国家自然科学基金(81173095)
- 作品数：5 被引量：9H指数：2
- 相关作者：唐亚雄裴哲王晶马玉玲曾中秋更多>>
- 相关机构：中国科学院成都生物研究所西南交通大学更多>>
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- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- Wnt蛋白拮抗剂Frzb的cDNA克隆、重组慢病毒构建以及稳定表达细胞株的建立被引量：2
- 2014年
- Wnt信号通路的异常活化与人类多种恶性肿瘤的发生密切相关,为探索作为Wnt蛋白拮抗剂sFRP(Secreted frizzled related protein)家族成员之一的Frzb/sFRP3在肝癌细胞中的抗癌潜力,本研究主要通过RT-PCR以及慢病毒表达系统进行了Frzb的cDNA克隆、重组慢病毒构建以及肝癌稳定表达细胞株的建立.从人正常肝细胞HL-7702中提取总RNA,通过RT-PCR获得Frzb cDNA片段并经测序证实;与此同时,将Frzb cDNA分别构建至以绿色荧光蛋白或嘌呤霉素抗性为报告基因的慢病毒真核表达载体pLVX-IRES-ZsGreen1-Frzb及pLVX-Puro-Frzb,通过酶切和测序获得正确的慢病毒重组表达质粒;其次,通过Lenti-X?Lentiviral Expression Systems将慢病毒重组表达质粒与慢病毒包装质粒psPAX2、pMD2.G共转染HEK293T细胞,48 h后制备重组慢病毒悬液,随后感染HEK293T细胞,分别通过荧光显微镜观察绿色荧光蛋白的表达以及Western blot验证了Frzb(FLAG标签)在细胞中的正确表达;最后,将Frzb重组慢病毒悬液感染肝癌HepG2细胞,经2μg/mL嘌呤霉素筛选成功地获得了稳定表达Frzb的细胞株.以上结果表明慢病毒表达体系对Wnt信号通路的分子靶向药物研究具有重要价值.
- 马玉玲裴哲王晶魏枭曾中秋陈雨文唐亚雄
- 关键词：FRZB肝癌细胞HEPG2克隆重组慢病毒
- 卡瓦胡椒素B对人非小细胞肺癌A549细胞的抑制作用被引量：3
- 2012年
- 卡瓦胡椒素B是药用植物卡瓦胡椒根中的一种天然查耳酮类化合物,研究了其对人非小细胞肺癌A549细胞的增殖抑制作用及其诱导细胞凋亡的分子机制.实验结果显示,卡瓦胡椒素B能显著抑制非小细胞肺癌A549细胞的增殖,且随着药物浓度的增加、处理时间的延长其抑制作用呈明显的剂量时间效应;同时,卡瓦胡椒素B能显著诱导A549细胞凋亡、细胞周期阻滞于G2-M期;分子机制研究表明,卡瓦胡椒素B能通过活化JNK激酶活性、下调凋亡抑制蛋白survivin的表达以及激活PARP活性从而导致其对A549细胞的增殖抑制作用.结果表明卡瓦胡椒素B对人非小细胞肺癌的预防与治疗可能具有潜在价值.
- 王晶安君霞朱启彧马玉玲裴哲魏枭孙健唐亚雄
- 关键词：肺癌细胞A549SURVIVINJNK
- 蛋白质精氨酸甲基转移酶抑制剂DB75对人膀胱癌T24细胞的抑制作用被引量：2
- 2015年
- 蛋白质精氨酸甲基转移酶1(PRMT1)是近年来新发现的一种表观遗传修饰酶,在膀胱癌等多种癌组织中过度表达,因此针对该靶点的新型表观抗肿瘤药物研究尤为重要.通过基于PRMT1药效团虚拟筛选模型筛查抑制PRMT1活性的小分子化合物,体外研究了靶向PRMT1的小分子化合物DB75对膀胱癌细胞的抗瘤活性及诱导细胞凋亡的分子机制.实验结果显示:通过筛选体系获得了能显著抑制PRMT1活性的小分子化合物DB75;MTT实验表明,DB75能够显著(P<0.05)地抑制膀胱癌T24细胞的增殖,且随着药物浓度的增加,抑制率呈明显的剂量效应,48 h半数抑制浓度IC50为2.2μmol/L;DAPI染色显示DB75能显著(P<0.05)诱导膀胱癌T24细胞凋亡;分子机制研究显示,DB75通过激活Caspase-3和PARP活性从而诱导T24细胞凋亡.以上结果初步表明DB75可作为一种新型的膀胱癌表观先导化合物.
- 曾中秋马玉玲裴哲陈雨文王晶唐亚雄
- 关键词：膀胱癌细胞凋亡
- Curcusone C诱导卵巢癌SK-OV-3细胞凋亡
- 2013年
- 近年来麻风树(Jatropha curcas)的生物活性研究如火如荼,但其二萜类化合物的抗癌活性及分子机制研究仍知之甚少.通过萃取和柱层析方法从麻风树的根皮中分离提取到一种二萜类化合物Curcusone C,探讨了该化合物对卵巢癌SK-OV-3细胞增殖、细胞凋亡的影响.实验结果表明,Curcusone C能显著抑制SK-OV-3细胞的增殖,且随着药物浓度的增加其抑制作用呈明显的剂量依赖效应,其48 h半数抑制浓度IC50为160 nmol/L;同时,Curcusone C能显著诱导SK-OV-3细胞凋亡,DAPI染色结合显微镜观察发现400 nmol/L Curcusone C处理后的细胞呈现典型的细胞凋亡形态学特征;最后,Western blot免疫印迹表明Curcusone C能显著诱导SK-OV-3细胞的聚ADP核糖聚合酶(PARP)经Caspase切割为Mr89×103降解产物,从而从分子水平上证实Curcusone C能以剂量依赖方式激活PARP的切割活性进而促进细胞凋亡.上述结果表明从麻风树根皮中提取的二萜类化合物Curcusone C对人卵巢癌的预防与治疗可能具有潜在价值.
- 朱启彧安君霞李甫王明奎吴坚唐亚雄
- 关键词：细胞凋亡PARP麻风树
- 肝癌Wnt通路可溶性跨膜受体Frizzled-7稳定表达细胞株的构建与鉴定被引量：2
- 2015年
- Wnt信号的异常持续激活可导致肝癌的发生发展,跨膜受体Frizzled-7在绝大多数肝癌临床肿瘤组织中呈现高度表达特征.为探索可溶性跨膜受体sFZD7在肝癌细胞中的抗癌活性,本研究主要通过分子克隆手段构建sFZD7的重组慢病毒表达载体,实现其在肝癌细胞Mahlavu中的超量表达,并通过抗生素筛选获得稳定表达sFZD7的肝癌细胞株,从而为研究sFZD7在肝癌中的生物学功能奠定基础.具体方法是首先提取人正常肝细胞HL-7702的总RNA,通过RT-PCR获取sFZD7 cDNA片段,分别将其插入慢病毒表达载体p LVX-IRES-Zs Green1与p LVX-Puro中,并通过酶切鉴定及测序分析以验证该慢病毒重组表达质粒的成功构建.其次,包装sFZD7重组慢病毒,并将制备的重组慢病毒悬液感染人胚肾HEK293T细胞,分别通过荧光显微镜与Western blot技术检测sFZD7的表达.最后,通过病毒感染与嘌呤霉素筛选获取稳定表达sFZD7的Mahlavu细胞株.实验结果表明,通过分子生物学手段已经成功地获得sFZD7慢病毒重组表达质粒p LVX-IRES-Zs Green1-sFZD7与p LVX-Puro-sFZD7;与此同时,已获得sFZD7重组慢病毒,感染HEK293T细胞后已通过荧光显微镜技术及Western blot证实了sFZD7的正确表达;此外,通过该sFZD7重组慢病毒感染肝癌Mahlavu细胞并经嘌呤霉素筛选手段成功地获得了稳定表达sFZD7的肝癌细胞株.上述结果可为sFZD7在肝癌细胞中的生物学功能与分子机制后续研究奠定基础.
- 裴哲曾中秋陈雨文李文华TANG Yunjie唐亚雄
- 关键词：WNT信号肝癌重组慢病毒稳定细胞系
