国家教育部博士点基金(20020558050)
- 作品数：16 被引量：100H指数：6
- 相关作者：汪建平王磊杨祖立黄美近宋新明更多>>
- 相关机构：中山大学附属第一医院中山大学附属第六医院中山大学附属第二医院更多>>
- 发文基金：国家教育部博士点基金广东省自然科学基金中山大学医科青年教师科研启动基金更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 脾酪氨酸激酶基因甲基化与结直肠癌临床病理特征之间的关系被引量：6
- 2008年
- 目的探讨脾酪氨酸激酶（Syk）基因甲基化、表达水平与结直肠癌患者临床病理特征及预后之间的关系。方法收集2001年1～12月间经手术治疗的120例结直肠癌标本．采用甲基化特异性聚合酶链反应（MSP）和逆转录-聚合酶链反应（RT—PCR）分析Syk基因的甲基化状态和表达情况，并分析Syk基因甲基化失表达与结直肠癌临床病理特衙和生存预后之间的关系。结果（1）120例结直肠癌患者中，48例肿瘤组织未检测到Syk基因的表达，而正常组织Syk基凶均表达；差异有统计学意义（X^2=60，P=0．000）。（2）发生甲基化的37例肿瘤组织中，Syk基因均失去表达。未发生甲基化的83例中，仅11例失表达；而癌旁匹配的正常组织均有表达。（3）Syk基因的甲基化状态与结直肠癌的淋巴结转移状态、病理分期密切相关，而与其他临床参数无关。（4）术后随访资料表明，Syk基因甲基化组患者的3年生存率明显低于未甲基化组（73．5％比95．7％，P=0．007）；而术后复发转移率明显高于未甲基化组（32．4％比8．4％，P=0．02）。结论Syk基因过甲基化失表达参与了结直肠癌的发生，导致结直肠癌侵袭性增强，患者术后复发转移率升高，3年生存率降低。
- 杨祖立王磊康亮彭俊生向军黄美近汪建平
- 关键词：结直肠肿瘤基因脾酪氨酸激酶甲基化
- 酪氨酸激酶Syk两种蛋白异构体在乳腺癌细胞内的分布被引量：4
- 2006年
- 目的观察长脾脏酪氨酸激酶[Syk(L)]和短脾脏酪氨酸激酶[Syk(S)]在乳腺癌细胞中的分布。方法采用胞核、胞质分离技术和Western blot的方法检测乳腺癌细胞系BT474和MB468中两种Syk蛋白异构体的细胞内分布。构建表达Syk(L)或Syk(S)的MB435稳定细胞克隆,采用细胞胞核、胞质分离方法和免疫组织化学的方法观察Syk(L)及Syk(S)在细胞内的分布。结果在乳腺癌细胞系BT474和MB468中,Syk(L)在细胞质、细胞核内均有表达,Syk(S)只表达在细胞质中。MB435-Syk(L)稳定细胞株中的Syk(L)在细胞质、细胞核内均有表达,MB435-Syk (S)稳定细胞株中的Syk(S)只分布在细胞质内。结论在乳腺癌细胞中,Syk(L)可由细胞质移位到细胞核内,而Syk(S)只存在于细胞质中。Syk(L)的抑癌功能可能与它的细胞核内功能有关。
- 王磊汪建平宋新明兰平
- 关键词：酪氨酸激酶乳腺癌核移位
- 结直肠癌患者血清Syk基因甲基化与术后复发转移和预后的关系
- 2008年
- 目的探讨血清Syk基因甲基化与结直肠癌术后复发转移和预后之间的关系。方法收集120例结直肠癌患者的组织和血清标本，采用甲基化特异性PCR（MSP）检测Syk基因的甲基化状态。结果120例结直肠癌患者中37例肿瘤组织发生Syk基因甲基化，其相应血清中32例可检测到同样的甲基化模式；而肿瘤组织未发生甲基化的83例患者的血清中均未检测到甲基化的Syk基因。血清Syk基因甲基化组的淋巴结转移率明显高于无甲基化组（68．8％比38．6％，x^2=8．55，P=0．003）；前者的术后转移复发率也明显高于后者（34．4％比9．1％，x^2=10．46，P=0．001）；血清Syk基因甲基化组的3年生存率明显低于无甲基化组（65．1％比90．6％，x^2=7．818，P=0．006）。结论血清Syk基因甲基化状态与肿瘤组织的甲基化状态密切相关，可以作为结直肠癌患者淋巴结转移、预测复发和判断预后的一个指标。
- 杨祖立康亮王磊汪建平彭俊生黄美近兰平黄奕华何裕隆
- 关键词：结直肠肿瘤甲基化预后
- 结直肠癌侵袭性与脾酪氨酸激酶基因Syk启动子甲基化的关系被引量：46
- 2005年
- 目的 探讨脾酪氨酸激酶 (Syk)基因启动子甲基化与结直肠癌侵袭转移之间的关系。方法 采用巢式双重甲基化特异性聚合酶链反应 (MSP)和逆转录 聚合酶链反应 (RT PCR)的方法检测Syk基因在 12 0例结直肠癌肿瘤组织、癌旁正常组织中的甲基化和表达情况。 结果 12 0例结直肠癌患者中 ,48例未检测到SykmRNA的表达 ,而癌旁正常组织均有表达。癌旁正常组织未检测到Syk基因启动子甲基化 ,3 7例肿瘤组织发生Syk基因启动子甲基化(3 0 .8% ) ,癌组织Syk基因启动子甲基化率显著增高 (P <0 .0 0 0 5 )。在淋巴结转移的 5 6例中 ,2 4例发生Syk基因启动子甲基化 ,而无淋巴结转移的 64例中 ,13例发生甲基化 ,有淋巴结转移的Syk基因启动子甲基化发生率显著高于无淋巴结转移组 (P =0 .0 0 8)。发生甲基化的肿瘤组织中 ,均无SykmRNA的表达。结论 结直肠癌中 ,SYK基因启动子过甲基化导致其mRNA的失表达 ,从而引起结直肠癌的侵袭性增强 ,它可能是结直肠癌发生侵袭转移的又一种机制。
- 杨祖立汪建平元云飞蔡世荣黄美近
- 关键词：结直肠癌甲基化癌旁正常组织癌侵袭酪氨酸激酶
- 应用GFP质粒构建及转染技术探讨Syk(L)核移位机制被引量：6
- 2006年
- 【目的】通过研究Syk(L)在乳腺癌细胞亚细胞器中的分布和移位机制,探讨Syk(L)抑制乳腺癌的可能性机制。【方法】采用细胞胞核、胞浆分离技术和Westernblot的方法,检测乳腺癌细胞系BT474中两种Syk蛋白异构体在细胞内的分布。构建绿色荧光蛋白(GFP)和Syk(L)核移位相关功能域融合蛋白质粒,转染入Cos7细胞内,荧光显微镜下观察融合蛋白在细胞内的分布。【结果】BT474细胞的细胞浆中可检测到Syk(S)和Syk(L)的表达,细胞核中只检测到Syk(L)的表达。在Cos7细胞中,GFP与Syk(L)的缺失域(deletiondomain,DEL域)融合蛋白均匀分布于细胞内,GFP与Syk(L)的IDB域融合蛋白聚集于细胞核中;将DEL域上的294K、300K、及305K突变域非碱性氨基酸后构建成GFP-IDB(L)-M,突变的融合蛋白则失去核聚集现象。【结论】在乳腺癌细胞中,Syk(L)可从细胞胞浆移位到细胞核内。Syk(L)的IDB域具有完整的核移位功能,能将融合的胞浆蛋白GFP转移到细胞核内;DEL域的碱性氨基酸具有核定位信号功能。Syk(L)在乳腺癌细胞中的抑癌功能与其核移位有关。
- 王磊胡英宋新明汪建平
- 关键词：绿色荧光蛋白核移位
- 结直肠癌淋巴结转移规律及其相关因素的分析被引量：20
- 2004年
- 目的 :探讨结直肠癌淋巴结转移规律及其影响的相关因素。方法 :91例完整切除的结直肠癌患者的手术标本 ,将逐一清除的淋巴结分别送检 ,同时采用免疫组化的方法检测 E- cad和 TIMP- 3在肿瘤组织中的表达情况 ,结合临床病理资料分析结直肠癌淋巴结转移与诸因素的关系。结果 :91例结直肠癌患者中 33例发生淋巴结转移 ,共清除淋巴结 974枚 ,其中 1 1 3枚发生转移。影响淋巴结转移的因素有 1年龄 :小于 4 0岁的结直肠癌患者的淋巴结转移高于其他两组 (P =0 .0 36 ) ;2肿瘤的侵袭程度 :随着侵袭程度的加深 ,淋巴结转移的机会越大 (P <0 .0 0 5 ) :3E- cad和 TIMP- 3在肿瘤组织中的表达与否淋巴结的转移呈副相关 ,且差异具有显著性 (P值均 <0 .0 5 )。结论 :结直肠癌淋巴结的转移与年龄、肿瘤侵袭的程度以及 E- cad和TIMP- 3在肿瘤组织中的表达情况有关 ,根据这些因素可以初步估计结直肠癌患者淋巴结转移情况 ,从而指导手术和术后辅助治疗 。
- 杨祖立汪建平黄美近彭慧周军
- 关键词：结直肠癌淋巴结转移肿瘤组织手术
- TIMP-3基因甲基化与结直肠癌临床病理的关系被引量：3
- 2005年
- 目的:探讨TIMP-3基因甲基化与结直肠癌临床病理指标和转移复发的关系。方法:采用巢式甲基化特异性PCR技术(NMSP法)检测100例结直肠癌组织和100例癌旁非癌组织TIMP-3基因甲基化;采用RT-PCR 检测100例结直肠癌组织和100例癌旁非癌组织TIMP-3 MRNA的表达。结果:肿瘤组织TIMP-3 MRNA的表达阳性率为64％,肿瘤组织TIMP-3 MRNA的表达率明显低于癌旁非癌组织(P<0．01);TIMP-3 MRNA的表达率无淋巴结转移组(34/42)高于淋巴结转移组(30/58)(P<0．01),甲基化阳性率DUKE’S C+D期伴淋巴结转移组明显高于 DUKE’S A+B期不伴淋巴结转移组(P<0．05)。结肠近端、分化程度差的结直肠癌组织甲基化阳性率明显高于远端直肠和分化程度高者(P<0．05)。结论:TIMP-3基因甲基化容易发生在结肠近端、DUKE’S C、D期、伴淋巴结转移、细胞分化差和浸润型结直肠癌患者。
- 黄美近汪建平褚忠华宋新明王磊杨祖立蔡世荣
- 关键词：结直肠肿瘤甲基化MRNA表达
- Syk(L)细胞核移位现象对乳腺癌细胞侵袭力的影响
- 2006年
- 目的探讨2种Syk蛋白异构体在乳腺癌细胞中的表达、细胞亚细胞器中分布和对乳腺癌细胞侵袭力影响。方法采用Western blot方法检测6种乳腺癌细胞系中Syk的表达;采用胞核、胞浆分离试验及质粒定点突变技术检测2种Syk蛋白异构体在细胞亚细胞器中的分布并探讨Syk (L)的核移位机制;采用体外侵袭力实验研究2种Syk蛋白异构体和DEL域碱性氨基酸突变成非碱性氨基酸的Syk(L)对肿瘤细胞侵袭力的影响。结果2种Syk蛋白异构体在4种乳腺癌细胞系中同时表达;Syk(L)在乳腺癌细胞中的表达可明显抑制细胞的侵袭力,Syk(S)对侵袭力无影响;在同时表达2种Syk蛋白的乳腺癌细胞系MB468及分别表达Syk(L)、Syk(S)的稳定细胞株MB435中,只有分子量较大的Syk(L)可从胞浆移位到胞核内。DEL域内的碱性氨基酸被突变为非碱性氨基酸后, Syk(L)失去核移位功能,亦不能抑制乳腺癌细胞的侵袭力。结论Syk(L)-DEL域内的碱性氨基酸具有核定位信号功能,Syk(L)的核移位现象与其抑制乳腺癌细胞侵袭力功能密切相关,Syk(L)的抑癌功能是由它移位到细胞核内行使的核蛋白相关功能决定的。
- 王磊胡英宋新明汪建平
- 关键词：乳腺肿瘤蛋白质酪氨酸激酶肿瘤侵润核移位
- 两种SYK蛋白异构体在乳腺癌中的表达及其对细胞侵袭力的影响被引量：2
- 2007年
- 目的:探讨2种SYK蛋白异构体在乳腺癌中的表达和各自对乳腺癌细胞侵袭力的影响。方法:采用Western blotting方法检测乳腺癌细胞MB435、ZR75.1、MB46、T47D和MCF7中SYK的表达;采用SYK(-)的乳腺癌细胞系MB435构建表达SYK(L)或者SYK(S)的稳定细胞株,采用体外细胞侵袭力试验检测SYK(L)和SYK(S)对细胞侵袭力的影响。结果:SYK(L)和SYK(S)在大部分乳腺癌细胞系中同时表达;采用Fugene6转染和G418筛选方法成功构建SYK(L)或SYK(S)稳定细胞株;SYK(L)在乳腺癌细胞中表达可以抑制细胞的侵袭力,SYK(S)对细胞的侵袭力没有影响。结论:2种SYK蛋白异构体在乳腺癌细胞系中普遍同时表达;只有SYK(L)可以抑制乳腺癌细胞的侵袭性。
- 王磊蔡世荣宋新明汪建平
- 关键词：蛋白质酪氨酸激酶乳腺肿瘤肿瘤侵润
- 结直肠癌细胞中脾酪氨酸激酶基因甲基化状态和表达的关系被引量：6
- 2008年
- 目的:探讨结直肠癌细胞中脾酪氨酸激酶基因甲基化和表达的关系。方法:应用亚硫酸盐修饰测序、甲基化特异性聚合酶链反应和蛋白印迹技术检测结直肠癌细胞脾酪氨酸激酶的甲基化状态以及表达情况;荧光素酶报告分析法研究启动子区域CpG岛的甲基化与启动子活性的关系;甲基化转移酶抑制剂处理脾酪氨酸激酶甲基化失表达的结直肠癌细胞株,观察处理前后细胞内脾酪氨酸激酶基因甲基化状态和表达情况。结果:(1)23个结直肠癌细胞中,9个细胞启动子发生甲基化而失去蛋白质表达;其余则正常表达,甲基化发生率为39.2%;(2)9个甲基化的细胞中,7个存在微卫星不稳定;而14个未发生甲基化的细胞中,仅有4个存在微卫星不稳定。二者之间的差异显著(P<0.05);(3)脾酪氨酸激酶启动子全长和未甲基化启动子荧光素酶的活性分别是甲基化组的4.5和4.7倍;5-Aza-CdR可恢复甲基化启动子的活性;(4)5-Aza-CdR可去甲基化而使脾酪氨酸激酶基因重新表达,而且具有时间依从性。结论:结直肠癌细胞中,启动子区域的甲基化导致Syk基因丧失表达,5-Aza-CdR可以去甲基化而恢复脾酪氨酸激酶基因的表达。
- 杨祖立康亮黄美近王磊彭俊生向军兰平汪建平
- 关键词：结直肠肿瘤甲基化脾酪氨酸激酶
