山东省自然科学基金(ZR2010HM032)
- 作品数：10 被引量：37H指数：4
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- 紫外线B照射对人晶状体上皮细胞质膜钙ATP酶3表达的影响被引量：3
- 2014年
- 背景 细胞质膜钙ATP酶3（PMCA3）参与维持晶状体上皮细胞（LECs） Ca2＋的平衡,可能与白内障的病理过程有关,紫外线B（UVB）是引起白内障的重要因素之一,但UVB对LECs中PMCA3表达的影响少有报道. 目的 研究UVB对人LECs系B-3（HLE B-3） PMCA3表达的影响. 方法 对HLE B-3细胞进行培养和传代,当细胞达80％以上融合时分别暴露于用不同剂量（0、5、10、20 mJ·s/cm2）的UVB分别照射0、20、40和80 s,然后继续培养24、48和72 h,用MTT法检测不同剂量UVB照射后细胞的生存率;用JC-1染色法检测UVB照射后细胞线粒体膜电位（△ψm）的变化;以DCFH-DA染色法检测UVB照射后细胞内活性氧簇（ROS）的变化;采用annexin V-FITC/PI染色法检测UVB照射后细胞的凋亡情况;用Fluo-3/AM染色法检测细胞内Ca2＋浓度的变化;分别采用实时荧光定量PCR（real-time PCR）法和Western blot法检测UVB照射后细胞中PMCA3 mRNA及PMCA蛋白的表达变化. 结果 随着UVB照射剂量的增加和照射时间的延长,细胞生存率均明显下降,差异均有统计学意义（F分组=72.411,P=0.000; F时间=36.588,P=0.000）,其中10 mJ·s/cm2、20 mJ·s/cm2 UVB照射后24 h HLE B-3细胞的生存率分别为（75.3±2.2）％和（48.7±4.5）％,明显低于对照组的（100.0±0.0）％,差异均有统计学意义（P=0.001、0.000）;5、10、20 mJ·s/cm2 UVB照射后48 h细胞的生存率分别为（84.9±1.2）％、（69.3±17.4）％和（32.8±4.5）％,均明显低于对照组的（100.0±0.0）％,差异均有统计学意义（P=0.047、0.000、0.000）;5、10、20 mJ·s/cm2 UVB照射后72 h细胞的生存率分别为（55.1±3.0）％、（42.1±1.9）％和（26.1±4.7）％,与对照组的（100.0±0.0）％相比生存率明显降低,差异均有统计学意义（均P=0.000）.JC-1染色法检测表明,对照组细胞内可见红色荧光,5mJ·s/cm2 UVB照射后细胞内出现绿色荧光,10 mJ·s/cm2及20 mJ·s/cm2 UVB照射组出现绿色荧光增强,红�
- 吴秋欣郭大东毕宏生王道光
- 关键词：紫外线B钙稳态人晶状体上皮细胞
- 紫外线辐射致晶状体上皮细胞凋亡机制的研究进展被引量：6
- 2011年
- 许多流行病学调查和实验研究结果已经证实:紫外线辐射与非先天性白内障的发生、发展有密切的关系;研究表明,晶状体上皮细胞凋亡是非先天性白内障形成的共同细胞学基础。近年来,越来越多的研究发现,晶状体上皮细胞凋亡与非先天性白内障的形成密切相关。本文就紫外线辐射诱导晶状体上皮细胞凋亡的分子机理与白内障发生作一综述。
- 吴秋欣毕宏生郭大东
- 关键词：紫外线晶状体上皮细胞细胞凋亡
- 氯化锌对紫外线损伤的人晶状体上皮细胞的保护作用
- 2014年
- 目的研究适当浓度的ZnCl2对紫外线(ultraviolet B,UVB)损伤的人晶状体上皮细胞(human lens epithelial cell,HLEC)的保护作用及其作用机制。方法用MTT法检测空白对照组、单纯紫外照射组和2 mg·L-1、3 mg·L-1、4 mg·L-1ZnCl2预处理后UVB照射(实验组)HLEC B-3的生存率;实时细胞电子分析系统(RT-CES)动态监测ZnCl2(2mg·L-1、3 mg·L-1、4 mg·L-1)预处理对UVB照射后HLEC B-3细胞增殖的影响;DAPI染色法检测各组细胞核的变化;实时荧光定量PCR和酶联免疫吸附试验(ELISA)检测HLEC B-3中caspase-12 mRNA和蛋白质表达的变化。结果 MTT结果表明,单纯紫外照射组和ZnCl2(2 mg·L-1、3 mg·L-1、4 mg·L-1)预处理实验组24 h细胞生存率分别为34.47%±9.31%、65.91%±12.46%、64.30%±16.24%和46.36%±6.28%;48 h细胞生存率分别为8.31%±1.38%、53.82%±11.34%、59.25%±7.58%和36.57%±8.41%;72 h细胞生存率分别为6.75%±3.71%、48.29%±10.06%、56.53%±8.47%和39.57%±8.93%。RT-CES分析结果显示,ZnCl2(2 mg·L-1、3mg·L-1、4 mg·L-1)预处理可抑制UVB照射诱发的HLEC B-3的坏死和凋亡;DAPI染色结果表明,ZnCl2可减少UVB照射引起的HLEC B-3细胞核固缩和碎裂;RT-PCR和ELISA检测结果表明,ZnCl2可抑制UVB照射诱发的caspase-12 mRNA和蛋白质的表达升高。结论适当浓度的ZnCl2可抑制UVB照射后HLEC B-3中caspase-12的表达上调,进而对体外培养的HLEC B-3细胞UVB损伤起到保护作用。
- 杜宇翔郭大东唐凯司俊康沙芳毕宏生
- 关键词：锌离子晶状体上皮细胞紫外线CASPASE-12
- 手法小切口白内障手术的安全性和治疗效果评价(英文)被引量：4
- 2012年
- 手法小切口白内障术(manual small incision cataract surgery,MSICS) 特别是在发展中国家已广泛应用于临床手术。本文旨在比较传统白内障囊外摘除术(extracapsular cataract extraction,ECCE) 、MSICS以及超声乳化白内障吸除术治疗效果以及安全性(术中并发症以及术后并发症) 。通过使用PubMed搜索引擎,我们收集了传统ECCE、MSICS以及超声乳化白内障吸除术的相关文献,以评价其安全性和治疗效果。同时,也参考了国内出版的相关文献。结果发现,与超声乳化白内障吸除术相比,传统ECCE以及MSICS也取得了很好的治疗效果,并且具有并发症少等优点。MSICS不需要依赖昂贵的仪器,并且具有手术快速、费用低廉以及技术门槛低等特点,特别适用于硬核白内障的治疗。虽然在白内障手术治疗过程中MSICS需要一定的技术和耐心,但它仍然是一种安全、有效、经济治疗手段,特别是在发展中国家可以替代超声乳化进行白内障的治疗。
- 郭大东毕宏生曲毅
- 关键词：白内障手术超声乳化白内障吸除术白内障囊外摘除术
- 高效液相色谱法及SDS-PAGE分析紫外线照射致白内障大鼠晶状体相关蛋白表达谱的变化
- 2013年
- 目的建立中波紫外线照射诱导大鼠发生白内障的实验方法,应用聚丙烯酰胺凝胶电泳法(sodium dodecyl sulfate polyacrylamide gel electrophoresis,SDS-PAGE)及高效液相色谱法分析紫外线照射致大鼠晶状体相关蛋白表达谱的变化。方法利用中波紫外线分别照射大鼠0d、1d、3d、7d,建立实验性白内障大鼠模型,并应用SDS-PAGE检测晶状体总蛋白的表达情况以及高效液相色谱法分析晶状体相关蛋白表达谱的变化。结果与未经紫外线照射的大鼠晶状体相比,紫外线照射大鼠1d后,晶状体透明度无明显变化,照射3d后开始出现轻度晶状体混浊,7d后可形成皮质性白内障。应用SDS-PAGE检测,经紫外线照射后晶状体总蛋白表达量有所改变;高效液相色谱法检测晶状体相关蛋白表达谱的变化,发现随照射时间的延长,晶状体相关蛋白中有1种蛋白下调表达,4种蛋白为先上调后下调表达,2种蛋白为先下调后上调表达,2种蛋白表达无规律。结论成功应用中波紫外线照射方法制作了白内障大鼠模型;紫外线照射可使晶状体相关蛋白表达发生改变,变化趋势呈多样性。
- 王道光郭大东毕宏生郭俊国吴秋欣
- 关键词：高效液相色谱法中波紫外线
- 氯化锌对体外培养人晶状体上皮细胞生长的抑制作用及其机制
- 2015年
- 背景 锌离子有抑制肿瘤细胞增生、诱导癌细胞凋亡的作用,眼科常用于结膜炎和沙眼治疗的局部用药.迄今为止,关于锌离子对人晶状体上皮细胞（LECs）增生的研究较少.目的 研究氯化锌（ZnCl2）对人LECs细胞株HLEB-3增生的影响及其作用机制.方法 对HLEB-3进行常规细胞培养和传代,在培养基中加入不同质量浓度的ZnCl2,使终质量浓度分别为5、10、20、40和80 mg/L,继续培养细胞24、48和72 h,未添加ZnCl2的细胞作为对照组.采用MTT法检测各组培养细胞的活力;采用JC-1荧光染色法测定细胞线粒体膜电位（△Ψm）的变化;采用流式细胞仪检测不同细胞周期的细胞比例;采用实时荧光定量PCR法和ELISA法分别检测细胞中bcl-2 mRNA及其蛋白的表达量,并对各组检测结果进行比较.结果 对照组培养的细胞呈镶嵌多边形,排列紧密;不同质量浓度ZnCl2组细胞数目均减少,形态不规则,细胞排列紊乱.随着ZnCl2质量浓度的增加和ZnCl2作用时间的延长,细胞生存率均明显降低,总体比较差异均有统计学意义（F质量浓度=173.949,P=0.000;F时间=16.997,P=0.000）.对照组细胞膜呈橙红色荧光,随着ZnCl2质量浓度的增加,不同质量浓度ZnCl2处理后橙红色荧光逐渐减弱,绿色荧光逐渐增强.不同质量浓度ZnCl2组处于S期和G2/M期的细胞比例明显多于对照组,而Go/G1期的细胞明显少于对照组,总体差异均有统计学意义（S期：F=15.594,P=0.000; G2/M期：F=12.792,P=0.000;Go/G1期：F=43.366,P=0.000）.对照组细胞中bcl-2mRNA的相对表达量为1.00±0.00,而5、10、20、40和80 mg/L ZnCl2组bcl-2 mRNA的相对表达量分别降至0.32±0.13、0.07±0.03、0.14±0.05、0.01±0.00和0.12±0.06,差异均有统计学意义（均P＜0.01）;对照组细胞中bcl-2蛋白的表达水平为（138.57±32.80）pg/mg,5、10、20、40和80 mg/L ZnCl2组分别为（79.20±5.70）、（79.95±6.21）、（61.02±10.74）、（72.05±11.61）和（55.97±10.53�
- 杜宇翔郭大东唐凯司俊康沙芳吴秋欣毕宏生
- 关键词：锌离子晶状体BCL-2基因细胞增生
- 视觉系统中钙库操纵钙内流通路的研究进展被引量：1
- 2014年
- 钙库操纵的钙通道(store operated Ca2+channel,SOCC)和钙库操纵的钙内流(store-operated calcium entry,SOCE)普遍存在于细胞之中,是非兴奋细胞主要的钙内流方式,参与了机体众多的生理过程。许多眼科疾病的发生和发展与SOCE的异常密切相关。本文就近年来对SOCE途径的机制、STIM和Orai不同亚型的结构及在眼科疾病中的作用研究进行了回顾,以期为眼科疾病治疗提供新的思路。
- 杜宇翔郭大东毕宏生
- 关键词：眼科疾病
- 紫外线照射对大鼠晶状体上皮细胞Ca2＋-ATP酶表达及活性影响的实验研究被引量：2
- 2013年
- 目的研究紫外线对大鼠晶状体上皮细胞(lens epithelial cell,LEC)Ca2+-ATP酶表达及活性的影响。方法 6周龄的Wistar大鼠随机分为对照组和实验组,对照组大鼠未照射紫外线,实验组分别给予紫外线照射1 d、3 d和7 d,照射完毕后摘除双眼眼球,取出晶状体。利用实时荧光定量PCR检测紫外线对LEC Ca2+-ATP酶在mRNA水平表达的影响,Western blot检测紫外线对LEC Ca2+-ATP酶在蛋白水平表达的影响,化学比色法检测LEC内超微量Ca2+-ATP酶活性的变化,HE染色观察LEC的形态学改变,免疫组织化学SP法检测LEC中Ca2+-ATP酶的表达情况。结果紫外线照射1 d、3 d、7 d后,大鼠LEC中Ca2+-ATP酶mRNA、蛋白和活性表达水平逐渐下降,其中ATP2A2和ATP2C2的mRNA表达水平分别是对照组的(0.60±0.10)倍、(0.20±0.05)倍、(0.05±0.01)倍和(0.40±0.10)倍、(0.10±0.05)倍、(0.02±0.01)倍;Ca2+-ATP酶蛋白相对灰度值分别是对照组的(0.66±0.01)倍、(0.46±0.02)倍和(0.15±0.01)倍;Ca2+-ATP酶活性表达水平分别是对照组的0.87倍、0.61倍及0.22倍。以上各实验组与对照组相比,差异均有统计学意义(均为P<0.05)。实验组LEC细胞形态学亦发生明显变化,免疫组织化学检测大鼠LEC Ca2+-ATP酶表达逐渐下降,平均光密度值与对照组比较差异均有统计学意义(均为P<0.05)。结论紫外线照射可降低大鼠LEC Ca2+-ATP酶的表达,且呈时间和剂量依赖性,提示Ca2+-ATP酶对紫外线诱导的LEC凋亡、维持晶状体透明以及在白内障的发生发展中具有重要意义。
- 王道光郭大东毕宏生杜然然吴秋欣刘冬梅
- 关键词：紫外线晶状体上皮细胞CA2+-ATP酶
- 飞秒激光辅助的白内障手术研究进展被引量：9
- 2015年
- 飞秒激光辅助的白内障手术已经引起许多眼科医生的关注,可能是今后治疗白内障的主要手段。在眼前节高质量成像的指导下,医生借助计算机的精确控制进行透明角膜主切口和辅助切口制作、前囊膜切开和碎核等操作。越来越多的数据显示,飞秒激光辅助治疗白内障能减少超声乳化的时间,制造更好的角膜切口,术后患者能获得更加稳定的屈光状态。我们就飞秒激光辅助的白内障手术研究进展进行综述。
- 刘冬梅刘正峰毕宏生郭大东
- 关键词：飞秒激光白内障手术
- 紫外线辐射致白内障发生的研究现状被引量：15
- 2011年
- 长期慢性的紫外线(UV)辐射被认为是老年性白内障形成的重要原因。皮质型和混合型白内障的发生与UV辐射关系密切。大量的流行病学研究表明,导致皮质型白内障发生的10%～30%相对危险因素可以归结于射线辐射。UV辐射,特别是UVB是皮质型白内障发生的重要危险因素。晶状体上皮细胞是晶状体代谢最活跃的部位,也是UV作用的重要靶组织。晶状体上皮细胞的过度凋亡以及晶状体蛋白损伤与白内障的发生、发展密切相关。
- 王道光毕宏生郭大东
- 关键词：紫外线白内障晶状体上皮细胞晶状体蛋白
