酶在治疗和预防多种神经系统病变发生中的重要意义。资料来源:应用计算机检索Medline1997-01/2004-08与超氧化物歧化酶和神经系统疾病相关的文献,检索词“superoxidedismutase,familialamyotrophiclateralsclerosis,Parkinson’sdisease,Alzheimer’sdisease”,并限定文献语种为English。同时计算机检索万方数据库2002-01/2004-08的相关文献,检索词“超氧化物歧化酶,脑缺血再灌注,家族性肌萎缩侧索硬化症,帕金森病,阿尔茨海默病”,并限定语种为中文。资料选择:就检索到的120余篇文献进行筛选,选择以超氧化物歧化酶和相应神经系统疾病为主要研究内容的文献20多篇,筛除明显无关文献或相关性不强的文献,对剩余文献开始查找全文,进一步明确其相关性。纳入标准:随机对照研究;实验或临床研究包含平行对照组。排除标准:重复性研究和综述类文章。资料提炼:将筛选到的20余篇文献按超氧化物歧化酶和相应神经系统疾病分类:其中6篇与脑缺血再灌注相关,8篇与家族性肌萎缩侧索硬化症相关,5篇与帕金森病相关,7篇与阿尔茨海默病有关。资料综合:20余篇文献共包括650例患者(或实验动物),说明了在多种神经系统疾病中由于体内超氧阴离子自由基水平的增加,引发生物膜的脂质过氧化反应,造成DNA氧损伤,导致多种退行性神经病变的发生,超氧化物歧化酶可以清除超氧阴离子自由基对细胞的这种损害。结论:超氧化物歧化酶作为一种重要的抗氧化酶,在多种神经系统病变的发生中有着重要的意义。; 胡俊史树贵李露斯; 关键词：超氧化物歧化酶神经系统疾病

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国家自然科学基金(30300116)

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