浙江省自然科学基金(RC01054)
- 作品数：5 被引量：8H指数：2
- 相关作者：经络陈勇王怡婷杨连华洪艳更多>>
- 相关机构：浙江省医学科学院浙江大学更多>>
- 发文基金：浙江省自然科学基金浙江省科技厅项目浙江省科技厅国际合作项目更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 戊型肝炎病毒嵌合蛋白的免疫应答的初步研究被引量：4
- 2005年
- 目的:对含有HEV主要抗原表位的嵌合蛋白进行表达与纯化,并对其免疫原性进行研究.方法:将含有一段HEV ORF2基因片段(394～660 aa)和HEVORF3全基因的表达质粒pHEV23在大肠杆菌中进行异丙基硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达,其表达产物经Ni2+-NTA树脂亲和纯化,透析复性.纯化蛋白免疫小鼠,用ELISA检测小鼠血清IgG抗体,T细胞增殖反应检测细胞免疫应答.以Western-blot检测纯化蛋白对患者阳性血清的免疫反应性.结果:纯化蛋白的分子量为 55 KDa,纯度达 90% 以上;实验组特异性抗体水平明显高于对照组;T细胞增殖反应实验组与对照组比较有极显著性差异.纯化蛋白能与患者阳性血清呈特异反应. 结论:嵌合蛋白具有良好的免疫原性和免疫反应性,为进一步研究开发HEV诊断试剂盒及基因工程疫苗提供了基础.
- 洪艳陈勇杨连华王怡婷经络胡华军
- 关键词：戊型肝炎病毒嵌合重组蛋白
- 戊型肝炎病毒嵌合基因疫苗的初步研究
- 目的构建含戊型肝炎病毒(HEV)开放读码框架(ORF2)和ORF3嵌合基因的重组质粒,并探讨其作为 DNA疫苗的可能性。方法利用PCR方法获得约0．8kb的戊型肝炎ORF2片段和ORF3的完整片段,同时将2段片段克隆到同...
- 洪艳阮冰杨连华经络王怡婷陈勇
- 关键词：戊型肝炎DNA疫苗体液和细胞免疫
- 文献传递
- 戊型肝炎病毒嵌合重组蛋白的表达及免疫原性研究被引量：2
- 2005年
- 洪艳陈勇杨连华王怡婷经络胡华军
- 关键词：戊型肝炎病毒免疫原性研究人群感染率嵌合蛋白ORF2流行区
- 戊型肝炎病毒嵌合基因疫苗的初步研究被引量：2
- 2004年
- 目的 构建含戊型肝炎病毒 (HEV)开放读码框架 (ORF2 )和ORF3嵌合基因的重组质粒 ,并探讨其作为DNA疫苗的可能性。方法 利用PCR方法获得约 0 8kb的戊型肝炎ORF2片段和ORF3的完整片段 ,同时将 2段片段克隆到同一真核表达载体 pcDNA3中 ,构建出含有ORF2和ORF3嵌合基因的质粒 pcHEV2 3;该重组质粒作为DNA疫苗免疫BALB/c小鼠 ,观察其在小鼠体内诱发的体液免疫应答和细胞免疫应答。结果 质粒DpcHEV2 3免疫组小鼠特异性抗体水平明显高于对照组。T细胞增殖反应显著强于空质粒对照组 (P <0 0 5 ) ,与生理盐水对照组比较有显著性差异 (P <0 0 1)。结论 重组质粒 pcHEV2 3可诱发小鼠产生特异性体液和细胞免疫应答 ,可为戊型肝炎DNA疫苗的研制提供依据。
- 洪艳阮冰杨连华经络王怡婷陈勇
- 关键词：戊型肝炎DNA疫苗体液和细胞免疫
- 戊型肝炎病毒ORF_3蛋白功能的研究进展
- 2006年
- 戊型肝炎是一种由戊型肝炎病毒(HEV)引起的经肠道传播的病毒性肝炎。对HEV结构蛋白的深入研究有利于病毒感染机制的明确和疾病的预防。ORF3蛋白作为HEV结构蛋白之一,其具体功能目前仍不太清楚。一直以来,针对该蛋白的研究非常少,近年来研究发现HEV ORF3蛋白在细胞信号转导、病毒感染和免疫抑制等方面都有非常重要的作用。
- 经络陈勇
- 关键词：戊型肝炎病毒
- 戊型肝炎病毒结构蛋白基因的真核表达
- 2006年
- 目的使用酵母表达系统表达戊型肝炎病毒结构蛋白基因。方法构建含戊型肝炎病毒(HEV)结构蛋白嵌合基因HEVORF23(由HEVORF2C端800bp片段与ORF3全基因组成)的重组表达质粒pPICZαA_HEVORF23,并通过电转移的方法将该基因整合入甲醇营养型酵母的基因组DNA中,利用甲醇进行诱导表达,表达产物经纯化后,进行Western印迹鉴定。结果pH6.0环境下诱导培养72h后,在细胞沉淀中获得一个分子量大约为69kDa的可溶性目的蛋白,纯化蛋白经Western印迹检测后发现能与戊型肝炎患者血清发生较强的特异性免疫反应。结论采用酵母表达系统诱导表达可以获得抗原性较强的HEV重组表达抗原,为进一步开发研制有效的诊断抗原和疫苗奠定了基础。
- 经络洪艳杨连华王怡婷陈勇
- 关键词：戊型肝炎病毒嵌合基因酵母表达系统
