广东省自然科学基金(03004770)
- 作品数：6 被引量：31H指数：3
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- 相关机构：南方医科大学南方医院北京肿瘤医院中国科学院更多>>
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- 相关领域：医药卫生更多>>
- 肿瘤坏死因子α基因多态性与炎症性肠病相关性的研究
- 2009年
- 背景多项研究证明TNFα基因启动子序列的G-308A多态位点与西方白种人炎症性肠病(IBD)明显相关。目的初步探讨TNFα基因G-308A位点的遗传多态性和中国部分汉族人IBD发病易感性之间的关系。方法采用聚合酶链反应-限制性片段长度多态性分析(PCR-RFLP)检测50例健康对照者、45例克罗恩病患者和45例溃疡性结肠炎患者该位点的基因多态性。结果TNFα基因G-308A位点在三组研究对象中均未发现突变型基因型。结论TNFα基因G-308A位点的基因多态性可能与中国汉族人炎症性肠病无相关性。
- 杨小明智发朝赵芯梅吕超兰王焕景姜泊
- 关键词：肿瘤坏死因子炎症性肠病多态性基因
- 克罗恩病相关的NOD2及β-防御素-2基因多态性对β-防御素-2表达的影响
- 2009年
- 目的探讨克罗恩病（Crohndisease，CD）相关的NOD2及人β-防御素-2（humanbeta—defensin2，hBD-2）基因多态性对hBD-2转录活性的影响及主要机理。方法将hBD-2报告基因质粒和NOD2真核表达载体共转染至HEK293T细胞，用脂多糖（LPS）和TNF—α分别孵育刺激后测定hBD-2转录活性变化。结果LPS对hBD-2转录活性有抑制作用（P=0．020），TNF—α可相对升高hBD-2转录活性，呈剂量依赖性（P=0．004）；LPS作用时，NOD2（P268S）改变前后hBD-2的转录活性差异有统计学意义（P=0．008）；hBD-2（-233）改变前后hBD-2的转录活性差异无统计学意义（P=0．053）。在TNF-α（5ng／m1）刺激时，NOD2（P268S）改变前后hBD-2的转录活性差异无统计学意义（P=0．064）；hBD-2（-233）改变前后hBD-2的转录活性差异有统计学意义（P=0．006）；NF—κB抑制剂可显著下调hBD-2转录的激活（P〈0．001）。结论NOD2（P268S）改变能够降低hBD-2的内源性表达；hBD-2（-233）改变导致hBD-2诱生性表达的减少；NF—κB通路可能是hBD-2诱导表达的主要路径。
- 姚国鹏智发朝张迎春陈正彦智佳林勇关婧王继德姜泊
- 关键词：Β-防御素-2CROHN病基因多态性免疫
- NOD2/CARD15基因突变与中国人克罗恩病相关性的研究被引量：26
- 2007年
- 背景:近年多项研究证明NOD2/CARD15基因序列的单核苷酸多态性(SNP)与西方白种人克罗恩病(CD)明显相关,其中3个SNP(R702W、G908R和3020insC)与CD的相关性尤为显著。目的:探讨NOD2/CARD15基因SNP与中国人CD发病的相关性及其与CD临床特点的关系。方法:选取临床资料完整的CD患者48例、溃疡性结肠炎(UC)患者和健康对照者各50例,提取人血白细胞基因组DNA,经聚合酶链反应(PCR)扩增NOD2基因全部12对外显子,纯化后直接测序,根据结果分析其突变与CD病变特点的关系。结果:CD组、UC组和健康对照组均未检出3个西方人常见的NOD2/CARD15基因多态性位点。CD组的P268S突变率显著高于UC组和健康对照组(P<0.05)。5例P268S突变的CD患者病变均位于回肠(P<0.01),4例发病年龄≤20岁(P<0.01),且均并发肠腔狭窄(P<0.01)。结论:中国人CD患者中存在NOD2/CARD15基因P268S突变,且与患者的发病年龄、病变部位和并发症相关,有必要对其功能作进一步探讨。
- 龙靖华智发朝张迎春张以洋钟长青姚国鹏陈正彦林勇智佳关婧
- 关键词：多态性单核苷酸CROHN病基因NOD2/CARD15
- P268S突变型NOD2/CARD15真核表达载体的构建及其体外表达被引量：8
- 2007年
- 背景:NOD2/CARD15基因序列单核苷酸多态性(SNP)与欧美人群的克罗恩病(CD)明显相关,其中R702W、G908R和3020insC3个SNP位点与CD的相关性尤为显著。而日本、韩国以及我国香港和浙江地区的研究均未发现上述3个SNP的改变,但最近研究发现了可能与中国人CD相关的P268S突变。目的:构建P268S突变型NOD2/CARD15真核表达载体和体外转染体系,为研究突变型NOD2/CARD15的功能提供实验基础。方法:应用定点诱变技术构建P268S突变型NOD2/CARD15真核表达载体,以阳离子脂质体介导体外转染技术瞬时转染人胚肾细胞HEK293T,以蛋白质印迹法和逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测HEK293T细胞NOD2/CARD15的表达。结果:经克隆、酶切、测序证实获得P268S突变型NOD2/CARD15基因,突变载体转入HEK293T细胞后,NOD2/CARD15有效表达。结论:成功构建了P268S突变型NOD2/CARD15真核表达载体,阳离子脂质体是人胚肾细胞有效的体外转染体系。
- 钟长青智发朝王继德龙靖华张迎春
- 关键词：NOD2/CARD15诱变转染
- β-防御素-2荧光素酶报告基因载体及克罗恩突变体的构建被引量：1
- 2009年
- 目的:构建人β-防御素-2(hBD-2)荧光素酶报告基因质粒及其克罗恩病(Crohns,CD)相关突变体,并检测其在人胚胎肾T细胞(HEK-293T)中的活化.方法:通过基因重组构建包含hBD-2启动子序列的报告基因质粒hBD-2-780-luc,再通过定点突变技术在启动子区(-233位点)引入变异点(G变为C),构建突变体hBD-2-mut-luc;经酶切及测序验证后,将报告基因质粒和野生型NOD2/CARD15蛋白真核表达载体共转染到HEK-293T中,TNF-α刺激后测定双荧光素酶的表达.结果:酶切和测序证实,构建了重组体hBD-2-780-luc及其突变体hBD-2-mut-luc,两者均能表达荧光素酶活性,且明显高于空载体.结论:hBD-2报告基因质粒hBD-2-780-luc及其CD相关突变体hBD-2-mut-luc构建成功,并在细胞内活化表达荧光素酶.
- 姚国鹏智发朝张迎春陈正彦智佳林勇关婧王继德姜泊
- 关键词：Β-防御素-2克罗恩病定点突变
- 结肠黏膜vimentin降解在溃疡性结肠炎发病机制中的作用被引量：4
- 2009年
- 背景溃疡性结肠炎发病率呈逐年上升趋势,但发病机制不明,众多基于基因水平的研究不能完全阐明蛋白质水平的变化,差异蛋白质组学是从蛋白质水平研究溃疡性结肠炎发病机制的新方法。目的运用蛋白组学方法探讨溃疡性结肠炎的发病机制。方法选取12例活动期溃疡性结肠炎患者及12例正常肠黏膜为研究对象,提取组织蛋白做2-D电泳,银染,胶图分析找差异点,质谱鉴定蛋白质,最后Western-blot验证差异点。结果差异蛋白组学共鉴定出蛋白质30个(上调16个,下调14个),成功选取其中的vimentin,并得到Western-blot方法的验证。结论溃疡性结肠炎患者肠黏膜存在vimentin降解片段蛋白水平的高表达,这种改变可能在在溃疡性结肠炎的发病机制中起重要作用。
- 赵芯梅智发朝杨小明吕超蓝王焕景康滨吕有勇刘斯奇姜泊
- 关键词：溃疡性结肠炎VIMENTIN降解
