辽宁省科学技术计划项目(2003225007)
- 作品数：11 被引量：31H指数：3
- 相关作者：刘学政马腾萧鸿刘丽波左中夫更多>>
- 相关机构：辽宁医学院锦州医学院辽宁医学院附属第一医院更多>>
- 发文基金：辽宁省科学技术计划项目辽宁省优秀青年科技人才培养基金辽宁省自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 人血管生成素-1基因真核表达载体的构建及其在人脐带间充质干细胞中的表达被引量：3
- 2010年
- 目的构建人血管生成素-1(Ang-1)基因的真核表达载体,并检测其在人脐带间充质干细胞(UC-MSCs)中的表达,为进一步研究Ang-1防治糖尿病视网膜病变(DR)的血管渗漏提供实验依据。方法提取人胎盘组织中的总RNA,用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)特异性扩增Ang-1编码区序列,亚克隆到真核表达载体pEGFP-N1。将pEGFP-N1-Ang-1导入UC-MSCs,然后应用含质量分数10%胎牛血清的DMEM培养基对人UC-MSCs进行培养,荧光显微镜下观察Ang-1在人UC-MSCs中的表达,Western blot法检测重组体的表达。结果 RT-PCR法成功克隆人Ang-1基因编码区序列,纯度为1.82;PCR扩增的片段长度为1.5 kb,与预期片段大小相近。双酶切鉴定法可识别重组pEGFP-N1-Ang-1转染质粒,目的基因与预期基因序列的同源性为100%。人UC-MSCs转染的pEGFP-N1/Ang-1质粒能够表达Ang-1蛋白,呈现绿色荧光。转染pEGFP-N1的人UC-MSCs和对照组人UC-MSCs均未见相应的Ang-1蛋白表达。结论成功地克隆出人的Ang-1基因并构建了真核表达载体pEGFP-N1-Ang-1,为将Ang-1基因转染至人UC-MSCs治疗DR奠定了基础。
- 萧鸿刘帅李群秀张克剑侯阳宋慧娟刘学政
- 关键词：人血管生成素-1PEGFP-N1人脐带间充质干细胞
- Ang-1对高糖环境中猴脉络膜-视网膜内皮细胞单层通透性的影响被引量：1
- 2009年
- 目的:利用猴脉络膜-视网膜内皮细胞建立内皮细胞(EC)单层模型,观察高浓度葡萄糖及血管生成素-1(Ang-1)对该模型通透性的影响.方法:待EC于孔径0.8μm的聚碳酸酯微孔滤膜上形成致密单层后分3组进行培养:对照组(DMEM培养基含25 mmol/L葡萄糖)、高糖组(DMEM培养基含30 mmol/L葡萄糖)、Ang-高糖组(DMEM培养基含30mmol/L葡萄糖+0.25 mg/L Ang-1).于1,3,5,7 d 4个时间点,以含白蛋白1 g/L的D-Hanks液灌注滤膜,检测蛋白质渗透压反射系数(δ)及滤过系数(Kf);并于5 d和7 d利用琼脂糖凝胶电泳检测DNA ladder.结果:3,5,7 d时,高糖组EC单层的通透性高于对照组(P<0.01);Ang-高糖组与对照组之间EC单层的通透性无差异(P>0.05).高糖组EC的琼脂糖凝胶电泳在5 d及7 d均出现DNA ladder,对照组及Ang-高糖组未见DNA ladder.结论:高糖能够促进细胞凋亡,增加EC单层通透性;Ang-1能抑制EC的凋亡,对抗高糖所致的EC单层通透性增高.
- 萧鸿左中夫冯闯刘学政
- 关键词：脉络膜血管生成素-1高糖
- Ang/Tie-2信号传导系统与视网膜微血管形成被引量：6
- 2006年
- 促血管生成素(angiopoietins,Ang)及其受体Tie-2构成的Ang/Tie-2信号传导系统对于血管生成(angiogenesis)过程中血管成熟与稳定、调控血管完整性具有重要意义。该家族不同因子对于血管生成作用不同,而且同一因子对于血管生成的作用也随条件的不同而改变。对于生理和病理状态下的视网膜微血管形成,Ang/Tie-2信号传导系统起到调节血管结构的持久稳定性,调节渗漏的作用,这对于糖尿病视网膜病变(diabeticretinopathy,DR)的治疗提供了一个重要的思路。
- 左中夫刘学政
- 关键词：促血管生成素TIE-2糖尿病视网膜病变
- 血管生成素1对高糖环境中猴脉络膜-视网膜内皮细胞的保护作用被引量：1
- 2009年
- 目的探讨高浓度葡萄糖对内皮细胞(endothelial cell,EC)单层通透性模型通透性的影响以及血管生成素1(angiopoietin-1,Ang-1)对此的保护作用。方法将猴脉络膜-视网膜内皮细胞(RF/6A)接种于孔径0.8μm聚碳酸酯微孔滤膜中,形成致密单层后分三组培养。正常对照组:DMEM高糖培养基,含葡萄糖25mmol/L;;高糖组:DMEM培养基,含葡萄糖40mmol/L;;Ang-高糖组:DMEM培养基,含葡萄糖40mmol/L+Ang-1250ng/ml。于第1天、第3天、第5天、第7天4个时间点建立EC单层通透性模型,检测蛋白质渗透压反射系数(δ)及滤过系数(Kf),以监测EC单层通透性的变化;;利用Westernblot(NBT/BCIP显色法)检测第5天时survivin的表达。结果第3天、第5天及第7天时,高糖组EC单层通透性增高(P<0.01),Ang-高糖组在第5天及第7天时,EC单层通透性升高(P<0.01),但仍低于高糖组;;Westernblot结果显示,Ang-高糖组survivin表达明显高于其他各组(P<0.01)。结论高糖能够增加EC单层通透性,Ang-1能对抗高糖的这种生物学作用。它可能是通过上调凋亡抑制基因survivin的表达,抑制RF/6A的凋亡而发挥生物学作用。
- 萧鸿刘学政
- 关键词：血管生成素1葡萄糖通透性SURVIVIN表达
- Ang-1对高糖中培养的RF/6A的影响被引量：1
- 2009年
- 目的探讨血管生成素-1(angiopoietin-1,Ang-1)对高浓度葡萄糖中培养的猴脉络膜-视网膜内皮细胞(RF/6A)的保护作用。方法RF/6A分3组培养:对照组(DMEM培养基含25mmol/L葡萄糖)、高糖组(DMEM培养基含40mmol/L葡萄糖)、Ang-高糖组(DMEM培养基含40mmol/L葡萄糖+0.25mg/LAng-1)。利用台盼兰染色法及MTT比色法检测体外培养的各种RF/6A存活率及细胞活力,利用western-blotting法检测各组suivivin表达。结果1d时各组细胞存活率及活力无差异。3、5、7d时高糖组和Ang-高糖组细胞存活率及细胞活力均较正常组下降(P<0.05),高糖组细胞存活率及细胞活力低于Ang-高糖组(P<0.05)。5d时,Ang-高糖组survivin表达明显较其他两组增多(P<0.05)。结论高糖能降低RF/6A的存活率和活力,而Ang-1能明显增强高糖环境中RF/6A的存活率和活力,其机制可能与Ang-1上调凋亡抑制基因survivin的表达有关。
- 左中夫王轶晶冯闯刘学政
- 关键词：血管生成素-1高糖SURVIVIN表达
- 辛伐他汀对糖尿病大鼠视网膜血管内皮钙黏蛋白表达的影响被引量：3
- 2010年
- 目的观察链脲佐菌素(STZ)诱导的糖尿病视网膜血管内皮钙黏蛋白(VE-cadherin)的表达及辛伐他汀对VE-cadherin表达的影响,探讨他汀类药物可能的非调脂性治疗作用。方法尾静脉注射STZ法建立糖尿病大鼠模型,造模成功48只。成模次日起,24只大鼠每日给予辛伐他汀20 mg/kg灌胃为辛伐他汀组,24只等量生理盐水灌胃为糖尿病组;另选24只大鼠作为正常对照组。分别在造模后2、5、8周各组取8只大鼠采用伊凡思蓝(EB)法检测视网膜的渗透性,免疫组织化学和Western blot法检测各组大鼠视网膜VE-cadherin的表达情况。结果与正常对照组比较,辛伐他汀组和糖尿病组大鼠体重明显下降,差异均有统计学意义(P<0.01),血糖显著上升,差异均有统计学意义(P<0.01)。与糖尿病组大鼠比较,各时间点辛伐他汀组大鼠体重均明显上升,而血糖均显著下降(P<0.05)。免疫组织化学分析证实,VE-cadherin在糖尿病组大鼠视网膜血管呈黄褐色阳性表达。Western blot分析表明随着糖尿病视网膜病变(DR)的发生发展,糖尿病组视网膜血管表达VE-cadherin的量显著减少,与正常对照组和辛伐他汀组比较,差异均有统计学意义(P<0.05)。糖尿病组和辛伐他汀组EB渗透量明显高于正常对照组(P<0.01),辛伐他汀组低于糖尿病组(P<0.05)。结论STZ诱导的糖尿病大鼠视网膜血管中VE-cadherin表达量减少,辛伐他汀可改善这种改变,提示辛伐他汀对DR有预防和治疗作用。
- 萧鸿王志云庞东渤刘学政
- 关键词：血管内皮钙黏蛋白糖尿病视网膜病变辛伐他汀
- 人血管生成素1的克隆、序列分析和单酶切法构建毕氏酵母表达载体被引量：1
- 2007年
- 目的:从人胎盘中克隆血管生成素1基因,并分析其结构特征,单酶切法构建毕氏酵母表达载体pPIC9K/Ang-1,为进一步研究血管生成素1防治糖尿病视网膜病变的血管渗漏奠定物质基础。方法:实验于2003-11/2004-06在北京大学医学部细胞系完成。提取人胎盘组织总RNA,用反转录聚合酶链式反应技术扩增出血管生成素1基因片段,并将其克隆到PGEM-TEasy载体中进行序列分析,用小牛肠碱性磷酸酶法去除线性化的pPIC9K质粒DNA两端磷酸基,以防止质粒自身环化,再亚克隆到毕氏酵母表达载体pPIC9K中。结果:①经甲醛变性胶电泳鉴定,成功从胎盘组织中提取出总RNA,RNA的完整性和纯度符合进一步的酶反应要求。②胎盘组织总RNA经oligo-dT引物反转录,用人血管生成素1特异一对引物进行聚合酶链反应扩增,10g/L琼脂糖胶电泳结果显示一条特异片段,大小为1.5kbcDNA片段。③成功构建了PGEM-T/Ang-1载体,Blast序列分析与GenBank中AY121504一致。两者成熟区cDNA的核苷酸和氨基酸同源性分别大于99%和98%,国人血管生成素1基因核苷酸序列的起始密码子ATG,终止密码子为TGA,共1497个碱基对。④成功构建pPIC9K/Ang-1毕氏酵母表达载体。结论:从人的胎盘中克隆血管生成素1基因无突变,成功构建pPIC9K/Ang-1毕氏酵母表达载体,满足表达蛋白质的需要。
- 马腾刘学政刘丽波范海鹰
- 关键词：血管生成素1逆转录聚合酶链反应
- 人血管生成素-1的克隆和毕氏酵母表达载体pPIC9K/Ang-1的构建被引量：6
- 2005年
- 目的克隆Ang-1基因,分析其结构特征,构建pPIC9K/Ang-1毕氏酵母表达载体,为进一步研究Ang-1防治糖尿病视网膜病变的血管渗漏奠定物质基础。方法提取人胎盘组织总RNA,RT-PCR扩增出Ang-1基因片段,并将其克隆到PGEM-T Easy载体中进行序列分析,再亚克隆到毕氏酵母表达载体pPIC9K中。结果从胎盘组织总RNA中,RT-PCR扩增出1.5kb的cDNA片段,成功构建了PGEM-T/Ang-1载体,B last序列分析与GenBank中AY121504一致。两者成熟区cDNA的核苷酸和氨基酸同源性分别大于99%和98%,成功构建pPIC9K/Ang-1毕氏酵母表达载体。结论从人的胎盘中克隆Ang-1基因无突变,成功构建pPIC9K/Ang-1毕氏酵母表达载体,满足表达蛋白质的需要。
- 马腾刘丽波黄波刘学政刘学
- 关键词：血管生成素-1逆转录聚合酶链式反应克隆
- 视网膜Müller细胞在糖尿病视网膜病变发病中的作用及其研究进展被引量：3
- 2010年
- 糖尿病视网膜病变（DR）是糖尿病的重要并发症,其发病机制尚未完全明了。以往对DR的研究主要关注其血管病变,而近年来研究表明,在DR的视网膜血管病变发生之前,已有视网膜神经变性,包括视网膜神经元及神经胶质细胞的变性及丢失。Müller细胞作为视网膜最主要的神经胶质细胞,分布于整个视网膜,包绕视网膜上各级神经元的胞体、突起及视网膜血管。Müller细胞不但可以影响视网膜血管的病变，还能影响视网膜神经细胞的病变，
- 侯阳刘学政张克剑
- 关键词：视网膜MÜLLER细胞糖尿病糖尿病并发症糖尿病视网膜病变
- 糖尿病视网膜病变的二级康复干预:人血管生成素1的克隆和分析被引量：3
- 2005年
- 目的:从人的胎盘中克隆血管生成素(angiopoietin-1,Ang-1)基因,并分析其结构特征。方法:提取人胎盘组织总RNA,用反转录聚合酶链式反应(RT-PCR)技术扩增出Ang-1基因片段,并将其克隆到PGEM-TEasy载体中进行序列分析。结果:获得高质量的胎盘组织总RNA。RT-PCR扩增出1.5kb的cDNA片段,成功构建了PGEM-T/Ang-1载体,Blast序列分析与GenBank中AY121504一致。结论:从人的胎盘中克隆Ang-1基因无突变,满足为进一步研构建pPIC9K/Ang-1毕氏酵母表达载体和表达蛋白质的需要。
- 马腾刘学政刘丽波黄波
- 关键词：反转录聚合酶链反应胎盘
