国家自然科学基金(30600652)
- 作品数：5 被引量：8H指数：2
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- SDF-1对创缘表皮干细胞定向趋化及促创面愈合效应的研究
- 2010年
- 目的:观察干细胞趋化因子SDF-1在创面愈合过程中调控表皮干细胞定向迁移促进创面愈合的过程。方法:制作大鼠背部全层皮肤缺损模型,随机分为三个实验组:①SDF-1组;②AMD3100(CXCR4受体的拮抗剂)组;③空白对照组。分别于致伤后1天、3天、5天、7天和12天照相计算伤后不同时间创面占初始创面的百分比并取材。运用HE染色和免疫组化技术观察创缘表皮干细胞定向迁移分化的特点,寻找其规律。结果:与其他两个处理组相比,SDF-1处理组愈合时间缩短,其创缘皮表皮基底层细胞分裂增殖旺盛,创缘表皮干细胞数目明显多于其他两组。结论:在创面愈合过程中,SDF-1可以调控表皮干细胞向创缘迁移,加速创面上皮化。
- 张谊宫昔愿孙学武邱晓东郭丹凤张冠军韩继芹曹川
- 关键词：基质细胞衍生因子-1表皮干细胞创面愈合
- Rac1蛋白调控表皮干细胞迁移促进创面愈合的研究被引量：1
- 2011年
- 目的观察Rac1蛋白对表皮干细胞（ESC）迁移运动的调控作用，为完善创面愈合的基础理论以及指导临床应用提供参考。方法将慢病毒空载体FUGW单独和分别与Rac1蛋白抑制型突变体Rac1T17N、Rac1蛋白活化型突变体Rac1Q61L融合后转染入ESC，按照随机数字表法分为3部分进行如下实验。（1）将ESC分别接种于Ⅰ型胶原溶液（20μg／mL）、Ⅳ胶原溶液（20μg／mL）或纤连蛋白溶液（10μg／mL）包被的24孔细胞培养板，采用CytoTox 96比色试剂盒检测ESC对不同基质的黏附率。（2）选取上述黏附于Ⅳ型胶原的1000个ESC，四甲基异硫氰酸罗丹明标记的鬼笔环肽染色，激光扫描共聚焦显微镜下观察黏附细胞的形态延展并比较面积大小。（3）选用Transwell小室，上室加入ESC、下室中加入含基质细胞衍生因子1（SDF-1）的限定性角质形成细胞无血清培养液（以不加SDF—1的培养液为对照），倒置相差显微镜下观察ESC的趋化能力，结果以细胞迁移变化率表示。（4）将ESC接种于6孔细胞培养板孵育12h，加入含4μg／mL丝裂霉素c的培养液继续孵育2h，于单层贴壁细胞划痕，6、12h后统计剩余划痕宽度百分率。对数据进行t检验。结果与转染FUGW的ESC比较，转染Rac1Q61L的ESC对Ⅰ型胶原的黏附率明显增加（t=5．302，P〈0．05），转染Rac1T17N的ESC对Ⅰ型胶原（t=13．741，P〈0．05）、Ⅳ型胶原（t=15．676，P〈0．05）及纤连蛋白（t=8．256，P〈0．05）的黏附率均明显下降。激光扫描共聚焦显微镜下观察，与转染FUGW的ESC比较，转染Rac1Q61L的ESC面积明显增大，细胞边缘有层板状伪足伸出；转染Rac1T17N的ESC面积显著缩小。在趋化因子SDF-1作用下，与转染FUGW的ESC比较，转染Rac1Q61L的ESC迁移变化率升高43．4％，转染Rac1T17N的ESC迁移变化率下降78．0％；无SDF—1作用时，与转染FUGW的ESC比较，转染Rac1T17N的ESC迁移变化�
- 柴琳琳曹川赵树文李世荣毕胜甘露
- 关键词：干细胞慢病毒属创面愈合
- 以表皮干细胞与HaCaT细胞为种子细胞构建组织工程皮肤的比较研究被引量：4
- 2009年
- 目的比较人表皮干细胞(epidermal stem cells,ESCs)与人永生化角质细胞HaCaT作为种子细胞构建组织工程皮肤的差异。方法Ⅳ型胶原快速黏附法分选表皮干细胞,无血清培养基DK-SFM培养,取第2代备用;应用DK-SFM培养HaCaT细胞,取对数生长期的细胞备用;利用组织工程技术构建真皮等价物(dermalequivalent);将上述备用的两种种子细胞分别接种在真皮替代物的表面,构建组织工程皮肤,先后进行浸没培养和气-液面器官型培养,从形态学、物理特性、HE染色等方面观察比较培养物的差异。结果以ESCs构建的组织工程皮肤收缩快,分层分化近似于正常皮肤,具有较好的张力和韧性。以HaCaT细胞构建的组织工程皮肤分层少,生长慢,张力韧性较差。两种皮肤的直径都随培养时间的增加而缩短,且在3～7d各检测时相点间有显著性差异(P<0.05)。结论ESCs比永生化的HaCaT细胞更适合作为种子细胞构建组织工程皮肤。
- 甘露曹川李世荣李建福毋巨龙
- 关键词：表皮干细胞HACAT细胞组织工程皮肤
- SDF-1通过活化PKC-ζ趋化人表皮干细胞定向迁移的实验研究被引量：1
- 2011年
- 目的探讨信号蛋白PKC-ζ在间质细胞衍生因子1(stromal-derived factor 1,SDF-1)趋化人表皮干细胞定向迁移中的作用及机制。方法Ⅳ型胶原快速分选,无血清培养基(DK-SFM)培养表皮干细胞,免疫组化染色观察表皮干细胞β1整合素(β1 integrin)和角蛋白19(K19)的表达;Transwell实验观察SDF-1对钙和DAG依赖性和非依赖性PKC亚型抑制剂(chelerythrine chloride)、钙和DAG依赖性PKC亚型抑制剂(staurosporine)和PKC-ζ特异性抑制剂(PS-ζ)处理后人表皮干细胞的趋化作用;Western blot法检测SDF-1诱导后不同时段的人表皮干细胞PKC-ζ的磷酸化水平变化;采用Phal-loidin-Rhodamine显示细胞骨架,激光共聚焦显微镜观察PS-ζ对人表皮干细胞极化的影响。结果体外分离培养出人表皮干细胞,免疫组化染色显示,细胞质中β1整合素及K19均呈阳性表达。Transwell实验表明chelerythrine chloride和PS-ζ能够抑制SDF-1趋化的表皮干细胞运动,与阳性对照组比较差异有显著性(P<0.05)。SDF-1作用表皮干细胞能够引起PKC-ζ的磷酸化水平变化,随时间增加逐渐增强;激光共聚焦扫描显示SDF-1处理过的表皮干细胞骨架明显变化,经PS-ζ预处理后细胞骨架变化不明显。结论 SDF-1通过诱导信号蛋白PKC-ζ的磷酸化,影响细胞肌动蛋白的极化,趋化人表皮干细胞的定向迁移。
- 郭锐曹川王珍祥李喆甘露柴琳琳李世荣
- 关键词：人表皮干细胞
- 皮肤损伤后SDF-1分泌量的变化及其受体CXCR4在表皮组织中分布表达的实验研究被引量：2
- 2008年
- 目的:研究皮肤受损后不同时间点伤口液和皮肤组织中基质细胞衍生因子-1(SDF-1)的含量变化,同时验证SDF-1受体CX- CR4在表皮组织内的分布。方法:分别在伤后即刻、12小时、24小时、36小时、48小时、60小时、72小时、96小时留取Ⅱ°烧伤患者的大疱液,用ELLSA法检测伤口液中SDF-1的含量;用免疫组织化学染色的方法检测伤后1天、3天、7天创缘表皮内SDF-1的表达水平和其受体CXCR4在表皮组织上的分布。结果:用ELLSA法检测发现在受伤后几小时内大疱液中SDF-1的含量开始升高,1天后达到最高水平,伤后的3天SDF-1分泌量逐渐下降,而免疫组织化学染色结果显示创缘表皮层和真皮层上有散在的SDF-1分泌,且分泌量随创面愈合时间的推移逐渐增多;表皮细胞表达有CXCR4,且越靠近表皮基底层细胞膜的阳性越强。结论:SDF-1在皮肤损伤后表达量的增多可能对皮肤组织创伤修复起一定的调节作用。
- 张谊曹川李世荣毋巨龙王珍祥杨东运刘剑毅
- 关键词：基质细胞衍生因子-1皮肤损伤
