国家自然科学基金(30170824)
- 作品数：4 被引量：2H指数：1
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- 人HSC70基因真核表达载体的构建和表达
- 2008年
- 目的构建HSC70(HSC)真核表达质粒,并在HepG2细胞中表达。方法采用RT-RCR方法从正常人肝细胞系QZE中得到HSC70的cDNA序列,然后克隆入pcDNATM3.1/V5-HisA载体,构建重组质粒pcDNA-HSC70;经酶切和测序鉴定后,将pcDNA-HSC70体外转染HepG2细胞系,瞬时表达带有His标签的HSC70融合蛋白;并通过免疫细胞化学方法检测蛋白表达情况。结果RT-PCR扩增到1960bp的HSC70 cDNA片断,经测序分析与GenBank中已知序列一致;重组质粒pcDNA-HSC70转染后的HepG2细胞中,可检测到瞬时表达的HSC70-His融合蛋白。结论成功构建重组质粒pcDNA-HSC70,并可以在真核细胞HepG2中瞬时表达。
- 苏海霞张景霞王安辉李端闫永平
- 关键词：肝细胞克隆真核表达
- 丙型肝炎病毒核心蛋白基因真核表达质粒的构建和表达被引量：1
- 2008年
- 目的:构建丙型肝炎病毒(HCV)核心蛋白真核表达质粒,并在HepG2细胞中稳定表达。方法:采用RT-RCR方法从丙型肝炎患者血清中得到HCVC区的cDNA序列,然后克隆入pcDNA3.0载体,构建真核表达质粒pcDNA-HCV,并进行酶切鉴定和测序鉴定;采用脂质体转染技术将pcDNA-HCV稳定转染于HepG2细胞系,并用G-418进行筛选;采用Western Blotting方法和免疫细胞化学方法检测HepG2细胞中HCV核心蛋白表达情况。结果:从HCV感染者血清中扩增得到的503bp HCV cDNA序列,属于HCV 1型基因C区,并成功构建了真核表达质粒pcDNA-HCV经Western blotting和免疫细胞化学检测,稳定转染的HepG2细胞中有HCV核心蛋白的表达结论:成功构建HCV核心蛋白真核表达质粒pcDNA-HCV。
- 张景霞苏海霞张磊李端闫永平肖丹卢娟门可
- 关键词：丙型肝炎病毒核心蛋白真核表达
- 紫外交联试验筛选结合于丙型肝炎病毒RNA核心区的细胞蛋白
- 2005年
- 目的从肝癌细胞系中筛选能够与丙型肝炎病毒(HCV)RNA核心区结合的细胞蛋白质分子。方法采用体外转录法得到HCV RNA核心区片断,从HepG2细胞中提取细胞蛋白质分子;通过核酸-蛋白紫外交联试验筛选HepG2细胞中可与HCV RNA核心区结合的蛋白分子,并用未标记核心区RNA 和载体RNA作为竞争物分析结合的特异性。结果HepG2细胞内有2个约为6.6×104和5.5×104的宿主蛋白分子与HCV RNA的核心区发生结合。未标记核心区RNA可以竞争性抑制地高辛标记的核心区RNA 与细胞蛋白的结合,而载体RNA对此结合无竞争性。结论HepG2细胞内存在着可以与HCV RNA核心区结合的蛋白分子。
- 苏海霞张景霞赵小宁卢娟闫永平
- 关键词：RNA细胞蛋白丙型肝炎病毒RNAHCV-RNAHEPG2细胞
- 紫外交联实验筛选HCV RNA结合蛋白的应用被引量：1
- 2006年
- 目的选择一种用于筛选与丙型肝炎病毒(HCV)RNA核心区结合的细胞蛋白质分子较佳方法。方法用体外转录的方法制备地高辛标记(DIG)-HCV RNA;从HepG2细胞中提取细胞蛋白质分子。分别用紫外交联实验(UV)和凝胶迁移实验(EMSA)筛选HepG2细胞中可与HCV RNA结合的蛋白质分子。结果2种实验方法均可检测到细胞蛋白质分子与HCV RNA结合,但凝胶迁移实验结果所见DIG-RNA信号比较弥散,而紫外交联实验的结果可见比较清晰的RNA-结合蛋白条带。结论紫外交联实验是用于筛选HCV-RNA结合蛋白的首选方案。
- 张景霞苏海霞李端闫永平门可卢娟王安辉
- 关键词：RNA结合蛋白
