天津市应用基础与前沿技术研究计划(11JCZDJC27800)
- 作品数：11 被引量：29H指数：4
- 相关作者：沈中阳宋红丽邓永林郑虹杨洋更多>>
- 相关机构：天津市第一中心医院天津医科大学天津医科大学总医院更多>>
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- 表达microRNA-203tough decoy的慢病毒载体构建及应用
- 2014年
- 目的建立表达microRNA(miRNA)tough decoy(TuD)的慢病毒载体构建方法,并检测其对细胞内miRNA表达水平及细胞表型的影响。方法在慢病毒表达质粒pSIH1-H1-copGFP中通过两步克隆,首先构建miRNA TuD通用骨架质粒,进一步构建特异性针对大鼠miR-203的TuD表达载体。在293T细胞中包装成慢病毒后,感染大鼠骨髓间充质干细胞(BM-MSCs),同时用pSIH1-H1-copGFP空质粒包装慢病毒,感染BM-MSCs作为对照。定量RT-PCR检测细胞中miR-203的水平变化,并用CCK-8法和Annexin V-PI双标记法分别检测BM-MSCs的活性和凋亡。结果成功构建了基于pSIH1-H1-copGFP质粒的miR-203 TuD表达载体,并对其序列进行了验证。用表达miR-203 TuD的重组慢病毒感染BM-MSCs后第3、6、9天检测细胞内源性miR-203表达水平降低,同时细胞活性增高,凋亡比例降低,与对照组相比差异有统计学意义。结论两步克隆法构建miRNA TuD表达载体是一种简便高效的方法,其表达产物能够有效抑制细胞内源性miRNA水平,同时影响细胞表型。
- 刘涛王玉亮宋红丽付楠楠吴本娟沈中阳
- 关键词：间质干细胞慢病毒属微RNASTOUGHDECOY
- ImmuKnow免疫细胞功能测定在肝移植后肾功能不全受者中的应用
- 2013年
- 目的探讨CD4＋T淋巴细胞内三磷酸腺苷（ATP）含量检测法（ImmuKnow法）免疫细胞功能测定在肝移植后肾功能不全受者个体化免疫抑制治疗中的应用。方法2009年1月至2011年12月间接受肝移植，术后肝功能恢复正常、稳定，但术后6个月以后肾功能持续异常的成人受者20例。定期监测其ImmuKnowATP值，结合血他克莫司浓度谷值结果指导受者免疫抑制剂应用。观察经上述治疗后受者肾功能的变化。结果20例肝移植后随访15-54个月，接受ImmuKnow检测61次，ATP值为33-943μg／L，中位数为282ug／L，四分位距为267ug／L。移植前患者血肌酐中位数为151．8μmol／L，四分位距为44．9btmol／L；随访期末受者血肌酐为中位数为114．9μmol／L，四分位距为35．3μmol／L。肾小球滤过率（eGFR）由0．746ml／s（中位数，四分位距为0．025ml／s）提高到1．005ml／s（中位数，四分位距为0．454ml／s）。Immu KnowATP值与受者白细胞计数呈线性相关（Spearman相关系数=0．429，P：0．001），而与患者年龄、术前原发病、术后时间、血他克莫司浓度谷值、淋巴细胞计数、CD3＋T淋巴细胞计数、CD4＋T淋巴细胞计数及CD4＋淋巴细胞／CD8＋淋巴细胞值等均无线性相关（P〉0．05）。结论ImmuKnow免疫细胞功能测定可用于肝移植后肾功能不全受者个体化免疫抑制治疗的监测，具有一定的临床应用价值。
- 郑卫萍李代红刘懿禾郑虹邓永林潘澄沈中阳
- 关键词：肝移植肾功能不全腺苷三磷酸
- 常温机械灌注下大鼠骨髓间充质干细胞修复心脏死亡后捐献供肝被引量：7
- 2017年
- 目的研究常温机械灌注（NMP）下大鼠骨髓间充质干细胞对心脏死亡后捐献（DCD）肝脏的修复作用。方法体外培养Wistar大鼠骨髓间充质干细胞（BMMSCs），建立心脏死亡后热缺血45min模型。30只Wistar大鼠随机分成NMP组、NMP＋BMMSCs（N＋B）组、冷保存（CS）组，每组（n=10）于2和4h检测相关指标。结果N＋B组在修复肝脏功能和肝脏病理方面，包括超微结构、改善灌注液酸性环境能力以及升高三磷酸腺苷水平等，优于NMP组和cs组（均P〈0．05）。NMP组和N＋B组耗氧量在2h后出现明显变化[2h：（24．35±0．64）ml／min比（29．33±0．47）ml／min；3h：（25．33±0．86）ml／min比（30．34±0．49）ml／min；4h：（26．88±1．07）ml／min比（31．76±0．96）ml／min；P〈0．05]，提示N＋B组的修复作用明显优于其他两组。结论在常温机械灌注下大鼠骨髓间充质干细胞可对DCD大鼠供肝发挥一定的修复作用。
- 尹明丽杨洋史源杨柳王绕绕沈中阳宋红丽
- 关键词：肝移植骨髓间充质干细胞心脏死亡器官捐献热缺血
- 常温机械灌注下大鼠骨髓间充质干细胞修复同种心脏死亡器官捐献供脏的研究被引量：1
- 2017年
- 本研究旨在观察常温机械灌注联合间充质干细胞（MSCs）对心脏死亡器官捐献（DCD）的肝脏的修复作用。一、材料与方法1．建模与分组：雄性Wistar大鼠（180-200g），建立热缺血45min模型。分成单纯常温机械灌注（NMP）组、常温机械灌注＋MSCs组（N＋B）组、冷保存（cs）组3组，每组取2h和4h。
- 尹明丽杨洋史源杨柳王绕绕沈中阳宋红丽
- 关键词：器官捐献心脏死亡干细胞修复骨髓间充质常温
- 小肠移植排斥反应对肠道紧密连接蛋白表达的影响被引量：2
- 2014年
- 目的 观察大鼠小肠移植排斥反应对肠道紧密连接蛋白表达的影响.方法 建立大鼠异位小肠移植模型,分为3组：假手术组、无排斥反应组和排斥反应组.通过大鼠活动状态及病理评分确定排斥反应程度.采用酶联免疫吸附试验（ELASA）法检测血浆中二胺氧化酶（DAO）、D-乳酸（D-LA）、肿瘤坏死因子（TNF）-α、白细胞介素（IL）-2的水平.透射电镜观察肠道紧密连接的超微结构改变.应用实时定量聚合酶链反应（Real-time PCR）、Westem blot法检测紧密连接蛋白Occludin和ZO-1 mRNA和蛋白表达水平的变化.结果 排斥反应组随时间延长,病理评分增加[3 d：（32.67±2.34）分;5 d：（43.50 ±±2.07）分;7 d：（69.50±2.43）分],肠黏膜屏障功能损伤加重[DAO：3 d：（35.84±5.60）U/ml;5 d：（46.50±O.80） U/ml;7 d：（54.01±1.70） U/ml],TNF-α和IL-2大量释放,肠道紧密连接损伤严重,紧密连接蛋白Occludin和ZO-1 mRNA和蛋白表达水平降低.线性相关分析发现,病理评分、TNF-α、IL-2与紧密连接蛋白Occludin和ZO-1的表达呈负相关（P＜0.01）.结论 大鼠小肠移植排斥反应可使肠道功能受损、紧密连接断裂、紧密连接蛋白Occludin和ZO-1表达水平降低,且其蛋白表达水平与排斥反应程度呈负相关.
- 张文宋红丽杨洋刘涛沈中阳
- 关键词：小肠移植排斥反应肠屏障
- 病毒性肝炎复发患者再次肝移植的预后被引量：5
- 2013年
- 目的分析病毒性肝炎复发导致移植肝肝功能衰竭患者再次肝移植的预后情况。方法回顾性分析2003年1月20日至2012年11月20日215例再次肝移植患者的临床资料，比较18例因肝炎复发（其中丙型肝炎8例，乙型肝炎10例）再次肝移植患者与115例因胆道并发症再次肝移植患者的移植肝的生存情况，比较丙型肝炎与乙型肝炎复发患者首次肝移植后的移植肝失功情况和再次肝移植的生存情况。预后分析采用Kaplan—Meier方法绘制生存曲线进行比较。结果215例再次肝移植患者的病因中，胆道并发症最多，为115例（53．5％），肝炎复发18例（8．4％）。肝炎复发与胆道并发症患者第2个移植肝的生存率比较差异无统计学意义（P=0．543）。部分丙型肝炎复发导致的移植肝失功在首次肝移植后早期（3个月内）即出现，乙型肝炎复发患者的移植肝失功几乎全出现在首次肝移植2年后。8例丙型肝炎复发患者中，5例第2个移植肝存活〉1年，10例乙型肝炎复发患者的第2个移植肝均存活〉1年，两者比较差异无统计学意义（P=0．060）。结论肝炎复发患者与胆道并发症患者的再次肝移植预后相似。乙型肝炎复发再次肝移植患者预后良好。
- 张海明孙丽莹郑虹潘澄邓永林朱志军
- 关键词：肝移植肝炎病毒性复发移植物存活预后
- 干细胞示踪技术在动物实验中的应用及进展被引量：2
- 2017年
- 干细胞是一类具有自我复制能力的多潜能细胞。在一定条件下,它可以分化成多种功能细胞,具有再生各种组织器官的潜能,这些特性是干细胞治疗的基础。近年来,干细胞移植治疗已在动物模型和部分临床试验中取得了巨大进步。为了实现干细胞的治疗潜力,干细胞必须在移植后迁移到损伤或病变部位,分化为靶细胞然后定植于病变部位并存活。
- 曹欢宋红丽沈中阳
- 关键词：干细胞治疗动物实验示踪技术病变部位组织器官
- 骨髓间充质干细胞在淋巴细胞参与下对 HBV 作用的体外研究被引量：2
- 2015年
- 目的：探讨骨髓间充质干细胞（ bone marrow mesenchymal stem cells，BM MSCs）在体外淋巴细胞参与下对乙型肝炎病毒（ hepatitis B virus，HBV）复制的影响及其机制。方法选择培养状态良好的HepG2．2．15细胞，提取BN大鼠BM MSCs及新鲜脾淋巴细胞做共培养。实验分5组，分别于培养24 h、48 h及72 h后，采用MTT检测脾淋巴细胞及HepG2．2．15细胞活性，实时定量PCR测定HBV DNA及HBV cccDNA水平，流式细胞术检测T细胞亚群比例变化， ELISA检测细胞因子水平。结果在体外细胞培养的环境下，HBV DNA及HBV cccDNA在24 h、48 h及72 h时，与单纯HepG 2．2．15细胞组、BM MSCs＋HepG2．2．15细胞组及脾淋巴细胞＋HepG2．2．15细胞组比较，脾淋巴细胞＋BM MSCs＋HepG2．2．15细胞组表达水平明显降低，且在48 h 时差异有统计学意义， HBV DNA：（181．000±177;14．731） IU／ml vs （6270．000±177;300．450） IU／ml、（2564．000±177;231．058） IU／ml、（2433．300±177;302．379） IU／ml；HBV cccDNA：（4．330±215;105±177;0．464±215;105） IU／ml vs （11．100±215;105±177;0．375±215;105） IU／ml、（8．930±215;105±177;0．778±215;105） IU／ml、（9．850±215;105±177;0．810±215;105） IU／ml（P＜0．01）。细胞因子：IFN-γ与HBV DNA水平呈负相关，IL-10及IL-22分泌水平与HBV DNA水平呈正相关。 T细胞亚群：CD4＋／CD8＋升高，CD8＋细胞百分率与HBV DNA水平呈正相关。结论 BM MSCs可以抑制HBV DNA的表达，提高对HBV的清除能力，是通过调节Tc1／Tc2平衡和自身分泌方式，进而调节细胞因子表达水平实现的。
- 张博雅宋红丽尹明丽曹毅刘涛杨洋沈中阳
- 关键词：乙型肝炎病毒骨髓间充质干细胞淋巴细胞细胞因子
- 间充质干细胞促进肝再生的研究进展被引量：5
- 2018年
- 肝脏发源于胚胎内胚层,成体以后,肝脏修复、再生可通过3个途径完成：（1）通常肝组织成熟肝细胞经过有丝分裂,使肝脏体积和功能得到恢复;（2）当肝脏严重受损时,可激活卵圆细胞增殖、分化为肝细胞和胆管上皮细胞;（3）通过骨髓干细胞的参与,骨髓干细胞是肝细胞的重要肝外来源,在特定环境下可分化成肝干细胞及肝细胞,从而参与肝功能的修复和重构。
- 侯宾宋红丽沈中阳
- 关键词：间充质干细胞肝再生成熟肝细胞骨髓干细胞胆管上皮细胞肝脏体积
- 肝部分切除后肝癌复发行肝移植的适应证选择被引量：2
- 2015年
- 目的探讨肝部分切除后肝癌复发行肝移植的适应证选择。方法回顾性分析2000年6月至2013年3月172例肝部分切除术后肝癌复发行肝移植的受者临床资料。其中符合米兰标准47例，符合加州大学旧金山分校（ucsF）标准62例，符合uptoseven标准70例，符合复旦标准61例，符合杭州标准139例。对5种标准与受者预后的相关性进行风险比例回归分析。根据各标准符合与否进行分组作kaplan-meier生存分析。结果术后1、3和5年存活率：172例受者总体存活率分别为82％、56．4％和51．6％；符合米兰标准者分别为89％、75．1％和70．1％，不符合者为79．6％、52．5％和45．1％；符合uptoseven标准者分别为89．7％、74．8％和67．5％，不符合者为77．2％、48．8％和42．6％；符合UCSF标准者分别为89．3％、71％和59％，不符合者为78．1％、51．8％和47．6％；符合复旦标准者分别为91．8％、77．9％和64．9％，不符合者为77％、49％和44．9％；符合杭州标准者分别为86．1％、66．8％和58．7％，不符合者为64．1％、19．7％和19．7％。各标准两组受者间存活率的差异均有统计学意义（P〈0．05）。92例超米兰标准但符合杭州标准受者术后1、3和5年存活率分别为84．7％、63％和53．9％，与符合米兰标准受者比较，差异无统计学意义（P=0．122）。结论现有肝癌肝移植标准用于肝切除后肝癌复发肝移植的适应证是可行的；在米兰标准基础上其他标准均有效的扩大了患者范围，尤以杭州标准最优，但仍需更大样本量的研究。
- 史瑞张海明宋卓伦饶伟郑卫萍郑虹邓永林沈中阳
- 关键词：肝癌肝移植适应证
