国家高技术研究发展计划(2007AA022465)
- 作品数：7 被引量：22H指数：3
- 相关作者：杨占秋张云邓小昭姚苹苹朱函坪更多>>
- 相关机构：武汉大学中国人民解放军南京军区军事医学研究所浙江省疾病预防控制中心更多>>
- 发文基金：国家高技术研究发展计划国家自然科学基金江苏省自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 湖北地区HFRS患者血清与欧洲汉坦病毒重组核抗原的反应性研究
- 2008年
- 目的 用欧洲汉坦病毒流行株制备重组核抗原，检测湖北地区HFRS患者血清中汉坦病毒特异性抗体，观察流行于不同地区汉坦病毒的相关性。方法 收集湖北地区34例HFRS患者急性／恢复期血清，以ELISA法检测血清标本对欧洲汉坦病毒重组核抗原（rNP）的反应性。结果 多不拉伐病毒（DOBV）-rNP对IgA抗体检出率最高，汉滩病毒（HTNV）-rNP对IgG抗体检出率最高，两者对IgM抗体检出率的差异无统计学意义；普马拉病毒（PUUV）-rNP对各种抗体检出率均低，但有3例患者急性期和恢复期标本对3种PUUV-rNP均有很强反应性。定量分析结果发现，IgM抗体水平急性期较高，IgA抗体水平急性期、恢复期均较高；IgA、IgG抗体水平恢复期均显著升高。结论 DOBV-rNP对湖北地区HFRS患者血清检出率高，IgA抗体水平在急性期和恢复期均较高，对疾病的监测具有重要意义；湖北地区可能存在PUU型和DOB型汉坦病毒流行。
- 李晴陈文杨占秋
- 关键词：肾综合征出血热汉坦病毒抗体水平
- 小盾纤恙螨自然双重感染汉坦病毒和恙虫病东方体及叮刺传播的研究被引量：13
- 2010年
- 目的了解汉坦病毒（HV）和恙虫病东方体（OT）可否在小盾纤恙螨体内双重自然感染及通过叮刺传播的状况。方法在肾综合征出血热（HFRS）和恙虫病混合流行区，将采集的3459只鼠体恙螨和用小黑板诱集的3265只游离恙螨，按1、5、10只螨数分组，每组叮刺6只小白鼠。15d后取小白鼠肺和脾脏制成悬液，经脑内途径接种小白鼠传6代，每代均采用间接免疫荧光法（IFAT）和Giemsa法检测HV和OT病原体；取不同恙螨数的螨制成无菌悬液接种Vero—E6细胞传代，分离检测HV和OT病原体。采用PCR法检测HV．RNA和OT—DNA。结果经传代后HV和OT双重感染鼠的检测情况为，HV单纯阳性鼠体螨5、10只组在第6代各检测到1只，OT单纯阳性鼠体螨10只组在第6代检测到1只，HV、OT双重阳性鼠体螨1只组在第5、6代均检测到1只，HV、OT双重阳性鼠体螨5、10只组在第6代各检测到1只。1、5、10只游离螨组叮刺小白鼠后，在第6代各检测到1只。Vero—E6细胞在第4代时，HV、OT双重阳性的鼠体螨5、10只螨组，各有1份检测到HV和OT双重阳性的感染细胞。传至第6代时，HV、OT双重阳性的鼠体螨1只螨组和游离螨1、5、10只螨组均检测到HV和OT双重阳性的感染细胞。经PCR检测到HV—RNA、OT—DNA。结论小盾纤恙螨体内可自然双重感染HV和OT病原体，并可经叮刺传播。
- 于娟邓小昭杨占秋姚苹苹朱涵坪熊海蓉李春雷张云
- 关键词：汉坦病毒恙螨科组织培养技术
- 浙江省丽水地区2株汉坦病毒分离株的型别鉴定和基因差异研究被引量：3
- 2009年
- 目的从浙江省丽水地区肾综合征出血热（HFRS）疫区阳性鼠肺标本中分离汉坦病毒（HV），并对丽水分离株进行分子生物学鉴定，分析M和S片段基因序列以确定毒株的型别和基因差异程度。方法收集宿主动物标本，采用直接免疫荧光检测鼠肺标本HV抗原。将HV抗原阳性的鼠肺标本接种Vero-E6细胞，分离HV。提取病毒总RNA，应用反转录聚合酶链反应（RT-PCR）扩增病毒M和S基因全片段，克隆入质粒载体，纯化后测定序列，并同Hv其他病毒株进行比较。结果成功分离到2株HV，扩增出2株病毒的M和S全片段并测定了序列，经对核苷酸序列分析表明，2株病毒与现有的HTNV有最高的同源性，均为HTNV，但与国内外其他的HTNV核苷酸差异高达13.4％-20.7％和10.3％-16.1％。用M和S片段核苷酸序列所构建的系统进化树显示，2毒株分在HTNV发生群，与HTNV的Z10、A9、Z5病毒株亲缘关系最近，但独自构成一进化支。结论浙江丽水分离株可以定型为HTN型病毒，与国内外其他的HTN型病毒基因差异较大。
- 姚苹苹朱函坪徐芳王志刚梅玲玲雷永良谢荣辉王复甦朱智勇邓小昭张云
- 关键词：肾综合征出血热汉坦病毒基因型系统发生分析
- 同一疫区汉坦病毒、恙虫病东方体共有宿主和媒介的分子流行病学研究被引量：1
- 2008年
- 目的了解汉坦病毒（HV）和恙虫病东方体（OT）在宿主和媒介体内的共生和自然感染情况。方法采用现场流行病学调查，捕鼠166只、采螨3829只，用组织细胞培养和聚合酶链反应（PCR）技术从宿主和媒介体内分离和检测HV和OT病原体，以及HV．RNA、OT-DNA。结果其中，捕获的105只黑线姬鼠中HV阳性3只，OT阳性2只，HV、OT同时阳性2只；41只褐家鼠中HV阳性2只，OT阳性1只，HV、OT同时阳性1只。从15份双重感染HV和OT阳性鼠体螨中分离到HV病原体2株，OT2株，同时分离到HV和OT有1份。结论HV和OT可同时自然感染并共生于宿主（鼠类）体内，而HV和OT能否同时感染媒介（恙螨）尚待证实。研究结果对HV和OT的流行和预防有重要的理论意义。
- 邓小昭张云孔晶王忠灿杨占清黄尉初苏德茂严国进杨占秋
- 关键词：恙螨科汉坦病毒恙虫病东方体流行病学研究
- 汉坦病毒感染的量子点标记免疫检测研究
- 2011年
- 目的 应用量子点荧光标记技术和间接免疫法,建立一种新的汉坦病毒（HV）感染的免疫检测技术.方法 采用碳二亚胺交联法,在水溶性量子点表面修饰protein G和羊抗人IgG.以HV抗原片为固相载体,QDs-PG-IgG复合物为标记二抗,检测待检血清中的HV特异性抗体,并对检测条件进行优化.结果 量子点与羊抗人IgG的最佳偶联条件：反应时间2h、pH 6.0、羊抗人IgG浓度20 μg/ml.检测体系的最佳反应条件：量子点标记二抗的最适工作浓度为1：200,HV感染阳性血清检测的最大稀释度为1：1280.结论 成功建立了简便、快速的HV感染的量子点标记免疫检测方法,该方法具有良好的灵敏度和特异性,抗荧光猝灭性强,为进一步实现HV抗体的单分子定量检测奠定基础.
- 沈雅王洁巴龙姚苹苹邓小昭王长军朱函坪张云杨占秋
- 关键词：汉坦病毒属荧光抗体技术
- 肾综合征出血热（HFRS）、汉坦病毒肺综合征（HPS）和汉坦病毒（HV）研究进展——记第八届国际HFRS/HPS和HV学术会议被引量：6
- 2010年
- 第八届国际肾综合征出血热（HFRS）、汉坦病毒肺综合征（HPS）和汉坦病毒（HV）学术会议于2010年5月20-22日在希腊首都雅典举行.大会共收到学术论文157篇,其中大会报告51篇.主要包括有关近年来HFRS/HPS病原学、流行病学、发病机制以及诊断治疗等一些新的研究进展.会议学术报告相关内容简述如下.
- 李金林凌佳馨杨占秋
- 关键词：汉坦病毒肺综合征肾综合征出血热HV
- 杆状病毒为载体的重组汉坦病毒S基因在Vero—E6细胞中的表达及其生物活性
- 2011年
- 目的 将汉坦病毒HV Z10株S基因（HV5）插入已含CMV基因的杆状病毒转移载体pDual-CMV，筛选重组杆状病毒BAC-pDual-CMV-HVS，转化Vero-E6细胞，用于血清汉坦病毒抗体的检测。方法 以pEGFP-N1质粒为模板，通过PCR扩增CMV基因序列，酶切插入杆状病毒转移载体pFastTBacDUAL,构建含CMV的转移载体pDual-CMV。酶切含HV S基因的pMD19-Z10S质粒，插入pDual-CMV，构建pDual-CMV-HVS，转化感受态DH10BAC，筛选并取重组杆状病毒基因，转染TN细胞，筛选重组杆状病毒BAC-pDual-CMV-HVS。BAC-pDual-CMV-HVS转化Vero-E6细胞，制备抗原片，用于血清中抗汉坦病毒抗体的检测并与传统方法进行比较。结果 经测序成功构建重组杆状病毒转移载体pDual-CMV-HVS，按杆状病毒表达系统操作方法，成功筛选BAC-pDual-CMV-HVS，转化VeroE6细胞，经汉坦病毒抗体阳性血清检测，HV S基因在细胞中得到表达，与传统方法一致。结论 成功筛选BAC-pDual-CMV-HVS重组杆状病毒，可用于汉坦病毒抗原片的制备，该抗原片制备方法简便、无需特殊设备，可用汉坦病毒抗体的检测。
- 朱函坪姚苹苹王洁杨章女徐芳谢荣辉张云朱智勇
- 关键词：汉坦病毒属病毒蛋白质类荧光抗体技术
