国家重点基础研究发展计划(2007CB116204)
- 作品数：14 被引量：42H指数：4
- 相关作者：郑玉才徐亚欧金素钰黄林林亚秋更多>>
- 相关机构：西南民族大学泸州医学院更多>>
- 发文基金：国家重点基础研究发展计划中央高校基本科研业务费专项资金国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：农业科学生物学轻工技术与工程更多>>
- 基于RNA-Seq技术的牦牛体外受精胚胎发育转录组分析被引量：13
- 2018年
- 【目的】探明不同发育阶段牦牛体外受精(IVF)胚胎的转录组差异,了解差异表达基因(DEG)在功能、分类和代谢通路的差异,为揭示牦牛早期胚胎发育调控机制,促进牦牛胚胎体外生产技术的发展提供理论基础。【方法】以IVF技术生产的牦牛2-细胞、4-细胞、8-细胞、桑椹胚和囊胚5个发育阶段的胚胎为样本分别提取总RNA,采用Smart-Seq2扩增技术构建5个测序文库,应用Hi SeqTM 2500高通量测序技术进行转录组测序,对获得的有效序列进行功能注释及相关生物信息学分析。【结果】牦牛IVF后的卵裂率和囊胚率分别为69.3%和26.2%。2-细胞、4-细胞、8-细胞、桑椹胚和囊胚5个发育阶段的牦牛胚胎Clean reads为47 355 570—50 855 888条,其中有85.65%—90.02%的reads能比对到牦牛参考基因组序列上;8-细胞的胚胎比对上的转录本最多(14 893),而囊胚比对上的转录本最少(9 827)。牦牛胚胎转录本主要有5种可变剪接类型,转录起始区域可变剪接(TSS)和转录结束区域可变剪接(TTS)所占比例最大;牦牛2-细胞、4-细胞、8-细胞、桑椹胚和囊胚基因组分别有116601、234 131、196 420、70 841和94 840个位点存在单核苷酸多态性(SNP)。在4-细胞、8-细胞、桑椹胚、囊胚期开始表达的基因分别有1 221、1 116、142和564个;随着胚胎发育的进行,BMP15、KIT、GDF9、STAT3、ZP3和ZP4等母源基因的表达量逐渐减少,而SARS、IL18、ACO2、TXN2、ATP5B、PCGF4、UBE3A、MAPK13、SNURF和JUP等胚胎基因的表达量则逐渐增加。以|log2ratio|≥1且Q-value<0.05为筛选标准,在2-细胞和4-细胞胚胎、4-细胞和8-细胞胚胎、8-细胞胚胎和桑椹胚以及桑椹胚和囊胚比对中分别筛选到6 922、7 601、8 071和10 555个DEGs。GO分析表明,4个发育阶段的DEGs归类注释都涉及生物过程(BP)、细胞组分(CC)和分子功能(MF)3大类62个二级条目。通过KEGG pathway数据库分析,2-细胞和4-细胞期胚胎的DEGs参与到
- 字向东罗斌夏威郑玉才熊显荣李键钟金城朱江江张正帆
- 关键词：牦牛体外受精胚胎转录组RNA-SEQ
- 重组牦牛肌肉生长抑制素成熟肽的纯化及其免疫原性研究被引量：2
- 2012年
- 为了探索牦牛MSTN的作用机制,寻找合适的阻断MSTN活性的方法,最终实现牦牛的高效率育肥,本研究采用RT-PCR方法克隆牦牛MSTN成熟肽基因,构建MSTN-pET28a(+)重组表达载体,进而在E.coliBL21(DE3)宿主菌中进行表达,将表达产物用亲和层析纯化,最后用ELISA方法检测牦牛MSTN重组成熟肽的免疫原性。重组载体中连接的牦牛MSTN成熟肽基因包含330bp,编码109个氨基酸。含MSTN-pET28a(+)重组载体的工程菌经0.1mmol.L-1 IPTG诱导表达6h后,MSTN成熟肽的表达量约占蛋白总量的21%,总蛋白经亲和层析纯化后得到了高纯度的牦牛MSTN重组成熟肽,分子量约16.5ku;ELISA结果显示,兔抗牦牛MSTN重组成熟肽的血清效价为32 000个抗体单位,表明牦牛MSTN重组成熟肽具有较好的免疫原性。本研究建立了牦牛MSTN重组成熟肽高效表达系统并纯化获得具有免疫原性的牦牛重组MSTN成熟肽,这为通过调控MSTN功能来改良牦牛产肉性能的研究储备了技术条件。
- 毛亮徐亚欧郑玉才
- 关键词：肌肉生长抑制素牦牛免疫原性
- 九龙牦牛A-FABP基因克隆及组织和时序表达差异
- 脂肪酸结合蛋白通过影响脂肪代谢而作为肉质性状的候选基因。本研究的目的是获得九龙牦牛 A-FABP(Adipocyte fatty acid binding protein)的基因序列及其组织表达谱,为阐明九龙牦牛优质肉质...
- 邝良德林亚秋郑玉才李玉萍贺庆华王水徐亚欧文勇立
- 关键词：牦牛A-FABP肉质
- 九龙牦牛二酰甘油转移酶1(DGAT1)基因的克隆和表达谱分析
- 引言二酰甘油转移酶1(DGAT1)直接参与脂肪的合成,是近年来脂肪代谢研究中的重要候选标记基因。牦牛(Bos grunniens)是唯一能适应青藏高原特殊生态环境的牛种,能提供优质的半野味肉类,具有重要的开发利用价值,但...
- 刘薇李玉萍汤富彬林亚秋徐亚欧郑玉才
- 文献传递
- 九龙牦牛PPARγ基因的克隆及其表达谱分析被引量：8
- 2010年
- 根据普通牛(Bos tarus)过氧化物酶体增殖物激活受体γ(PPARγ)基因序列设计引物,用成年九龙牦牛(Bos grunniens)脂肪组织总RNA,经RT-PCR扩增获得了PPARγ基因序列(GenBank登陆号:GU061328),其中cDNA的ORF为1 428 bp,编码475个氨基酸,与普通牛PPARγ氨基酸的同源性达99%,有2个氨基酸发生突变。利用半定量RT-PCR分析九龙牦牛PPARγ基因的mRNA表达特性。结果表明:在脂肪、背最长肌、心、肝、肾、脾和肺脏中均检测到PPARγ基因的表达,并且在脂肪组织中表达量极显著高于其他组织(P<0.01),在肝脏和脾脏中亦有较高表达。PPARγ基因在背最长肌中的表达5.5岁九龙牦牛显著高于0.5、3.5岁和9岁以上,其表达与背最长肌的肌内脂肪含量未见显著相关性。
- 林亚秋邝良德徐亚欧王永李玉萍郑玉才
- 关键词：PPARΓ基因表达肌内脂肪牦牛
- 毛细管电泳法对不同年龄牦牛肉中的肌苷酸含量的分析
- 2015年
- 采用毛细管电泳(CE)测定不同年龄的九龙牦牛背最长肌中肌苷酸(IMP)含量,以阐明九龙牦牛肉中IMP随年龄的变化规律。高氯酸法提取3岁、5岁和7岁公牦牛以及12岁母牦牛背最长肌中的IMP,然后用CE测定。结果表明,样品中IMP能在15 min内获得有效分离,且线性关系良好。3岁公牦牛背最长肌中IMP含量(1.46±0.14)mg/g分别极显著和显著高于5岁、7岁的公牦牛;12岁母牦牛背最长肌中IMP含量(1.18±0.36)mg/g显著低于3岁公牦牛(P<0.05),与5岁、7岁的公牦牛相比差异不显著。牦牛背最长肌中IMP含量与年龄有关,并为确定九龙牦牛肉最佳屠宰年龄提供了一定的依据。
- 任亮于淼黄林王鹏非金素钰郑玉才
- 关键词：牦牛肉毛细管电泳肌苷酸
- 毛细管电泳分析牦牛肉中肌苷酸含量方法的优化
- 2014年
- 为提高毛细管电泳(CE)测定牦牛肉中肌苷酸(IMP)含量的效率,用高氯酸法提取3岁公牦牛(n=8)背最长肌中的IMP,然后用短毛细管柱(有效长度30 cm)检测IMP含量.结果表明,短毛细管柱与长毛细管柱(有效长度50 cm)相比,测定的IMP含量十分接近,而且短柱获得的峰形更尖锐,检出时间缩短到3.5 min,在IMP浓度为10μg/ml^160μg/ml范围内具有良好的线性关系(R2=0.9974);通过精密度、加标回收率测定,以及IMP与其他几种核苷酸一磷酸的分离,均显示短毛细管柱对IMP的分离定量与长毛细管柱相近.建立了一种快速、低成本检测牦牛肉中IMP含量的方法.
- 任亮于淼黄林王鹏非金素钰郑玉才
- 关键词：牦牛毛细管电泳肌苷酸
- 牦牛铜锌超氧化物歧化酶原核表达载体的构建及其表达研究被引量：2
- 2010年
- 【目的】为解决医用超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)来源的限制,利用基因工程方法构建牦牛Cu,Zn-SOD原核表达系统,为重组牦牛Cu,Zn-SOD作为注射用药奠定基础。【方法】RT-PCR扩增牦牛Cu,Zn-SOD编码基因,构建Cu,Zn-SOD/pET22b(+)重组表达载体,并转化到E.coli BL21(DE3)宿主菌,经IPTG进行诱导表达。表达产物经SDS-PAGE、活性染色及邻苯三酚法进行检测,采用BradFord方法测定融合蛋白浓度。【结果】本试验成功获得了牦牛Cu,Zn-SOD cDNA,长456bp,编码152个氨基酸。与普通牛SOD编码基因序列cDNA一致率为99.6%,氨基酸序列一致率为98.7%,表达产物分子质量约为32kD。酶粗提取液比活约为35U·mg-1。重组蛋白浓度0.2772(mg·mL-1)。【结论】本研究成功构建了牦牛Cu,Zn-SOD/pET22b(+)原核表达载体,表达量较高、稳定性强,重组表达产物具有较高生物学活性。
- 徐亚欧袁忠毛德才毛亮郑玉才
- 关键词：牦牛CU,ZN-SOD克隆原核表达
- 麦洼牦牛乳酸脱氢酶-B基因多态性的PCR-RFLP分析被引量：3
- 2013年
- 为了从分子水平上检测麦洼牦牛Bos grunniens乳酸脱氢酶-1(LDH1)的H亚基编码基因Ldhb的多态性,实验提取79头麦洼牦牛基因组DNA,采用PCR-RFLP技术分析Ldhb基因多态性,并测定牦牛背最长肌中肌红蛋白含量。实验建立的牦牛Ldhb的G896A突变位点的PCR-RFLP检测方法,在79头麦洼牦牛中检测到Ldhb-AA和Ldhb-AG两种基因型,其中AG基因型频率为16.46%,并且这些样品的乳酸脱氢酶-1的电泳迁移率快于Ldhb-AA样品。本实验未检测到Ldhb-GG基因型;麦洼牦牛Ldhb基因多态性与背最长肌中的肌红蛋白含量之间未见相关性。
- 马晓琴黄林刘薇刘浩浩陈洁玲郑玉才
- 关键词：牦牛乳酸脱氢酶PCR-RFLP肌红蛋白
- 用Chelex-100法大规模快速提取牦牛肌肉中基因组DNA
- 2018年
- 旨在建立快速、大规模提取牦牛(Bos grunniens)肌肉中基因组DNA的方法.试验样品为冰冻保存的九龙牦牛背最长肌(n=10).采用两种取样方法(镊子取样和枪头取样)采集冰冻的肌肉样品,用Chelex-100方法提取其中的基因组DNA,并进行PCR扩增.结果显示,镊子取样和枪头取样提取的基因组DNA,均可用于两个核基因和一个线粒体基因的PCR扩增,但枪头取样简便易行,提取的DNA用PCR扩增细胞色素b,扩增35个循环数的PCR产物可直接测序.表明Chelex-100法可用于快速提取牦牛肌肉中基因组DNA,操作简单,成本低廉,适用于大规模提取组织中的DNA.
- 周凡莉黄林金素钰郑玉才
- 关键词：肌肉基因组DNA牦牛
