国家烟草专卖局科技攻关项目(110200101008)
- 作品数：3 被引量：15H指数：2
- 相关作者：郭兆奎杨谦姚泉洪更多>>
- 相关机构：哈尔滨工业大学上海市农业科学院更多>>
- 发文基金：国家烟草专卖局科技攻关项目更多>>
- 相关领域：生物学更多>>
- 酿酒酵母TRK1和TRK2钾吸收缺陷型菌株的构建被引量：1
- 2008年
- 为更好的进行钾素营养有关基因表达调控和功能性研究,我们采用同源重组法通过重叠引物扩增分别将URA3和HIS3基因替代酿酒酵母的TRK1和TRK2基因,并以酿酒酵母的尿嘧啶合成酶URA3基因和组氨酸合成酶HIS3为标记基因,在不含尿嘧啶和组氨酸的基本培养基筛选转化子获得了钾离子转运蛋白TRK1和TRK2基因缺失的酿酒酵母钾素营养缺陷型菌株,该菌株在低K+培养基中导入拟南芥K+转运体基因AtKuP1可恢复正常生长。
- 郭兆奎杨谦颜培强万秀清姚泉洪
- 关键词：酵母同源重组
- 转拟南芥AtNHX1基因促进烟草对钾吸收的研究被引量：12
- 2007年
- 提取拟南芥总RNA,反转录合成Na＋/H＋逆向转运蛋白基因AtNHX1,构建了植物高效表达载体,用叶盘法将其导入烟草,经筛选获得了抗卡那霉素和GUS染色阳性的转化子38株。应用荧光定量PCR方法对转化材料部分含AtNHX1基因的烟草内源钾通道基因、烟草K＋转运蛋白基因和烟草焦磷酸酶基因的转录水平进行了分析。结果表明：在转化烟草中可以检测到AtNHX1基因mRNA,与未转化材料相比,烟草钾离子转运蛋白基因NtHAK1的转录降低,H＋-ATPase基因NHA1转录增加,钾通道基因NKT转录无显著变化,T1代转化烟叶中K＋含量显著增加,Na^＋、Ca^2＋无显著变化,烟叶中总糖含量降低,证明了编码拟南芥AtNHX1基因与植物的K＋吸收有关。
- 郭兆奎杨谦姚泉洪万秀清颜培强
- 关键词：ATNHX1基因转基因烟草
- 拟南芥AVP2基因转化烟草中吸钾相关基因的转录分析被引量：4
- 2008年
- 【目的】了解无机焦磷酸酶对植物钾吸收和相关基因表达的作用。【方法】反转录克隆拟南芥无机焦磷酸酶基因(H+-PPase)AVP2,构建植物表达载体,采用根癌农杆菌介导法将其导入烟草品种K326,经分子鉴定,提取转化烟苗幼根RNA,反转录后,应用荧光定量PCR分析外源基因AVP2和烟草钾通道基因NKT1、钾离子转运体基因NtHAK1、细胞质膜H+-ATPase基因NHA1、液泡膜H+-ATPase基因VAG1和液泡膜H+-PPase基因NVP1的mRNA转录水平,并测定转化烟草叶片的内在化学成分。【结果】获得了GUS染色和AVP2序列PCR扩增呈阳性的卡那霉素抗性转化烟草11株。经Southern杂交鉴定,证实AVP2基因已成功导入烟草,在转化烟草幼根中可以检测到外源基因AVP2的mRNA,证实该基因已整合到烟草基因组并成功表达;与未转化烟草相比,烟草钾离子转运体基因NtHAK1的转录水平显著增加,钾通道基因NKT1的转录稍有增加,而烟草液泡膜H+-ATPase基因VAG1和液泡膜H+-PPase基因NVP1的转录有所降低,烟草细胞质膜H+-ATPase基因NHA1无显著变化;转化烟草材料烟叶K+含量较对照显著增加,而烟碱、还原糖等其他内在化学成分无显著变化。【结论】无机焦磷酸酶基因参与植物的K+吸收。
- 郭兆奎杨谦颜培强万秀清
- 关键词：转基因烟草转录
