国家科技基础条件平台建设计划(2005DKA21103)
- 作品数：36 被引量：402H指数：12
- 相关作者：白俊杰叶星李胜杰简清劳海华更多>>
- 相关机构：中国水产科学研究院珠江水产研究所大连水产学院上海海洋大学更多>>
- 发文基金：国家科技基础条件平台建设计划国家科技支撑计划广东省自然科学基金更多>>
- 相关领域：农业科学生物学医药卫生更多>>
- 利用微卫星多重PCR技术鉴定剑尾鱼RR-B系被引量：1
- 2007年
- 目的建立多重PCR技术鉴定选育剑尾鱼RR-B系的方法。方法根据可明显鉴定剑尾鱼RR-B系的6对特异性微卫星引物Msa012、Msa014、Msa033、Msb025、Msd003、Msd051,采用不同的组合方式对RR-B系剑尾鱼和红眼红体的非选育剑尾鱼进行多重PCR扩增。结果引物组合1(Msa014、Msb025、Msd003)和组合2(Msa012、Msa033、Msd051)两个三重PCR反应体系能清楚的扩增各个微卫星座位,且各目的片段之间无干扰,易于识别,引物组合1的排除概率为99.98%,引物组合2的排除概率为99.96%,能准确鉴定剑尾鱼RR-B系。结论本检测方法具有较高的稳定性,可快速准确鉴定剑尾鱼RR-B系。
- 刘宇飞白俊杰叶星宋红梅
- 关键词：剑尾鱼近交系微卫星标记多重PCR
- 利用18个微卫星座位对剑尾鱼RR-B系遗传质量的分析
- 2009年
- [目的]为进一步了解剑尾鱼RR-B系的遗传质量,探讨微卫星标记技术在水生实验动物遗传监测中应用的可行性。[方法]选择18个在野生剑尾鱼群体中有多态性的微卫星座位,通过PCR扩增对剑尾鱼RR-B系(红眼红体)遗传质量进行分析。[结果]18个座位在RR-B系30尾个体中均为单态,且都是纯合子,基因纯合率达100%。[结论]18个微卫星座位可作为剑尾鱼RR-B系遗传监测的分子标记;剑尾鱼RR-B系经20多代的近交培育已具有很高的遗传均一性。该研究为水生实验动物分子监测标准的制定提供了基础数据。
- 刘宇飞白俊杰全迎春叶星黄志斌
- 关键词：剑尾鱼近交系微卫星
- 罗非鱼MC4R基因克隆及与其生长相关的SNPs位点被引量：27
- 2009年
- 黑素皮质素受体-4(Melanocortin receptor-4,MC4R)是5种已发现的黑素皮质素受体家族成员之一,属于跨膜G-蛋白耦联受体超级家族,对于调节动物的采食量、体质量及能量稳态有着重要的作用。本研究采用基因组步移技术获得了尼罗罗非鱼(Oreochromis niloticus)MC4R基因组DNA序列。该基因全长2547bp,其中5′侧翼序列长为1481bp,3′侧翼序列长为82bp,编码区序列长为984bp,只有1个外显子。采用PCR产物直接测序法、PCR-RFLP和CRS-PCR技术对尼罗罗非鱼MC4R基因启动子和外显子区域进行了SNPs位点的检测和分型,结果共检测到5个SNPs位点(-G1000C、-T974A、C276T、C561T和C708T),其中外显子上的3个SNPs位点均为同义突变。利用一般线性模型分析5个SNPs位点与尼罗罗非鱼生长性状的关系,结果表明,5个SNPs位点不同基因型之间体质量均值差异最大值分别为9.5%、23.2%、14.4%、18.6%和13.5%,没有达到显著水平(P>0.05)。将5个SNPs位点不同基因型组合成7种双倍型(去掉频率小于3%的组合),关联分析表明,在体质量和体长这2个主要生长性状方面,双倍型D4与D1、D3、D6存在显著性差异(P<0.05),双倍型D2与D3、D6也存在显著性差异(P<0.05)。因而可以考虑将MC4R基因作为影响罗非鱼体质量等生长性状的候选基因,应用于罗非鱼分子标记辅助育种。
- 刘福平白俊杰叶星李胜杰李小慧于凌云
- 关键词：尼罗罗非鱼MC4RSNPS
- 转基因与野生唐鱼耐温限度及窒息点的比较研究被引量：8
- 2010年
- 对转红色荧光蛋白基因唐鱼、野生型唐鱼Ⅰ和野生型唐鱼Ⅱ的耐温和耐氧能力进行比较研究。结果表明,在驯化温度为30℃,升温速率为1℃/h时,3种唐鱼的半致死高温分别为(38.53±0.08)℃、(38.28±0.29)℃和(38.55±0.09)℃。在驯化温度为25℃,降温速率为2℃/d时,3种唐鱼的半致死低温分别为(1.13±0.40)℃、(1.26±0.10)℃和(1.21±0.12)℃;恒温25℃时,测定3种唐鱼的窒息点分别为(0.66±0.02)mg/L、(0.74±0.21)mg/L和(0.51±0.01)mg/L。差异显著性检验表明,3种唐鱼对温度和溶氧的耐受力无显著性差异(P>0.05)。
- 姜鹏白俊杰樊佳佳
- 关键词：唐鱼转基因温度窒息点
- 大口黑鲈抗菌肽hepcidin cDNA序列和结构分析被引量：12
- 2008年
- 以大口黑鲈为材料,提取肝脏总RNA,经RT-PCR扩增出hepcidin cDNA的开放阅读框（ORF）及3′端非编码区序列,应用5′RACE方法得到大口黑鲈hepcidin cDNA5′末端。将所获得的两个片段分别克隆到T载体后进行测序,并拼接成大口黑鲈hepcidin全长cDNA。序列分析表明：大口黑鲈hepcidin全长cDNA为564bp,含有一个258bp的ORF,编码86个氨基酸残基,由信号肽（24个残基）、前肽（42个残基）和成熟肽（20个残基）3部分组成hepcidin前体。在前肽部分具有前肽转化酶典型的RX（K/R）R基元,成熟肽部分含有8个保守的半胱氨酸残基,可形成四个链内二硫桥,使β-折叠结构保持稳定。大口黑鲈Hepcidin与其他鱼类的同源性在29.7%-90.5%间,尤其是信号肽区域,与鳜、尼罗罗非鱼、真鲷、花鲈、黑鯛、金眼狼鲈仅有2-3个氨基酸的差别。
- 白俊杰刘碧莲劳海华叶星简清
- 关键词：大口黑鲈抗菌肽HEPCIDINCDNA克隆
- RNA干扰技术在鱼类中的研究进展被引量：8
- 2009年
- RNA干扰(RNA interference,RNAi)是真核生物体内利用双链RNA(double strand RNA,dsRNA)诱导同源靶基因的mRNA特异性降解,从而导致转录后基因沉默(posttranscriptional gene silencing,PTGS)的现象。RNAi主要通过核酸酶Dicer切割dsRNA生成21～23nt的小干扰RNA(small interference RNA,siRNA),继而由siRNA识别并靶向降解同源靶基因mRNA,从而抑制靶基因的蛋白表达。文章综述了RNA干扰技术的原理、siR-NA的制备及在鱼类中的研究进展。
- 韩林强李胜杰于凌云白俊杰
- 关键词：RNA干扰基因沉默鱼类
- 橙色莫桑比克罗非鱼微卫星遗传多样性分析及其与尼罗罗非鱼差异位点的筛选被引量：18
- 2008年
- 用33对在尼罗罗非鱼（Oreochromis niloticus）中能有效扩增的微卫星引物，对橙色莫桑比克罗非鱼（Oreochromis mossambicus）进行PCR扩增，结果有32对引物能获得稳定的特异性条带，占总数的97．0％，其中15个微卫星位点具多态性，表明大部分尼罗罗非鱼的微卫星位点存在于橙色莫桑比克罗非鱼中。用具多态性的15个微卫星位点，对橙色莫桑比克罗非鱼30尾个体进行扩增分析，结果共检测到44个等位基因，大小在113～232bp之间，平均多态信息含量（PIC）为0．4308，平均观测杂合度（鼠）为0．5489，平均期望杂合度（垃）为0．5248，个体间平均遗传距离为0.3132，表明所选橙色莫桑比克罗非鱼群体遗传多样性较丰富，种群结构比较合理。本研究还对尼罗罗非鱼和橙色莫桑比克罗非鱼间特异位点进行了分析，发现有7个位点（UNH899、UNH208、UNH853、UNH876、UNH222、UNH933、UNH773）可有效区分莫桑比克罗非鱼和尼罗罗非鱼，可作为罗非鱼种质鉴定的分子标记。[中国水产科学，2008，15（3）：400-406]
- 宋红梅白俊杰叶星刘宇飞
- 关键词：微卫星标记尼罗罗非鱼
- 大口黑鲈IGF-I基因内含子1、3和4序列多态性研究被引量：11
- 2009年
- 根据大口黑鲈IGF-I基因的cDNA序列设计引物,克隆IGF-I基因内含子核苷酸序列,采用PCR产物直接测序方法,在中国养殖群体和美国野生群体中筛选IGF-I基因内含子上的多态位点。应用RFLP、CRS-RFLP和SSCP技术建立多态位点的检测方法,同时比较分析其中4个多态位点在两个群体中基因频率分布。结果表明:(1)IGF-I基因内含子1、3和4序列长分别为1 317 bp、712 bp和1 941 bp;(2)在3个内含子上共发现7个多态位点,其中在内含子1的208和1070位为G-A突变;内含子3的第40个碱基为一个"A"的插入-缺失突变,第307位为C-T突变,683位是G-A突变;内含子4上的696碱基处有一个20 bp的插入-缺失突变,在1 563位为G-A突变,表明大口黑鲈IGF-I基因序列上存在较多的SNPs;(3)内含子1上SNPG1070A的A等位基因能为Hind III限制性内切酶识别,采用RFLP技术分型。根据内含子1上SNP G208A侧翼序列,设计错配引物,使错配碱基和A等位基因共同形成TaqI酶切位点,建立CRS-RFLP检测方法。内含子4上SNP G1563A采用SSCP检测方法,同时对内含子4上的插入-缺失突变进行PAGE电泳分型。试验结果显示,RFLP、CRS-RFLP和SSCP三种SNP检测方法简单易行,适于在水产动物SNP标记研究中推广应用;(4)在中国养殖群体中,只有内含子1上的SNP G1070A具有多态性,其它3个多态位点只在美国野生群体中存在多态,证实中国养殖群体的遗传多样性相对较低。
- 李小慧白俊杰叶星胡隐昌
- 关键词：大口黑鲈内含子多态性
- 加州鲈肌肉生长抑制素(MSTN)cDNA的克隆和序列分析被引量：17
- 2007年
- 肌肉生长抑制素是抑制肌肉生长和发育的生长调控因子。对运用RT—PCR和RACE技术从加州鲈成鱼肌肉总RNA中扩增得到的MSTNcDNA全序列进行了序列分析。结果表明，加州鲈MSTNcDNA全长为1626bp，其开放阅读框为1134bp，共编码377个氨基酸，前面的22个氨基酸为信号肽，中间有四个氨基酸（RARR）为蛋白水解加工位点；该基因总共有13个半胱氨酸残基，后面9个在蛋白水解加工位点之后的c端生物活性区，与其它脊椎动物比较，它们的位置完全一致，对该基因的结构和功能非常重要。与GenBank中已知的条纹狼鲈、金鲷、斑马鱼、虹鳟、斑点叉尾鲴、人、猪、鸡、鸽MSTN的ORF相比较，核苷酸序列同源性为63％-94．4％，氨基酸同源性为61．4％-96％，特别是在C端生物活性区氨基酸同源性为88．1％-100％，高度的保守性反映了该基因受到了高度的进化限制以及功能的重要性。加州鲈MSTN基因的克隆为研究该基因打靶和鱼类肌肉发育调控机理奠定了基础。
- 李胜杰白俊杰叶星劳海华简清
- 关键词：加州鲈MSTN克隆
- 大口黑鲈hepcidin真核表达载体构建及表达的初步研究被引量：1
- 2009年
- 将大口黑鲈(Micropterus salmoides)抗菌肽hepcidin cDNA定向插入真核表达载体pPICZαA,通过SacI酶切线性化重组表达质粒pPICZαA-hepcidin,电转化毕赤酵母P.pastoris GS115,PCR扩增筛选,甲醇诱导表达等进行了hepcidin真核表达工程菌株的构建及诱导表达。结果显示:hepcidin cDNA成功插入表达载体pPICZαA,并整合到酵母基因组中;经甲醇诱导,RT-PCR检测显示hepcidin cDNA在酵母细胞中成功转录。
- 李胜杰白俊杰刘碧莲叶星于凌云全迎春
- 关键词：HEPCIDIN毕赤酵母真核表达
