上海市自然科学基金(98ZB14028)
- 作品数：12 被引量：14H指数：2
- 相关作者：林言箴顾琴龙朱正纲刘炳亚姬舒荣更多>>
- 相关机构：上海交通大学医学院附属瑞金医院同济大学附属同济医院上海第二医科大学附属第九人民医院更多>>
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- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- TK基因/9-丙氧鸟苷联合mGM-CSF基因治疗胃癌被引量：2
- 2000年
- 目的 观察自杀基因TK对小鼠胃癌的杀伤作用 ,并联合mGM CSF基因 ,观察免疫反应在增强TK杀伤性中的作用。方法 应用逆转录病毒方法转导自杀基因TK ,应用脂质体方法转导细胞因子基因mGM CSF。观察TK基因体外对小鼠胃癌 6 15小鼠前胃癌 (MFC)细胞的杀伤性和旁观者效应 ;体内实验中将病毒上清注入瘤体内 ,并结合应用其前药 9 丙氧鸟苷 (GCV)和mGM CSF基因 ,分别观察肿瘤的生长情况。通过病理切片观察肿瘤病理变化 ;应用酶联免疫吸附试验 (ELISA)方法测定 40只小鼠mGM CSF的产量。结果 2 0 %的转TK基因细胞可以杀伤 70 %～ 80 %以上的肿瘤细胞。体内实验表明TK基因结合GCV可显著杀伤肿瘤 ,而TK基因本身并无杀伤作用 (P <0 .0 5 )。联合mGM CSF后肿瘤体积显著缩小 ,4只小鼠肿瘤完全消退 ,与TK/GCV比较差异有非常显著性 (P <0 .0 1)。结论 TK基因联合GCV对小鼠胃癌产生显著杀伤作用 ,不仅转基因细胞被杀死 ,而且通过旁观者效应杀伤大量周围细胞。细胞因子基因mGM CSF可增强TK的抗肿瘤作用。
- 郭善禹顾琴龙朱正纲尹浩然林言箴
- 关键词：胃癌基因治疗
- TK基因联合GCV治疗胃癌的实验被引量：1
- 2000年
- 胃癌是威胁人类最常见的恶性肿瘤之一,目前的治疗方法主要是手术和化疗.但对中晚期胃癌的疗效却欠理想.基因治疗为恶性肿瘤的治疗开辟了新的途径.自杀基因(suicide gene)为目前研究较多的基因.TK 基因(单纯疱疹病毒胸苷激酶基因 herpes simplx virus-thymidine kinase,HSV-TK)即为自杀基因之一,它能将其作用的前药9-丙氧鸟苷(ganciclovir,GCV)转化为磷酸化.GCV,干扰细胞 DNA 合成,导致转基因细胞的死亡.但自杀基因抗肿瘤更重要的作用是通过产生旁观者效应(bystander effect),所谓旁观者效应就是不仅转基因细胞被杀死,同时伴有周围大量未转基因的细胞亦被杀死.我们构建 TK 基因逆转录病毒表达载体,体外转染胃癌细胞株,检测其体外杀伤性.并通过转染小鼠模型胃癌,研究其体内抗肿瘤作用.1材料和方法1.1材料 TK 基因通过酶切位点 EcoRⅠ和 BamHⅠ构建于逆转录病毒载体 pLxSN.应用 PA317细胞包装逆转录病毒,培养液为 DMEM.NIH3T3为小鼠成纤维细胞,用作病毒滴度的测定.MFC 细胞为615小鼠前胃癌细胞,培养基为 DMEM,含小牛血清,置37℃培养箱培养.应用脂质体方法(按说明)将逆转录病毒质粒转染 PA317细胞,并用 G418筛选,收集含病毒上清.用 NIH3T3细胞测定病毒滴度.病毒上清经测定滴度,最高为1×10~8cfu·L^(-1).
- 杜宽航郭善禹龚鼎铨顾琴龙朱正纲尹浩然林言箴
- 关键词：胃肿瘤自杀基因TK基因
- CD基因联合5-Fc治疗人胃癌的实验研究被引量：1
- 2001年
- 目的:通过转基因方法观察自杀基因CD对人胃癌细胞株7901的体内外杀伤作用,并观察组织病理变化。方法:应用逆转录病毒方法转导自杀基因CD,通过体外实验观察CD基因对人胃癌7901细胞的杀伤性和旁观者效应;体内实验中首先在BALB/cnu/nu裸鼠建立胃癌模型,然后将病毒上清注入瘤体内,并结合应用前药,观察肿瘤体积变化通过病理切片观察组织病理变化。结果:CD基因在体外即显出明显的杀伤作用(含旁观者效应),20%的转基因细胞可以杀伤70%～80%的肿瘤细胞。在实验动物体内,CD基因结合前药5Fc可显著杀伤肿瘤,而单纯转导CD基因和只应用5Fc并不能起到杀伤作用。结论:自杀基因CD联合前药5Fc对胃癌产生显著杀伤作用,不仅转基因细胞被杀死,而且通过旁观者效应杀伤大量周围细胞。CD/5Fc在体内试验对胃癌有显著杀伤作用。
- 郭善禹顾琴龙朱正纲尹浩然林言箴
- 关键词：胃癌自杀基因逆转录病毒CD基因
- 荷胃癌小鼠自杀基因治疗后宿主免疫功能观察
- 2000年
- 目的研究自杀基因疗法是否能诱导肿瘤宿主产生免疫应答。 方法将小鼠前胃癌细胞株 (MFC)接种于小鼠背部制作肿瘤模型 ,以单纯疱疹病毒胸苷激酶基因 (HSV -tk)和大肠杆菌胞嘧啶脱氧基酶基因 (CD)注射于瘤体内 ,并于瘤体周围注射mIL - 2和mGM -CSFDNA及向腹腔内注射前药 9-丙氧乌苷 (GVC)和 5 -Fc。治疗第5周取肿瘤消退小鼠的脾细胞测自然杀伤细胞 (NK)和LAK活性 ;第 12周取PBL和脾细胞测NK和细胞毒细胞(CTL)活性。 结果在TK/CD基因联合细胞因子及前药治疗后第 5周 ,实验组脾细胞NK和LAK活性均明显高于荷瘤鼠对照 (P <0 .0 1)。 12周后 ,实验组PBL的NK和CTL活性均显著高于正常对照组 (P =0 .0 5 ,P <0 .0 1) ;而脾细胞NK活性与对照组无显著差异 (P >0 .0 5 )。 结论自杀基因疗法能较长时间提高宿主抗肿瘤免疫反应。
- 顾琴龙纪玉宝姬舒荣郭善禹林言箴
- 关键词：胃肿瘤基因治疗肿瘤免疫
- CD/5-FC系统对小鼠胃癌细胞杀伤作用的研究
- 2002年
- 目的 探讨CD5-FC自杀基因系统对小鼠胃癌细胞的体外杀伤作用及其机制。方法以逆转录病毒载体介导CD基因转导小鼠胃癌细胞株MFC,采用MTT法测定CD5-FC系统的体外杀伤作用及其“旁观者”效应;利用Hoechst33258荧光染色法、琼脂糖凝胶电泳法检测凋亡细胞,同时采用半定量RT-PCR技术检测凋亡相关基因的表达。结果转导CD基因可使MFC对5-FC高度敏感,并且显示出强大的“旁观者”效应。经5-FC作用后,荧光染色可见到典型的凋亡细胞核形态学改变,琼脂糖凝胶电泳出现典型的DNA梯度,同时发现凋亡相关基因bcl-2基因表达下调,而bax与caspase-3基因表达上调。结论CD5-FC自杀基因系统对小鼠胃癌细胞MFC具有强大的杀伤作用。
- 姬舒荣刘晖张奕顾琴龙刘炳亚朱正纲林言箴
- 关键词：CD/5-FC系统小鼠胃癌细胞杀伤作用自杀基因系统
- UPRT基因修饰对肿瘤细胞化疗增敏性的研究
- 2002年
- 5-FU是临床上应用最广泛的抗肿瘤化疗药物之一,但总体疗效仅为20％～30％,其毒副反应高,疗效不理想是妨碍其更广泛采用的主要原因。多年来,人们尝试通过改变给药方法和途径、采用生物调节剂以及改变其分子结构来提高其疗效,取得了一定的效果。近年来研究发现,通过转导外源药敏基因,可提高肿瘤细胞对化疗药物的敏感性。本研究拟以尿嘧啶磷酸核糖转移酶(UPRT)基因修饰肿瘤细胞,探讨UPRT基因修饰肿瘤细胞对5-FU的增敏效应。
- 姬舒荣张奕顾琴龙陈雪华刘炳亚朱正纲林言箴
- 关键词：基因修饰肿瘤细胞化疗增敏性
- 基因修饰对消化道肿瘤细胞化疗药敏感性的影响
- 2003年
- 目的:探讨UPRT基因修饰消化道肿瘤细胞后对5-氟脲嘧啶(5-FU)杀伤效应的增强作用。方法:采用PCR技术从大肠杆菌K12菌株基因组中扩增UPRT基因,并构建pLXSN逆转录病毒表达载体,进一步转染人胃癌细胞株SCG7901、大肠癌细胞株Lovo以及肝癌细胞株7721。采用MTT法检测转导UPRT基因前后,肿瘤细胞对5-FU敏感性的变化。结果:通过逆转录病毒载体介导UPRT基因修饰肿瘤细胞,体外MTT法检测结果显示,转导UPRT基因后可使SCG7901、Lovo及7721对5-FU的敏感性分别提高约21.07、30.25及35.19倍。结论:UPRT基因修饰肿瘤细胞,能明显提高其对5-FU杀伤的敏感性,增强5-FU的抗瘤效应。
- 姬舒荣张奕顾琴龙陈雪华刘炳亚朱正纲林言箴
- 关键词：消化道肿瘤5-氟脲嘧啶
- 联合胞嘧啶脱胺酶与尿嘧啶磷酸核糖转移酶基因治疗小鼠胃癌被引量：2
- 2003年
- 目的探讨联合应用尿嘧啶磷酸核糖转移酶(UPRT)基因对胞嘧啶脱胺酶(CD)/氟胞嘧啶(5-FC)前药转换酶系统抗瘤作用的增强效应。方法将携带UPRT基因和CD基因的逆转录病毒载体通过PA317细胞包装成完整的病毒颗粒并浓缩和纯化。建立615小鼠胃癌皮下移植瘤模型,瘤内反复多次注射携带UPRT和CD基因的逆转录病毒,同时腹腔内给予5-FC,观察抑瘤效果。结果逆转录病毒介导CD基因瘤内原位转导,同时联合应用5-FC进行治疗,结果发现,在肿瘤接种后第12天,对照组肿瘤体积为(2.367±0.371)cm3,而CD/5-FC治疗组肿瘤体积大小为(0.704±0.358)cm3,肿瘤生长明显受抑(P<0.0005)。联合转导UPRT基因后,于肿瘤接种后第16天,肿瘤体积为(0.731±0.255)cm3,而单独应用CD基因治疗组肿瘤体积为(1.455±0.370)cm3,从而证实联合转导UPRT基因可进一步增强CD/5-FC自杀基因系统的抑瘤作用(P<0.001)。结论联合转导UPRT基因,可显著增强CD/5-FC自杀基因系统的抗瘤效应。
- 姬舒荣张奕顾琴龙刘炳亚朱正纲林言箴
- 关键词：胃肿瘤尿嘧啶磷酸核糖转移酶基因治疗
- CD基因联合mIL-2/mGM-CSF基因治疗胃癌的研究被引量：3
- 2000年
- 目的 :观察CD基因联合mIL 2 /mGM CSF基因对小鼠胃癌的治疗作用。方法 :CD基因构建于逆转录病毒载体pLxSN ,mIL 2和mGM CSF基因构建于pIRES。先用CD/ 5 FC治疗胃癌细胞株 ,然后联合mIL 2 /mGM CSF两种细胞因子基因治疗小鼠模型胃癌 ,以期产生显著的抗肿瘤作用。RT PCR检测基因表达。结果 :体外结果显示 2 0 %的转基因细胞即可杀灭70 %～ 80 %的肿瘤细胞。动物实验结果表明 ,应用CD/ 5 Fc ,即可产生很强的抗肿瘤作用。结合mIL 2 /mGM CSF两种细胞因子基因 ,抗肿瘤作用会得到进一步强化 ,肿瘤消退速度明显加快 ,大部分肿瘤完全消退。RT PCR结果显示 ,CD基因和mIL 2 ,mGM CSF基因均能在组织中表达。结论 :CD/ 5 Fc能够杀灭肿瘤细胞 ,具有显著抗肿瘤作用。联合IL 2 /GM CSF后 ,抗肿瘤作用会得到进一步强化 ,产生明显的抗肿瘤效应。应用病毒和脂质体方法转染自杀基因和细胞因子基因 。
- 郭善禹顾琴龙刘炳亚朱正纲尹浩然林言箴
- 关键词：胃癌基因治疗CD基因
- 大肠杆菌胞嘧啶脱氨基酶基因联合5-氟胞嘧啶治疗胃癌的实验研究被引量：1
- 2001年
- 目的 观察自杀基因 CD对小鼠胃癌的体内外杀伤作用及组织病理变化。方法 应用逆转录病毒方法转导自杀基因 CD,通过体外实验观察 CD基因对小鼠胃癌 MFC细胞的杀伤性和旁观者效应 ;体内实验中首先在 6 15小鼠建立胃癌模型 ,然后分组将病毒上清注入瘤体内 ,并应用前药 (5 -氟胞嘧啶 ,5 - Fc) ,观察对肿瘤的杀伤作用及组织病理变化。结果 CD基因在体外即显出明显的杀伤作用 ,2 0 %的转基因细胞可以杀伤 70 %～ 80 %以上的肿瘤细胞。体内实验表明 CD基因结合前药 5 - Fc可显著杀伤肿瘤 ,而单纯转导 CD基因或应用 5 - Fc并不能起到杀伤作用。结论 自杀基因 CD联合前药 5 - Fc对体内外小鼠胃癌细胞产生显著杀伤作用 ,不仅转基因细胞被杀死 。
- 郭善禹顾琴龙朱正纲尹浩然林言箴
- 关键词：胃肿瘤基因治疗CD基因逆转录病毒
