国家自然科学基金(30271276)
- 作品数：12 被引量：85H指数：5
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- siRNA电转化幽门螺杆菌抑制空泡毒素基因mRNA表达
- 2007年
- 目的:利用RNA干扰(RNAi)技术原理,优化小分子干扰RNA(siRNA)电转化幽门螺杆菌(Hp)的条件,并观察电转化后空泡毒素基因(VacA)的mRNA表达是否受到抑制。方法:合成5对特异siRNA为实验组:S1、S2、S3、S4、S5,1对非特异siRNA为对照组:S6。设定不同的电场强度及脉冲时间,探索电转化Hp的最佳条件,并观察转化效率和电转化后Hp存活率。在最佳电转化条件下将上述6对siRNA转化Hp,在不同时点通过RT-PCR方法检测VacA mRNA的抑制率。结果:电场强度和脉冲时间是影响电转化效率的2个关键因素,在25kV/cm电场强度下脉冲6ms时,电转化效率最高达91%,S2、S4组在转化后VacA mRNA抑制率分别为65%和77%。结论:适当的场强和脉冲时间的组合可使转化效率达到最大值。靶向siRNA可以抑制HpVacA的mRNA表达。
- 赵刚严燕国马晋平彭俊生董文广蔡世荣何裕隆詹文华
- 关键词：电转化螺杆菌VACA
- CagA对幽门螺杆菌诱导胃黏膜上皮细胞分泌IL-8水平的影响被引量：5
- 2006年
- 目的:利用小分子干扰RNA(siRNA)探讨CagA在幽门螺杆菌诱导胃黏膜上皮细胞分泌IL-8中的作用。方法:设计5条siRNA,采用电穿孔法转入CagA+幽门螺杆菌NCTC11637,与胃黏膜上皮细胞共培养后测定IL-8水平,并以RT-PCR、Western blotting法检测穿孔前、后不同时点细菌的CagA表达。采用CagA-株NCTC11639作对照。结果:CagA+NCTC11637诱导胃黏膜上皮细胞分泌IL-8水平明显高于CagA-NCTC11639[(1200·00±32·51)ng/Lvs(100·00±8·58)ng/L](P<0·01)。siRNAⅢ转化的幽门螺杆菌诱导胃黏膜上皮细胞分泌IL-8水平显著低于转化前[(400·00±17·35)ng/Lvs(1200·00±32·51)ng/L](P<0·05);siRNAⅢ转化的幽门螺杆菌CagA mRNA水平显著低于转化前,穿孔后6h mRNA水平最低为31·3%(0·270/0·861),抑制率为68·7%。Western blotting显示siRNAⅢ组CagA蛋白水平低于穿孔前(P<0·01);其余4条siRNA未见显著变化。结论:CagA在幽门螺杆菌诱导胃黏膜上皮细胞分泌IL-8中起重要作用,小分子干扰RNA可能通过抑制CagA基因表达而减少幽门螺杆菌诱导胃黏膜上皮细胞IL-8的分泌。
- 严燕国詹文华赵刚马晋平蔡世荣
- 关键词：胃粘膜白细胞介素8
- 胃癌淋巴结微转移与基质金属蛋白酶-2表达的关系被引量：17
- 2007年
- 目的检测基质金属蛋白酶（MMP）-2在胃癌组织中的表达及探讨其与淋巴结微转移的关系。方法对30例胃癌共850枚淋巴结采用CK-20mRNA RT-PCR扩增检测微转移，采用免疫组织化学染色检测该30例胃癌组织中MMP-2的表达情况。结果70％的胃癌组织MMP-2表达阳性；MMP-2表达与浸润深度、淋巴结转移和分化程度密切相关（P〈0．05），但与性别、年龄、肿瘤位置、直径、Lauren分型及淋巴管侵犯无明显相关（P〉0．05）；14例77枚淋巴结检出微转移；85.7％检测出淋巴结微转移的癌组织MMP-2表达阳性，高于未检测出淋巴结微转移的癌组织的56.3％。结论MMP-2表达与胃癌侵袭、转移和分化程度密切相关。MMP-2表达阳性可能参与淋巴结微转移的发生。
- 吴泽宇李靖华詹文华何裕隆彭俊生蔡世荣
- 关键词：胃癌淋巴结基质金属蛋白酶-2
- 胃癌淋巴结微转移与E-钙黏附素表达的关系被引量：13
- 2005年
- 目的 检测E 钙黏附素 (E cadherin)在胃癌组织中的表达及探讨其与淋巴结微转移的关系。方法 对 3 0例胃癌共 85 0枚淋巴结采用细胞角蛋白 2 0 (Cytokerarin 2 0 ,CK 2 0 )逆转录聚合酶链反应 (RT PCR)扩增检测微转移 ,采用免疫组织化学染色检测该 3 0例胃癌组织中E cadherin的表达情况。结果 46.7% (14 / 3 0 )的胃癌组织E Cadherin表达阴性 ;E Cadherin表达阴性与Lau ren分型、淋巴结转移密切相关 (P <0 .0 5 ) ,与分化程度及淋巴管侵犯明显相关 (P <0 .0 0 1) ,但与性别、年龄、肿瘤位置、直径及浸润深度无关 (P >0 .0 5 )。 14例检测出淋巴结微转移的癌组织中 10例(71.4% )E Cadherin表达阴性 ,而 16例未检测出淋巴结微转移的癌组织中仅有 4例 (2 5 % )E Cad herin表达阴性 ,P =0 .0 2 6。结论 E cadherin表达减弱或消失参与了胃癌淋巴结微转移的发生。
- 吴泽宇詹文华李靖华何裕隆汪建平蔡世荣
- 关键词：E-CADHERIN淋巴结微转移胃癌组织E-钙黏附素
- 胃癌组织中MMP-2和E—cadherin的表达及意义被引量：5
- 2007年
- 目的检测胃癌组织中基质金属蛋白酶-2（MMP-2）和E-钙黏附素（E-cadherin）的表达，探讨其与胃癌侵袭转移的关系。方法对我科2003年12月至2004年4月30例胃癌手术患者，采用免疫组化染色检测胃癌组织中MMP-2和E-cadherin的表达情况。结果70％（21／30）的胃癌组织中MMP-2表达阳性。MMP-2表达阳性与浸润深度（P=0．022）、淋巴结转移（P=0．030）和肿瘤分化程度（P=0．043）密切相关，但与性别、年龄、肿瘤位置和直径、Lauren分型及淋巴管侵袭无关（P〉0．05）。46．7％（14／30）的胃癌组织中E-cadherin表达阴性。E-cadherin表达阴性与Lauren分型（P=0．026）、肿瘤分化程度（P=0．011）、淋巴结转移（P=0．038）和淋巴管侵袭（P：0．001）密切相关。结论胃癌组织中MMP-2表达上调和E-cadherin表达下移可能参与肿瘤侵袭转移的发生。
- 吴泽宇李靖华詹文华何裕隆彭俊生蔡世荣
- 关键词：胃肿瘤基质金属蛋白酶-2E-钙黏附素
- Syndecan-1和乙酰肝素酶在胃癌淋巴结转移中的相互作用被引量：2
- 2005年
- 陈俊强詹文华何裕隆蔡世荣陆云飞
- 关键词：SYNDECAN-1乙酰肝素酶胃癌淋巴结转移
- SiRNA特异性抑制幽门螺杆菌CagA基因表达的实验研究被引量：3
- 2006年
- 目的探讨小分子干扰RNA(SiRNA)对幽门螺旋杆菌CagA基因表达的影响。方法设计5条不同序列的针对CagA基因的的小分子干扰RNA和一条非特异性的小分子干扰RNA,采用电穿孔法转入幽门螺杆菌,以半定量RT-PCR法检测穿孔前和穿孔后1h、6h、12h、24h、48h细菌CagAmRNA的表达并用Westernblot检测CagA蛋白表达。结果电穿孔后其中1条小分子干扰RNA-SiRNAⅢ作用的CagA-mRNA显著地呈一过性表达下降,6h达最低值,1h、6h、12h、24h表达水平分别为电穿孔前的36.7%、31.3%、43.5%、76.8%(P<0.05),抑制率为68.7%,Westernblot显示12h带最弱;而另1条小分子干扰RNA-SiRNAⅤ作用较弱,抑制率为23.1%。其余3条及非特异性的小分子干扰RNA未见变化。结论SiRNA可特异性抑制幽门螺杆菌CagA基因表达。
- 严燕国詹文华赵刚马晋平蔡世荣
- 关键词：幽门螺杆菌CAGA小分子干扰RNA
- RT-PCR法检测胃癌淋巴结微转移被引量：4
- 2004年
- 目的 应用逆转录聚合酶链反应 (RT PCR)方法检测胃癌淋巴结微转移 ,探讨淋巴结微转移与胃癌生物学行为的关系。方法 对中山大学附属第一医院 2 0 0 3年 12月至 2 0 0 4年 4月间行手术切除的 30例胃癌共85 0枚淋巴结采用CK 2 0mRNART PCR扩增检测微转移 ,分析微转移的临床病理特点。结果 14例 (46 7% )77枚 (12 5 % )淋巴结检出淋巴结微转移。弥漫型胃癌的微转移阳性率为 6 3 2 % (12 / 19) ,明显高于肠型胃癌的18 2 % (2 / 11,P <0 0 5 )。肿瘤浸润深度越深 ,微转移的检出率越高。结论 CK 2 0mRNART PCR法可以检测出常规病理学检查遗漏的淋巴结微转移 ,可显著提高淋巴结转移的检出率。淋巴结微转移与Lauren分型和浸润深度密切相关。
- 吴泽宇詹文华李靖华马怡晖何裕隆汪建平彭俊生蔡世荣
- 关键词：淋巴结微转移胃癌RT-PCR法CK-20临床病理特点
- CagA^+幽门螺杆菌菌株培养滤液对胃黏膜上皮细胞生长及DNA的影响被引量：1
- 2010年
- 目的研究CagA+Hp菌株培养滤液对胃黏膜上皮细胞(GES-1)生长的作用。方法分为CagA+组、CagA-组、布氏肉汤组(空白对照组),Hp菌株制备培养滤液处理GES-1细胞,连续培养1个月。MTT法观察GES-1细胞生长,单细胞微凝胶电泳检测GES-1细胞DNA的损伤,并采用电镜观察GES-1细胞的形态变化。结果 CagA+培养滤液可使GES-1细胞增生活跃,GES-1细胞出现彗星现象显著高于CagA-组(41.2%vs.12.5%)(P<0.05)。经CagA+组处理的GES-1细胞,细胞核增大、畸形、核染色质变粗、核仁肥大、核分裂。结论 CagA在Hp培养滤液促使GES-1细胞呈肿瘤细胞的形态学改变及生长特征中起重要作用。DNA损伤可能是CagA诱导GES-1生长特征改变的机制之一。
- 严燕国詹文华马晋平蔡世荣赵刚
- 关键词：胃肿瘤胃黏膜上皮细胞CAGA基因
- 胃癌淋巴结转移预测的Logistic回归分析被引量：8
- 2005年
- 目的探讨较准确地预测胃癌有无淋巴结转移的标志。方法应用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)方法检测43例胃癌组织中的乙酰肝素酶mRNA表达,应用链霉菌抗生物素蛋白-过氧化物酶连接法(SP法)检测胃癌组织中CD44v6、基质金属蛋白(MMP)-7、nm23和syndecan-1蛋白表达情况,并结合可能影响胃癌淋巴结转移的临床病理指标,寻找影响胃癌淋巴结转移的客观指标。结果43例胃癌患者中27例(62.8%)有淋巴结转移,淋巴结转移度是(36.3±30.8)%,中位数是19.0%。胃癌淋巴结转移潜在危险因素的单因素分析显示,肿瘤大小、有无浆膜浸润、乙酰肝素酶表达、CD44v6表达、nm23表达和syndecan-1表达是胃癌淋巴结转移的危险因素。二值多元Logistic回归分析显示,nm23、syndecan-1和有无浆膜浸润是预测胃癌淋巴结转移的独立预后因素,其优势比分别为0.168、0.126和22.546。结论有浆膜浸润的胃癌和nm23、syndecan-1蛋白阳性表达者发生淋巴结转移的可能性较大。
- 陈俊强詹文华何裕隆蔡世荣彭俊生陈正煊
- 关键词：淋巴转移多元LOGISTIC回归分析无淋巴结转移CD44V6表达NM23表达
