国家自然科学基金(30271385)
- 作品数：8 被引量：27H指数：3
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- 超抗原SEB诱导的免疫耐受参与免疫赦免部位的应答反应被引量：2
- 2003年
- 目的:探讨超抗原葡萄球菌肠毒素B(SEB)诱导的耐受性是否参与免疫赦免部位的应答反应。方法:以LEW大鼠作为受体,F344大鼠作为供体,进行角膜移植。将受体鼠随机分成5组,即在手术前7 d及移植后7 d,以球旁途径分别注射30μg/kg、60μg/kg、90μg/kg和120μg/kg的SEB组和注射生理盐水的阴性对照组。阳性对照组分别为移植后注射糖皮质激素(GC)、FK506、环孢素A((CsA)和白介素-1受体拮抗剂(IL-1 ra)组。镜下观察移植后30 d内角膜的浑浊、水肿和新生血管,用抗排斥反应指数记录移植片存活天数。采用NK1.1-PE荧光抗体进行组织染色,观察移植后不同时间受体鼠角膜片的炎症细胞浸润和受体鼠眼局部NK细胞的变化。结果:注射120μg/kg SEB的大鼠移植片比生理盐水对照组的存活天数延长了22 d。与FK506、CsA、IL-1ra和GC组相比也明显延长。120μg SEB/kg受体鼠的移植片排斥反应指数为3.42±2.18,明显低于对照组6.58±3.15(P<0.01)。其中水肿指数和新生血管指数明显降低。组织染色结果显示,SEB注射后NK细胞数量增加。结论:注射SEB能降低大鼠角膜移植的排斥反应,提示SEB诱导的耐受性参与了免疫赦免部位的应答反应。
- 何庆华潘志强张文华接英武宇影徐亮彭虹陈钰
- 关键词：超抗原SEB诱导免疫耐受
- 细胞因子和树突状细胞参与超抗原SEB诱导高危角膜移植免疫抑制的研究被引量：3
- 2007年
- 目的探讨细胞因子和树突状细胞(DCs)在细菌性超抗原金黄色葡萄球菌外毒素B亚单位(SEB)诱导的高危角膜移植免疫抑制中的作用,比较SEB与糖皮质激素作用的差异。设计实验性研究。研究对象Fisher 344和Lewis纯系大鼠。方法供受体分别为纯系大鼠Fisher344和Lewis,SEB组和对照组分别于术前腹腔注射0.2ml SEB(75μg/ml)和生理盐水0.2ml/1次/4日,共3次;地塞米松组术后第1天开始结膜下注射地塞米松0.1ml(1mg/ml),1次/日,共2周。缝线法诱导受体角膜新生血管,穿透性角膜移植术后观察植片的存活状况,液相芯片技术检测术前及术后第10、30天房水和外周血中细胞因子含量,免疫组织化学方法检测角膜植片细胞因子及DCs表达情况。主要指标角膜植片平均存活时间,房水、外周血、角膜植片中细胞因子含量。结果与对照组角膜植片平均存活时间(MST)比较,SEB组的MST延长3.8天(P=0.00),地塞米松组MST延长7.1天(P= 0.01),SEB组和地塞米松组MST差异无统计学意义(P=0.26)。液相芯片检测显示,SEB组房水中IL-1β含量较对照组减少,IFN-γ、IL-4,IL-6含量明显升高,外周血仅可检出IFN-γ、IL-6两种细胞因子,变化趋势同房水中改变。免疫组化显示SEB组植片中IL-2较对照组明显减少,而IFN-γ、IL-4、IL-6明显升高,植片中DCs表达接近对照组,但表型不同。对照组以成熟DCs为主,SEB组以未成熟DCs为主。结论SEB在防治高危角膜移植免疫排斥反应方面与糖皮质激素无差异,但作用机制不同。SEB通过影响眼部细胞因子的产生调节免疫反应,诱导免疫抑制,DCs也可能参与作用。
- 谭小波潘志强陈钰接英张文华武宇影
- 关键词：超抗原角膜移植树突状细胞免疫耐受
- 超抗原SEB可以活化NKT细胞
- 2007年
- NKT细胞是一群表达NK1．1＋TcRαβ＋抗原的淋巴细胞亚群，最初是在那些NK1．1＋的小鼠中发现，2000年被命名为第四类的淋巴细胞。小鼠的NKT细胞主要是CD4^＋或者CD4～CD8^-细胞。大量的NKT细胞存在于肝脏，大约占T淋巴细胞的30％，外周血、脾脏中很少，只占2％前后。NKT细胞的作用主要有两个方面，效应功能和调节功能；它可以抑制Th1细胞的过激，控制IL-2，IFN-γ的产生和后期的细胞增殖，可以调节Th2细胞的细胞因子产生，使T细胞分化朝Th2方向偏移；它也可以在Th1细胞抵抗感染和肿瘤时提供帮助以及可以阻止部分细胞的分化，控制自身免疫病的发生和发展。NKT细胞的活化主要依靠类脂多肽类抗原如半乳糖神经酰胺（alpha-galactosylceramide，简称α-Galcer）和类似于MHCI类抗原的CDId递呈抗原。目前还无法证明其它脂类或糖脂类抗原能否激活NKT细胞，并使其发挥功能。我们以往的研究发现葡萄球菌肠毒素B（SEB）作为耐受原不仅能诱导淋巴细胞的耐受，在异基因骨髓移植、皮肤移植和角膜移植中都显示出明显抗排斥效应。在外周淋巴细胞移植中，用SEB可诱导带有供体淋巴细胞表面分子特征的微嵌合体形成；
- 陈钰
- 关键词：超抗原SEBNKT细胞活化葡萄球菌肠毒素异基因骨髓移植CD4^+
- 超抗原金黄色葡萄球菌肠毒素B亚单位防治大鼠高危角膜移植免疫排斥反应的研究被引量：9
- 2005年
- 目的探讨超抗原金黄色葡萄球菌肠毒素B亚单位(SEB)对大鼠高危角膜移植免疫排斥反应的防治作用机制。方法实验供体为30只Fisher344和4只Lewis大鼠,受体为64只Lewis大鼠。将实验受体大鼠按随机数字表法随机分为4个治疗组和1个对照组,每组12只;同时设4只Lewis大鼠行同种同体移植。治疗组术前分别用02ml不同浓度的SEB(25、50、75、100μg/kg)腹腔注射诱导免疫耐受。对照组用02ml生理盐水腹腔注射。缝线法诱导受体角膜新生血管,然后行穿透性角膜移植术,术后观察记录植片的存活状况并对受体全身免疫状态进行免疫组化染色,流式细胞分析和淋巴细胞增殖能力检测。结果对照组大鼠角膜植片的平均存活时间为(730±067)d,SEB治疗组(25、50、75、100μg/kg)植片存活时间分别为(643±127)d、(1070±250)d、(1250±141)d、(883±194)d。免疫组织化学染色和流式细胞检测显示SEB治疗组大鼠角膜植片中淋巴细胞的浸润以及外周免疫器官中淋巴细胞亚群百分数较对照组明显降低。此外,SEB治疗组中受体淋巴细胞对供体抗原刺激的反应性降低,外周血中白细胞介素(IL)2浓度降低而IL10浓度升高,其中以SEB75μg/kg组作用最明显。结论在一定剂量范围内,SEB可以诱导大鼠免疫耐受形成,减少局部和全身淋巴细胞数量。
- 接英潘志强陈钰张文华徐亮武宇影彭虹
- 关键词：超抗原金黄色葡萄球菌角膜移植免疫排斥反应
- 自然杀伤T细胞结膜下注射防治大鼠角膜移植免疫排斥反应的初步研究被引量：3
- 2007年
- 目的探讨自然杀伤T细胞（NKT）对大鼠角膜移植免疫排斥反应的防治作用。设计实验性研究。研究对象8只Fisher 344大鼠为供体，16只Lewis大鼠为受体。方法无菌取Lewis大鼠脾脏中淋巴细胞，RPMI1640培养基体外培养三周后，流式细胞仪分选出NKT细胞（浓度5×10^4／ml）。取8只Fisher 344大鼠为供体，16只Lewis大鼠为受体行穿透性角膜移植术。将受体大鼠随机分为治疗组和对照组，每组各8只。治疗组在手术结束时结膜下注射0．1ml上述浓度的NKT细胞，对照组注射相同体积生理盐水。术后观察记录植片的存活情况，术后第10天，每组2只大鼠取材，行组织病理学、免疫组织化学和流式细胞仪检测。主要指标角膜植片平均存活时间，组织病理学及免疫组织化学染色检查淋巴细胞浸润情况。结果对照组角膜植片平均存活时间为（8．00±1．58）天，NKT细胞治疗组为（26．00±1．34）天。组织病理学检查可见对照组大鼠角膜植片重度水肿，角膜基质纤维板层排列紊乱，大量炎性细胞浸润，新生血管长入植片。而治疗组植片仅表现为轻度水肿，少量炎性细胞浸润。免疫组织化学染色可见对照组植片中大量CD4＋和CD8＋淋巴细胞浸润，治疗组中仅见少量CD4＋和CD8＋淋巴细胞浸润。流式细胞仪检查结果表明在治疗组脾脏中NKT细胞为（3．90±0．32）％，明显高于对照组（1．85±0．21）％；外周血中治疗组NKT细胞为（1．34±0．12）％，对照组为（3．59±0．23）％。结论NKT细胞结膜下注射可延长角膜移植片存活时间，为防治角膜移植免疫排斥反应提供新的思路。
- 刘颖接英潘志强武宇影
- 关键词：自然杀伤T细胞角膜移植
- CD4＋CD25＋调节性T细胞参与大鼠角膜移植免疫耐受的研究被引量：9
- 2007年
- 目的探讨超抗原金黄色葡萄球菌肠毒素B（SEB）诱导大鼠高危角膜移植免疫耐受时CD4＋CD25＋调节性T细胞在眼局部及全身的表达情况。方法本实验采用对照设计，以13只SD大鼠作为供体，26只Wistar大鼠作为受体建立高危穿透性角膜移植模型。所有受体大鼠抽签法随机分为2组，对照组和SEB组分别腹腔注射生理盐水和SEB（75μg/kg体重），1次／4d，共3次，末次注射后1d行右眼穿透性角膜移植术。术后观察大鼠角膜植片的存活时间，并采用免疫荧光染色分析CD4＋CD25＋T细胞在大鼠角膜植片和虹膜的表达，使用流式细胞学方法分析外周血中的CD4＋CD25＋T细胞百分数。结果对照组大鼠角膜植片平均存活时间为（11．63±2．83）d，SEB组为（14．13±0．99）d，两组间比较差异有统计学意义（P〈0．05）。组织病理学检查可见发生排斥的角膜植片有大量炎性细胞浸润，炎性细胞数量与排斥反应程度呈正相关性。直接免疫荧光染色检查可见术前两组角膜组织均不表达CD4＋CD25＋T细胞，而术后20d两组均有表达。虹膜铺片直接免疫荧光染色检查术前对照组未见CD4＋CD25＋T细胞表达，而SEB组（首次注射SEB后第10天）虹膜片可见CD4＋CD25＋T细胞表达，术后第20天两组大鼠虹膜铺片均可见CD4＋CD25＋T细胞表达，并且SEB组阳性细胞数更多。流式细胞学方法分析显示手术前后、对照组大鼠外周血中CD4＋CD25＋T细胞的百分数无变化，而SEB组呈先升高、后降低的变化趋势。结论CD4＋CD25＋调节性T细胞参与超抗原SEB诱导大鼠高危角膜移植术后免疫耐受的形成。
- 奚瑾潘志强接英刘丽敏王立
- 关键词：T淋巴细胞免疫耐受角膜移植
- 超抗原SEB诱导大鼠高危角膜移植免疫耐受淋巴细胞差异表达基因的研究
- 2006年
- 目的应用基因芯片研究高危角膜移植中产生免疫耐受和发生排斥反应的受体大鼠淋巴细胞的差异基因。方法供体和受体分别为Fisher344和Lewis大鼠。受体大鼠随机分为2组,治疗组术前腹腔注射0·2ml SEB(75μg/kg),每次间隔4d,共3次。对照组注射生理盐水。缝线法建立高危角膜移植动物模型。术后研究受体植片存活时间、免疫状态和淋巴细胞差异基因。结果对照组植片平均存活时间为(7·30±0·67)d,治疗组为(12·50±1·41)d,(P<0·05)。治疗组淋巴细胞对ConA和供体淋巴细胞抗原的增生反应明显降低,DTH反应强度也明显降低。基因芯片显示两组淋巴细胞存在23个差异基因,与神经系统、肿瘤生长以及编码酶类有关。结论SEB可诱导高危角膜移植免疫耐受,相关淋巴细胞差异基因的作用需进一步研究。
- 接英潘志强徐亮陈钰张文华武宇影彭虹
- 关键词：超抗原免疫耐受角膜移植差异基因
- 在小鼠异基因骨髓细胞移植中超抗原SEB诱导的耐受特征被引量：5
- 2005年
- 目的: 研究在异基因骨髓细胞移植中葡萄球菌肠毒素B(SEB)诱导的耐受强度和细胞学特征.方法: 选用C57BL/J小鼠作为受体,BALB/c小鼠作为供体.所有受体小鼠在接受6×107骨髓细胞前均接受6.0Gy 60Coγ射线的照射,随机分成3组: 组1为只接受6.0Gy 60Coγ射线照射的对照组(照射对照组,RI);组2为照射后注射生理盐水(移植对照组,Tran.); 组3为照射后注射60 μg SEB(SEB组).180 d后由组2和组3实验鼠获得两组C57BL/L-BALB/c嵌合体小鼠.用流式细胞术分析移植后30～180d受体小鼠体内CD4+ T、 CD8+ T、 CD3+/NK1.1+ NKT淋巴细胞亚群的数量和MHC H-2Kb、 H-2Kd抗原表达的百分率,用MLR方法测定嵌合体小鼠淋巴细胞对ConA和异源性抗原的反应性.结果: (1)接受大剂量骨髓细胞移植后,注射SEB和注射生理盐水的两组小鼠均可存活180 d以上,SEB组小鼠呈现出BALB/c供体小鼠的颜色特征(白色);Tran.组小鼠呈现出其灰白色.(2)SEB组嵌合体小鼠对ConA的反应性明显低于RI组和Tran.组;对异源性抗原的应答高于Tran.组.(3)SEB组小鼠外周血中CD4+ T细胞的数量在移植后30～60 d明显下降,随后增加; CD8+T细胞的数量不变.CD3+/NK1.1+ NKT细胞的数量,从接受移植后30 d开始增加,随着时间的延长而递增,到180d达到5.71%.存活180 d的嵌合体小鼠,体内供体小鼠特有的MHC H-2Kd抗原的表达率高达80.95%,自体MHC H-2Kb抗原表达的百分率只占1.45%.(4)与SEB组相反,Tran.组小鼠CD8+ T细胞的数量持续下降; CD3+/NK1.1+NKT细胞的数量的增加只在移植后180 d上升达到5.07%.结论: 在异基因骨髓细胞移植中,SEB诱导的耐受性比单纯骨髓移植诱导的耐受性强.SEB诱导的耐受性与移植早期特异性CD4+ T细胞数量的减少和NKT细胞数的持续增加有关.反应性的降低表现为T细胞对ConA反应性的下降.
- 陈钰潘志强彭虹徐亮
- 关键词：超抗原免疫耐受NKT细胞
