国家自然科学基金(30872977)
- 作品数：13 被引量：28H指数：3
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- 超声微泡介导HSV1-TK／GCV自杀基因系统对人肝癌细胞株HepG2的杀伤作用被引量：3
- 2011年
- 目的观察超声微泡（UM）介导HSV1-TK／GCV自杀基因系统对人肝癌细胞株HepG2的杀伤效率。方法将HepG2接种在培养板中，随机分为以下5组：（A）空白对照组；（B）单纯质粒组；（c）超声微泡＋质粒组；（D）超声＋质粒组；（E）超声＋超声微泡＋质粒组。转染后24h，荧光显微镜观察各组细胞绿色荧光的表达，流式细胞仪检测各组细胞的转染效率，噻唑蓝（MTT）比色法检测转染方法对HepG2活性的影响，Westernblot法检测各组细胞的TK蛋白表达；转染后24h，各组细胞加入0．0．1、1．0、10．0、50．0、100．0、500．0、1000．0mg／L共8个浓度梯度的前药更昔洛韦（GCV），72h后MTY法检测各组细胞的存活率。结果荧光显微镜下E组的绿色荧光强度明显高于其他各组；流式细胞仪检测基因转染率分别为0％、0．39％、0．61％、1．10％、36．00％，荧光定量聚合酶链反应（PCR）检测提示E组tkmRNA相对表达量为1．13，是其余各组的7～9倍，Westernblot条带灰度分析显示E组TK蛋白的明显高于其他各组（P〈0．05）；转染方法对HepG2细胞活性无明显影响（P〉0．05）；GCV浓度在50mg／L以上培养72h后，低频超声＋超声微泡＋质粒组细胞几乎全部被杀灭，存活率为0，杀伤效应最强（P〈0．05），其余各组几乎无杀伤作用。结论超声破坏微泡造影剂可提高HSV1-TK基因在HepG2中的转染和表达，增强HSV1-TK／GCV自杀基因系统对肝癌细胞的杀伤效应，而超声辐照和微泡造影剂在转染过程中对细胞的活性无影响。
- 唐勇何建峰周世骥刘长安龚建平刘作金
- 关键词：超声造影剂HSV1-TK/GCV
- 聚焦超声治疗肝细胞肝癌的免疫学机制及进展被引量：2
- 2010年
- 肝癌是目前世界上常见的恶性肿瘤之一,据我国卫生部1995年统计资料显示,肝癌年死亡率为0.02%,居第二位,且有上升趋势.手术治疗一直是肝癌综合治疗的主要手段.近10余年来,随着超声学治疗学的飞速发展,新兴起的高强度聚焦超声（HIFU）作为一种无创性非手术疗法,利用瞬态高温、空化和机械效应杀死肿瘤细胞的新手段越来越引起重视,并在实验研究和临床应用方面取得了一定进展.有文献显示,HIFU治疗肝癌可改善机体的免疫紊乱状态,促进局部组织中的细胞免疫反应.本文将对聚焦超声在肝细胞肝癌的免疫治疗中的机制及免疫学进展进行阐述.
- 汪伟民李生伟
- 关键词：肝细胞肝癌聚焦超声树突状细胞免疫学
- 局部物理治疗肝癌的研究进展被引量：1
- 2009年
- 局部物理治疗肝癌近年快速发展并在国内广泛应用于临床，取得良好的效果，是目前肝癌治疗领域研究和应用的热点之一。本文就目前常用的局部物理治疗肝癌的方法作一综述。
- 唐勇刘长安朱辉
- 关键词：肝肿瘤物理治疗
- 全反式维甲酸增强携单纯疱疹病毒胸苷酸激酶基因的超声微泡对SMMC-7721细胞的旁观者效应被引量：2
- 2011年
- 目的观察经全反式维甲酸(all-trans retinoic acid,ATRA)诱导后,单纯疱疹病毒胸苷酸激酶/丙氧鸟苷系统(HSV-TK/GCV)对人肝癌细胞SMMC-7721旁观者效应的影响。方法免疫组化法观察经全反式维甲酸诱导前后SMMC-7721细胞连接蛋白Cx32的表达;将含有HSV-TK基因的质粒通过静电吸附在脂质微泡表面上,采用超声辐照转染并用倒置显微荧光镜及RT-PCR观察TK基因的转入及表达;MTT法观察经全反式维甲酸诱导后HSV-TK/GCV对肝癌细胞SMMC-7721的旁观者效应。结果经全反式维甲酸诱导后SMMC-7721细胞膜上Cx32表达明显增加,而胞质内仅少量表达;通过超声辐照后HSV-TK基因可顺利转入SMMC-7721细胞中并稳定表达;与对照组相比,经全反式维甲酸诱导组可明显提高HSV-TK/GCV对肝癌细胞SMMC-7721的旁观者效应(P<0.05)。结论全反式维甲酸可提高SMMC-7721细胞中连接蛋白Cx32的表达且能正确定位于细胞膜上,这可能与其能增强HSV-TK/GCV系统对肝癌细胞SMMC-7721的旁观者效应有关。
- 廖伟李生伟刘长安龚建平丁雄蔡宇周世骥
- 关键词：维甲酸超声微泡连接蛋白32
- HIFU联合包裹单纯疱疹病毒-胸苷激酶的超声微泡治疗对兔VX2肝移植瘤血管生成的影响被引量：3
- 2011年
- 目的观察高强度聚焦超声(High-intensity focused ultrasound,HIFU)联合包裹单纯疱疹病毒-胸苷激酶(Herpessimplex virus-thymidine kinase,HSV-TK)的超声微泡(Ultrasound microbubble)治疗对兔VX2肝移植瘤中缺氧诱导因子-1α(Hy-poxia inducible factor-1α,HIF-1α)、血管内皮生长因子(Vascular endothelial growth factor,VEGF)基因表达及微血管密度(Mi-crovascular density,MVD)的影响,并探讨其机制。方法复制兔VX2肝移植瘤模型,建模4周后,将荷瘤兔随机分为4组:对照组(A组),HIFU组(B组),超声辐照载基因微泡组(C组)和HIFU联合超声辐照载基因微泡组(D组)。治疗后两周观察肿瘤大小,免疫组化法检测肿瘤组织中HIF-1α和VEGF蛋白的表达及MVD,Real-time PCR检测肿瘤组织中HIF-1α和VEGF基因mRNA的转录水平。结果治疗后2周,B、C、D组肿瘤组织中HIF-1α、VEGF蛋白表达量,基因mRNA转录水平,MVD及肿瘤体积均明显低于A组(P<0.05),且D组明显低于B组和C组(P<0.05)。结论 HIFU联合包裹HSV-TK基因的超声微泡治疗可抑制肿瘤生长及肿瘤血管新生,降低残余瘤区HIF-1α和VEGF基因的表达,提高HIFU的疗效。
- 艾志国周世骥徐越唐勇刘长安李生伟
- 关键词：超声微泡单纯疱疹病毒-胸苷激酶血管生成
- 全反式维甲酸增强超声微泡包裹的单纯疱疹病毒胸苷激酶自杀基因治疗荷肝癌裸鼠的效果被引量：3
- 2011年
- 目的探讨全反式维甲酸(all-trans retinoic acid,ATRA)能否提高微泡包裹的单纯疱疹病毒胸苷激酶(herpes simplex virus thymidine kinase,HSV-TK)自杀基因对肝癌的体内治疗作用。方法用人肝癌SMMC-7721细胞建立皮下裸鼠移植瘤模型,先检测不同剂量ATRA的抗肿瘤效应;再用ATRA联合基因治疗,实验分4组:磷酸盐缓冲液组、ATRA组、HSV-TK组、联合治疗组,各组测量肿瘤体积,计算抑瘤率,Western blot检测输注的目的基因质粒的表达,HE染色行病理学观察,免疫组化法检测连接蛋白Cx32的表达。结果 ATRA在1 mg/kg下无抗肝癌作用,但≥4 mg/kg即具有明显抗肝癌效应;抑瘤率在磷酸盐缓冲液组、ATRA组、HSV-TK组、联合治疗组分别为0、(7.46±7.25)%、(37.65±3.87)%、(59.04±3.08)%,联合治疗组分别与磷酸盐缓冲液组、ATRA组、HSV-TK组比较,差异有统计学意义(P<0.05)。HE结果显示:采用ATRA联合基因治疗后,肿瘤坏死细胞明显较对照组多,免疫组化结果显示:ATRA处理过的组织中,Cx32蛋白表达增加,且以胞膜表达为主。结论 ATRA具有抗肝癌作用;ATRA能增强超声微泡包裹的HSV-TK自杀基因杀伤肝癌的效果,其可能机制与ATRA促进了Cx32蛋白的正常表达有关。
- 蔡宇廖伟周世骥唐勇龚建平刘长安李生伟
- 关键词：全反式维甲酸单纯疱疹病毒胸苷激酶基因超声微泡连接蛋白32
- 高强度聚焦超声联合单纯疱疹病毒胸苷激酶/丙氧鸟苷自杀基因治疗对VX2荷瘤兔免疫力的影响
- 2011年
- 目的探讨高强度聚焦超声(high intensity focused ultrasound,HIUF)联合单纯疱疹病毒胸苷激酶/丙氧鸟苷(HSV-tk/GCV)治疗对VX2荷瘤兔的肿瘤免疫耐受和特异性抗肿瘤免疫的影响。方法将40只实验兔按随机数字表法分为对照组、肿瘤组、HIFU组和联合治疗组,每组10只,其中HIFU组给予HIFU单独治疗,联合组给予HIFU和HSV-tk/GCV联合治疗。于治疗后第13天流式细胞术检测各组兔外周血CD4+CD25+Treg(Treg)细胞的数量变化情况,ELISA法检测外周血血浆IL-10,TGF-β的浓度,MTT法检测兔脾淋巴细胞对VX2肿瘤细胞的体外杀伤活性。结果肿瘤组外周血Treg细胞数量[(8.30±0.69)%]、IL-10水平[(67.82±4.52)pg/ml]和TGF-β水平[(6.55±0.45)μg/ml]相对于对照组[(5.30±0.45)%、(54.58±3.53)pg/ml、(5.51±0.27)μg/ml]均显著升高(P<0.01);HIFU组Treg细胞数量[(7.00±0.56)%]、IL-10水平[(60.32±4.70)pg/ml]、TGF-β水平[(6.22±0.19)μg/ml]明显低于肿瘤组(P<0.01,P<0.05);联合治疗组Treg细胞数量[(6.40±0.72)%]和TGF-β水平[(5.86±0.31)μg/ml]低于HIFU组(P<0.05),而IL-10水平[(58.79±4.42)pg/ml]变化则无统计学意义(P>0.05)。杀伤实验显示HIFU组和联合治疗组脾淋巴细胞对VX2肿瘤细胞的杀伤活性分别为(31.62±3.09)%、(29.48±2.68)%,明显高于对照组[(13.94±2.45)%]和肿瘤组[(12.00±2.96)%](P<0.01),但联合治疗组和HIFU组的比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论 HIFU联合HSV-tk/GCV治疗后,宿主肿瘤免疫耐受情况得到改善,特异性抗肿瘤免疫力增强。
- 徐越周世骥艾志国陈勇李生伟刘长安
- 关键词：HIFUHSV-TK/GCVTREG肿瘤免疫
- 自杀基因旁观者效应的研究进展被引量：1
- 2010年
- 目前世界上威胁人类健康常见的疾病之一仍然是肿瘤,人类针对肿瘤进行着孜孜不倦的研究,目前在肿瘤治疗方面,基因治疗是一个较为有前途的治疗手段,其中肿瘤自杀基因疗法是研究最为广泛的,而旁观者效应在肿瘤自杀基因疗法中起着相当重要的作用,因此,为提高自杀基因杀伤肿瘤效果,部分研究者从增强旁观者效应方面做了许多研究.故本文从增强自杀基因旁观者效应治疗肿瘤方面做一综述.
- 蔡宇刘长安李生伟
- 关键词：自杀基因疗法旁观者效应肿瘤
- 超声微泡包裹单纯疱疹病毒Ⅰ型胸苷激酶自杀基因靶向治疗小鼠肝癌的效果被引量：1
- 2010年
- 目的观察超声微泡携单纯疱疹病毒Ⅰ型胸苷激酶（HSV1-TK）基因在小鼠肝癌细胞H22移植瘤组织中的转染效果及联合更昔洛韦（CCV）后对肿瘤的抑瘤效应。方法建立小鼠肝癌（H22）皮下移植瘤模型40只，随机分成4组，分别经鼠尾静脉注射入等量磷酸盐缓冲液（A组）、HSV1-TK（B组）、HSV1-TK（C组）、HSV1-TK＋做泡（D组），每次注射200μl，每隔3d注射1次，共注射3次；对C组、D组小鼠分别给予1MHz、2W／cm^2、5min超声辐照。首次注射HSV1 TK48h后采用Western blot检测肿瘤组织中TK蛋白的表达情况，且各治疗组分别从腹腔注射GCV0．2ml（100mg·kg^-1·d^-1），连续注射14d。测肿瘤大小，计算抑瘤率，治疗结束后处死动物行病理学检查。数据采用重复测量资料的方差分析，两两比较采用LSD—t法。结果在超声引导下微泡包裹的HSV1-TK基因可以准确定位于肿瘤组织并靶向释放，在处理组中均有TK蛋白的表达，其中D组表达量明显高于其他各组（P〈0．05）。抑瘤率在A组、B组、C组、D组中分别为0、3．90％±1．80％、22．70％±2．86％、41．25％±3．20％（C组、D组与B组相比，P值均〈0．05；D组与C组相比，P〈0．05）。HE染色结果显示D组较A组的坏死病变程度明娃减轻。结论超声辐照可破坏包裹HSV1-TK基因的微泡以定位释放，既增加了肝癌基因治疗的靶向性，又提高了外源基因的转染效率，从而增强了自杀基因对小鼠肝癌的杀伤效果。
- 周世骥刘长安龚建平刘作金唐勇李生伟徐越艾志国
- 关键词：肝细胞基因HSV1-TK超声微泡
- 携SiRNA的聚乳酸羟基乙酸微球对Bel-7402/5-Fu细胞MDR1基因沉默作用的研究被引量：1
- 2012年
- 目的探讨携SiRNA的聚乳酸羟基乙酸(PLGA)微球通过沉默肝癌耐药细胞多药耐药基因(MDR1)基因,实现肝癌耐药的逆转。方法合成针对MDR1的RNA干扰小片段(SiRNA),通过超声复乳法制备携药微球,转染肝癌耐药细胞Bel-7402/5-Fu。运用Real-timePCR与Westernblot方法,通过检测其mRNA及P糖蛋白表达水平,评价RNA干扰对MDR1表达的影响。MTT法检测RNA干扰逆转Bel-7402/5-Fu细胞耐药性的效果,通过实验组细胞和对照组细胞之间的半数抑制剂量(IC_(50)),计算RNA干扰组细胞的耐药逆转倍数。结果在肝癌耐药细胞Bel-7402/5-Fu中,RNA干扰明显抑制了MDR1mRNA和蛋白产物P糖蛋白的表达水平,且出现了P糖蛋白的持续低表达。MTT法显示,相同药物浓度下,实验组细胞生长明显受到抑制,表明其耐药性明显下降,其耐药逆转倍数为11.56。结论携SiRNA的PLGA微球能够有效减少肝癌耐药细胞Bel-7402/5-Fu的MDR1mRNA及P糖蛋白的表达水平,降低其耐药性。
- 张雷刘长安印国兵秦易王宗鼎
- 关键词：小分子干扰P糖蛋白微球体
