“十五”国家科技攻关计划项目(2001BA708B07-03)
- 作品数：2 被引量：4H指数：1
- 相关作者：廖威庞义石微孙钒宋少云更多>>
- 相关机构：广西职业技术学院中山大学广东医学院更多>>
- 发文基金：“十五”国家科技攻关计划项目国家高技术研究发展计划更多>>
- 相关领域：生物学农业科学更多>>
- 苏云金芽孢杆菌生产菌株溶原性噬菌体pep基因的克隆、表达及功能分析被引量：1
- 2008年
- 溶原性噬菌体的随机爆发是微生物杀虫剂苏云金芽孢杆菌(Bacillus thuringiensis,B.t)发酵生产的首要危害。【目的】本文的目的就是通过研究B.t生产菌株溶原性噬菌体的遗传背景,以便从分子水平上控制其在生产中的随机爆发。【方法】通过对广东梅州某公司的生产菌株MZ1采用Mitomycin C进行诱导,提取噬菌体颗粒MZTP01的基因组DNA,克隆和表达该噬菌体的pep基因,并进行了功能分析。【结果】诱导获得的溶原性噬菌体MZTP01斑点清晰,直径约1mm,成斑时间12h;从噬菌体基因组DNA双酶切(HindⅢ/EcoRⅠ)片段中回收长度为2362bp的D片段(Genbank登录号:AY639599),又从D片段中克隆了长度为1101bp、编码367aa、分子量为47kDa的pep基因,表达载体M15(pQE30pep)在大肠杆菌(Escherichia coli,E.coli)中表达获得了47kDa的清晰表达带,在1h时开始产生蛋白并有逐步上升的趋势;Western blot也在47kDa处得到一条清晰的条带;可溶性分析表明PEP蛋白在重组菌株中是以不可溶的包含体形式存在的,该蛋白的产生明显地抑制了宿主的生长速度;噬菌体PEP氨基酸序列之间的同源性比较表明,噬菌体MZTP01PEP蛋白与来自E.coliK12噬菌体的PEP蛋白的同源性程度最大。【结论】我们获得了一种新的噬菌体MZTP01,并首次报道了该噬菌体D片段的核苷酸序列及pep基因的功能,试验证明PEP表达蛋白能够水解酪蛋白,其活力相当于0.3mg/mL的胰蛋白酶。
- 廖威陈维春贾艳华庞义
- 关键词：苏云金芽孢杆菌克隆功能分析
- 苏云金芽孢杆菌两株溶原性噬菌体的生物学特性被引量：3
- 2007年
- 研究苏云金芽孢杆菌（Bacillus thuringiensis）的溶原性及其噬菌体的生物学特性，从生产菌株MZI中分离了两株溶原性噬菌体。MZI经诱导后产生直径约为3mm和1mm的噬斑，分离获得属长尾噬菌体科的噬菌体MZTP01和MZTP02两株；分别对6株和7株不同亚种的Bt菌株具有侵染力；免疫血清与相应噬菌体的中和反应K值分别为45和326，且两者无相关抗原性。MZTP01抵抗酸、碱、紫外线和热的能力比MZTP02强，但抵抗有机溶剂的程度比MZTP02弱。MZTP01的潜伏期为80min，裂解量为55；MZTP02的潜伏期为40min，裂解量为175。核酸结构分析均表明为线性dsDNA分子。两基因组DNA的凝胶电泳表明分子量均在9．4-23kb之间，并被Hind Ⅲ酶切分别产生8条和9条清晰条带。该菌株被证明为二元溶原菌，可能是造成生产损失的主要原因；为防治溶原性噬菌体提供了生物学信息。
- 廖威孙钒宋少云石微庞义艾云灿
- 关键词：苏云金芽孢杆菌噬菌体生物学特性
