重庆市卫生局中医药科技项目(2009-1-10)
- 作品数：2 被引量：4H指数：1
- 相关作者：蒋电明阳明明阳运康钟健更多>>
- 相关机构：重庆医科大学附属第一医院泸州医学院附属医院更多>>
- 发文基金：重庆市卫生局中医药科技项目四川省卫生厅科研基金更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 角质细胞生长因子促进人胚神经干细胞增殖与分化的实验研究被引量：4
- 2013年
- 目的探讨人源性角质细胞生长因子2(human keratinocyte growth factor 2,hKGF-2)对体外长期培养人胚神经干细胞(human neural stem cells,hNSCs)存活和分化的影响。方法将液氮冻存17代hNSCs复苏常规培养7 d形成神经球后,取少许行免疫细胞化学染色鉴定干细胞及分化细胞特异抗原。一部分神经球浓缩后种植至12孔培养板中,分为7组,每组6孔,均添加1 mL基础培养液[含N2(1∶100)、20 ng/mL EGF的DMEM/F12培养基]后,B、C、D、E、F组分别添加10、30、60、90、120 ng/mL KGF-2,G组添加10 ng/mL bFGF,A组为空白对照组;培养7、14 d观察并计数神经球与hNSCs,了解神经球生长与增殖情况。另一部分浓缩后种植至置有多聚赖氨酸包被玻片的6孔培养板内,分为4组,每组6孔,均添加3 mL DMEM/F12培养基后,A1、B1、C1、D1组对应加入N2(1∶100)、N2(1∶100)+90 ng/mL hKGF-2、FBS(1∶20)、FBS(1∶20)+90 ng/mL hKGF-2;培养14 d内观察神经球生长与分化情况。7 d时各取5孔玻片行免疫荧光细胞化学鉴定和流式细胞仪检测,分析神经球的生长与分化状况。结果复苏后培养形成的神经球含大量巢蛋白阳性细胞,充满整个神经球;诱导分化后表达分化细胞特异性蛋白神经丝200(neurofilament200,NF-200)和胶质纤维酸性蛋白(glial fibrillary acidic protein,GFAP)。各组神经球培养7 d后均有不同程度增大;随hKGF-2浓度增加,神经球数量和hNSCs数目均依次增多,呈递增趋势,E、F、G组显著高于A、B、C、D组(P<0.05);B、C、D组间两两比较差异亦有统计学意义(P<0.05);但A、B组间以及E、F、G组间比较差异无统计学意义(P>0.05)。体外诱导过程中,A1、B1、C1、D1组分化细胞生长旺盛程度呈递增趋势,组间比较差异均有统计学意义(P<0.05);B1组NF-200阳性率显著高于其余3组(P<0.05),GFAP阳性率显著低于其余3组(P<0.05);A1、C1、D1组间比较差异均无统计学意义(P>0.05)。培养14 d后各组生长均达峰值,以星形细胞�
- 阳运康蒋电明阳明明
- 关键词：人胚神经干细胞增殖分化
- UW液对大鼠坐骨神经低温保存时组织结构、细胞活性及免疫原性的影响
- 2012年
- 目的研究UW液低温保存方法对大鼠坐骨神经组织结构、细胞活性及免疫原性的影响。方法 SD大鼠坐骨神经4℃条件下用UW液保存(UW组),分别保存1、4、6周,以新鲜坐骨神经作对照(对照组)。HE染色和透射电镜扫描观察组织结构改变;LIVE/DEAD Viability/Cytotoxicity试剂盒和TUNEL法分别评估细胞活性和凋亡程度;Western blot法检测细胞间黏附分子-1(ICAM-1)和主要组织相容性复合体Ⅱ(MHCⅡ)的表达以了解免疫原性改变。结果各保存时相点UW组神经外膜和雪旺细胞基底膜结构均较完整,与对照组无明显差别。各UW组细胞活性程度降低,TUNEL阳性细胞数增多,ICAM-1和MHCⅡ表达降低,与对照组相比均有明显统计学差异(P<0.05);且4、6周组TUNEL阳性细胞数均高于1周组(P<0.05),ICAM-1和MHCⅡ表达均低于1周组(P<0.05),但4、6周组间均未见明显差异。结论 UW液低温保存方法能有效维持周围神经组织神经外膜和雪旺细胞基底膜结构完整性,并降低保存神经的免疫原性,但有效维持神经组织细胞活性的时限不超过1周。
- 阳明明蒋电明钟健
- 关键词：UW液周围神经
