国家自然科学基金(30971709)
- 作品数：5 被引量：33H指数：3
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- 采用酵母双杂交技术研究OsRUS1与OsRUS2.1之间的相互作用
- 2012年
- 为了研究OsRUS1(ROOTUV-B SENSITIVE1)与OsRUS2.1(ROOTUV-B SENSITIVE2.1)之间是否具有相互作用以及通过何种结构域相互作用,采用酵母双杂交技术开展了如下工作。根据对OsRUS1与OsRUS2.1的DUF647结构域分布的分析,分别采用分子克隆技术将OsRUS1的4个不同片段[OsRUS1(1～1782)、OsRUS1(1～504)、OsRUS1(510～1282)和Os-RUS1(1188～1782)]克隆到诱饵载体pGBKT7上,并将OsRUS2.1的4个不同片段[OsRUS2.1(1～1317)、OsRUS2.1(1～138)、OsRUS2.1(139～879)和OsRUS2.1(880～1317)]克隆到猎物载体pGADT7上,酶切和测序结果表明诱饵和猎物载体构建成功,读码框正确。将所构建的4个OsRUS1诱饵载体和4个OsRUS2.1猎物载体质粒依次转化酵母AH109,研究转化AH109菌落在营养缺陷型培养液SD-Trp-DO或SD-Leu-DO上的生长情况,以及对报告基因ADE、HIS、MEL1和LacZ的激活情况,表明它们均没有对酵母菌株AH109产生毒性和自激活活性。再将4个OsRUS1诱饵载体和4个OsRUS2.1猎物载体的16种组合分别共转化酵母AH109,共转化菌株能在二缺营养缺陷板SD-Trp-Leu-DO上生长良好,但不能在四缺营养缺陷板SD-Trp-Leu-Ade-His-DO上生长,也不能激活MEL1和LacZ报告基因。这些结果表明OsRUS1与OsRUS2.1之间没有直接的相互作用。
- 潘家强侯学文
- 关键词：酵母双杂交相互作用自激活
- OsRUS1酵母双杂交诱饵载体的构建及其自激活作用检测被引量：3
- 2012年
- 采用PCR技术扩增水稻(Oryza sativa L)根UV-B敏感基因1(ROOT UV-B SENSITIVE 1,RUS1)四个不同片段[OsRUS1(1-1782)、OsRUS1(1-504)、OsRUS1(510-1282)、OsRUS1(1188-1782)],连接到T载体pMD18-T-Simple上,测序无误后分别亚克隆到诱饵载体pGBKT7上,酶切和测序结果表明构建的4个OsRUS1基因片段的诱饵载体构建成功,读码框正确;转化重组载体于酵母感受态细胞Y187中,用LacZ、MEL1活性检测法和营养缺陷型培养基SD-Trp-DO培养法进行自激活检测和毒性检测,结果表明诱饵载体对酵母菌株Y187没有转录激活活性和毒害作用。说明构建的4个OsRUS1基因片段的诱饵载体可以用于酵母双杂交系统中,为下一步从水稻cDNA文库中筛选互作蛋白奠定了基础。
- 潘家强侯学文
- 关键词：诱饵载体酵母双杂交自激活毒性检测
- OsRUS2.1酵母双杂交猎物载体的构建及其细胞毒性和自激活作用检测被引量：1
- 2013年
- 采用PCR技术扩增水稻根UV-B敏感基因2.1(ROOT UV-B SENSITIVE 2.1,RUS2.1)四个不同片段[OsRUS2.1(1-1317),OsRUS2.1(1-138),OsRUS2.1(139-879),OsRUS2.1(880-1317)],连接到T载体pMD18-T-Simple上,测序无误后分别亚克隆到猎物表达载体pGADT7上。结果表明:四个OsRUS2.1基因片段的表达载体构建成功,读码框正确;分别转化这四个猎物表达载体于酵母感受态细胞Y187中,用LacZ、MEL1活性检测法和营养缺陷型培养基SD-Leu-DO培养法进行自激活检测和毒性检测,结果表明构建的四个OsRUS2.1不同片段的猎物表达载体对酵母菌株Y187均没有转录激活活性和毒害作用,可用于后续研究。
- 潘家强侯学文
- 关键词：酵母双杂交自激活毒性检测
- CRISPR/Cas9基因组编辑技术在植物基因功能研究及植物改良中的应用被引量：22
- 2015年
- CRISPR/Cas是发现于细菌和古细菌基因组中的特殊结构,参与细菌和古细菌破坏噬菌体和外源质粒的免疫保护。科学家将II型CRISPR/Cas改造成为一个组装简便、高效和精准的基因组编辑工具,并迅速在动物、植物和微生物基因功能研究和遗传改造中获得广泛应用。本文介绍CRISPR/Cas9技术出现近两年来,在水稻、小麦、高粱、拟南芥、烟草、甜橙等植物中的研究情况,在此基础上对该技术的优点和需要进一步改进的地方提出了看法。
- 曾秀英侯学文
- 关键词：植物改良
- 植物UV-B生理效应的分子机制研究进展被引量：8
- 2011年
- 中波紫外线UV-B（280～320nm）是植物必需的太阳光线的组成部分，具有明显的双重效应：一方面UV-B在强度较高时，就触发产生大量活性氧对DNA、蛋白质以及生物膜等造成伤害，同时植物通过抗氧化系统对其作出防御反应以减轻伤害；另一方面，低强度的UV-B是植物生长发育的光信号因子之一，经由UVR8等光受体介导中、低、极低强度的UV-B信号，可能通过几个分子途径控制相关基因的表达，分别对植物的UV-B保护基因表达、形态建成、昼夜节律、生长发育等进行调控。目前对UVR8介导的低强度UV-B信号转导的分子机制研究相对深入。在本文中，将对UV-B生理效应分子机制的最新研究进展作一个比较全面的介绍。
- 钱珊珊侯学文
- 关键词：UV-B逆境分子机制
