国家自然科学基金(30300326)
- 作品数：17 被引量：53H指数：5
- 相关作者：顾大勇鲁卫平周元国王华石磊更多>>
- 相关机构：第三军医大学大坪医院清华大学深圳出入境检验检疫局更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金中国博士后科学基金深圳市科技计划项目更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学机械工程自动化与计算机技术更多>>
- 潜艇舱室密闭环境中微生物检测的基因芯片技术的研究进展被引量：1
- 2008年
- 为了探索研究用于潜艇舱室大气环境中致病微生物的在线检测技术理论,结合目前国际先进的基因芯片技术,设计利用肽核酸作为探针来进行在线检测;理论证明,肽核酸探针与DNA探针相比,其杂交的稳定性和特异性增加,且能在低盐浓度下进行杂交,因此它能够大大提高微生物学检测和医疗诊断的效率和灵敏度。PNA独特的生化属性已逐渐为世人所瞩目,PNA探针技术也得到了迅速发展,尤其是其在微生物检测领域中的应用,在结合潜艇舱室密闭环境的主要特点和舱室内致病微生物的来源和危害的基础上,发展以肽核酸为探针的基因芯片技术。
- 赵欣李震顾大勇王为宗
- 关键词：表面等离子体共振肽核酸
- 三重聚合酶链反应快速诊断耐甲氧西林葡萄球菌感染
- 2004年
- 目的 建立一种能快速有效地对葡萄球菌感染进行病原体诊断的方法。方法 利用三重聚合酶链反应技术 (TriplexPCR)同时检测葡萄球菌特异性 1 6SrRNA基因、金黄色葡萄球菌特异性Sa4 4 2基因和编码青霉素结合蛋白 (PBP2a)的mecA基因。结果 84株葡萄球菌的 1 6SrRNA基因 1 0 0 %阳性 ,其中 33株金黄色葡萄球菌的Sa4 4 2基因 1 0 0 %阳性 ,mecA基因阳性率为 78.8%。 5 1株凝固酶阴性葡萄球菌的Sa4 4 2基因 1 0 0 %阴性 ,mecA基因阳性率为 76 .5 %。 30株其他临床常见菌 1 6SrRNA、Sa4 4 2、mecA基因 1 0 0 %阴性。结论 该技术具有简便、快速、特异性强等特点 。
- 鲁卫平颜保松安琳
- 关键词：聚合酶链反应葡萄球菌基因诊断
- 表面等离子体共振芯片检测系统快速检测淋病奈瑟氏菌的研究
- 2007年
- 目的应用表面等离子体共振(SPR)芯片检测系统进行淋病奈瑟氏菌的快速检测。方法制备淋病奈瑟氏菌的SPR响应型基因芯片,并对最适的探针自组装时间,探针浓度,以及SPR检测的灵敏度,特异性等指标进行测定;对临床样品进行实际检测并与临床常规方法比较。结果当固定探针浓度为1500nM,自组装时间为4.5h时,构建的芯片具有较好的SPR检测效率,能够准确识别碱基的错配,其检测灵敏度大约为10fM;临床检测结果与常规经典鉴定方法相比结果一致。结论本芯片检测系统具有良好的检测性能,检测方法准确可靠。
- 顾大勇石磊禹华伟梁冰鲁卫平周元国徐云庆史蕾张雅鸥
- 关键词：表面等离子体共振基因芯片淋病奈瑟氏菌
- 奇异变形杆菌、洛菲氏不动杆菌16s rRNA3’-23s rRNA 5’间序列的克隆及测序被引量：5
- 2006年
- 目的:对奇异变形杆菌、洛菲氏不动杆菌16s rRNA 3’~23s rRNA 5’间序列(16S^23S rRNA intergenic spacer region,ISR)进行克隆测序,为分子探针技术鉴定两菌奠定基础。方法:针对临床常见致病菌16s rRNA 3’~23s rRNA 5’间序列两端的16S及23S rRNA保守序列设计PCR扩增的通用引物,对两菌进行扩增,利用PMD-18TVector质粒对两菌的PCR产物进行T载体克隆构建,测序后申报Genbank。结果:两菌的通用引物扩增产物构建的T载体克隆,测序结果经Blast分析,确定为两菌的ISR序列,申报Genbank获得接收。结论:成功的对奇异变形杆菌、洛菲氏不动杆菌ISR序列进行了克隆测序,该序列可以用于两种菌的通用引物PCR扩增技术鉴定。
- 石磊沈宜顾大勇王华周元国
- 关键词：奇异变形杆菌T载体
- 纳米级金颗粒在基因芯片检测技术中的研究进展被引量：14
- 2005年
- 纳米直径的金颗粒用于生命科学研究中的示踪技术已有较长的历史,由于其独特的物理、化学性质及生物相容性,近年来更是在芯片检测技术中得到了广泛的应用,特别是用不具备吸附能力离散的纳米金作为信号报告分子则被认为是芯片检测中的一个重要进展。
- 顾大勇鲁卫平周元国
- 关键词：基因芯片纳米金胶体金
- 基于红外光谱傅里叶变换的SPR分析技术被引量：5
- 2006年
- 本文介绍了一种新的表面等离子共振(SPR)检测方法,该方法基于红外光谱傅里叶变换技术(FTIR),不同于常规的SPR检测方式,其工作于较宽的红外光谱带上。本文给出了FTIR-SPR的仪器结构图,并详细叙述了FTIR最主要的部分即迈克耳逊干涉仪的工作原理。本文还给出了光学傅里叶变换的数学公式以及物理学解释。在此波段上的SPR具有一些新特性,例如SPR信号很窄,从而角度分辨率很高,以及更深的消逝波探针深度。这将有助于细胞生理、膜生长等相关的生物工程学、生物物理学研究,并且硅在该范围内具有可穿透性,因此有可能实现SPR传感器的微型化。
- 彭承琳杨景涛顾大勇史长宁
- 关键词：表面等离子共振红外光谱傅里叶变换
- 以纳米金为报告系统的病原体快速检测基因芯片的研制被引量：6
- 2007年
- 目的结合纳米放大芯片检测的专利技术,设计并制作适用于病原体快速检测的实用型基因芯片,以实现对临床常见感染病原体的快速、准确地检测和鉴定。方法分别针对各待检靶病原体特异性基因片段设计探针、构建芯片,并以纳米金为报告分子标志靶序列,通过杂交后与银的反应使得信号被放大,形成裸眼可见的褐色颗粒,从而实现芯片的检测。结果设计的探针具有很好的特异性、准确性和杂交条件的同一性;适当增加纳米金/核酸的比例能够减少标志时间,而轻微振荡明显加快标志反应的速度;在45℃杂交温度下,杂交反应盐离子浓度为0.8mol/L,杂交反应时间为8h,最后经过严格条件漂洗可以获得较佳的杂交效率,而轻微的旋转振荡则可以显著增加杂交的效率;37℃,3min×3的反应方式,可以获得较好的银染效果;本芯片系统具有较好的检测敏感性,可达到100fmol/L;与临床常规检测方法比,本芯片检测方法简单快捷,检测结果裸眼清晰可见,背景低。结论本芯片检测方法敏感性高,特异性好,操作方法简单,无需特殊设备,所设计的检测内容达到实用化水平,具有较好的临床应用前景。
- 顾大勇鲁卫平王华周元国
- 关键词：纳米金银基因芯片病原体
- 双重PCR反向杂交快速检测及鉴定耐甲氧西林金黄色葡萄球菌被引量：2
- 2004年
- 目的 研究以非培养法为基础的快速检测和鉴定耐甲氧西林金黄色葡萄球菌 (MRSA)的方法。方法 将金黄色葡萄球菌mecA基因特异性探针固定在尼龙膜上 ,双重聚合酶链反应 (PCR)同时扩增待检DNA片段 ,在扩增中用bio 11 dUTP标记扩增产物 ,然后与探针膜杂交。结果 5 0株金黄色葡萄球菌sa4 4 2特异性基因片段检测结果为 10 0 %阳性 ,mecA基因结果阳性占 72 %。结论 该方法灵敏度高、特异性强 ,适用于临床快速检测和鉴定MRSA。
- 鲁卫平安琳
- 关键词：耐甲氧西林金黄色葡萄球菌MRSAMECA基因反向杂交DNA片段
- 肽核酸探针技术及其在微生物检测中的应用被引量：2
- 2008年
- 肽核酸(Peptide Nucleic Acid,PNA)是近十几年发展起来的以中性酰胺键为骨架的脱氧核糖核酸(Deoxyribonucleic Acid,DNA)类似物,它能够与DNA和RNA特异性地结合从而可以制备PNA探针。与DNA探针相比,其杂交的稳定性和特异性增加且能在低盐浓度下进行杂交。因此它能够大大提高微生物学检测和医疗诊断的效率和灵敏度。PNA独特的生化属性已逐渐为世人所瞩目,PNA探针技术也得到了迅速发展,尤其是其在微生物检测领域中的应用。
- 赵欣李震顾大勇
- 关键词：核酸微生物学检测
- 纳米金基因芯片结合通用引物1次PCR法同时检测多个病原菌的研究被引量：7
- 2008年
- 目的基于基因分型技术构建通用引物1次PCR法的样品制备技术,并结合纳米金基因芯片检测系统实现1次对多个病原菌的检测分析。方法针对rDNA保守序列设计通用引物,实现1次PCR完成对各靶细菌ISR序列的扩增;设计针对各靶细菌的特异探针,构建纳米金新型基因芯片,并用芯片进行实际检测。结果设计的通用引物可实现对12种待检靶细菌的正确扩增;选用的各探针特异性强、可靠性好;芯片具有较好的灵敏度、特异性及可靠性;检测敏感性达到50 fmol/L;临床检测显示本方法准确可靠。结论与多重PCR样品制备法芯片比较,本芯片检测的步骤和复杂性大为减低,且有较好的检测性能,可用于各靶病原菌的检测。
- 顾大勇鲁卫平王华周元国
- 关键词：纳米金基因芯片病原菌16S-23S
