国家自然科学基金(30600660)
- 作品数：3 被引量：2H指数：1
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- 人Api6融合蛋白原核表达系统的构建
- 2011年
- 目的：本研究拟采用蛋白原核表达的方法,诱导表达人Api6（Apoptosis inhibitor 6）融合蛋白,为进一步研究Api6在凋亡抑制、脂质代谢和肿瘤发生中的作用奠定基础。方法：利用PCR技术扩增人Api6基因,将其克隆至原核表达载体ppSUMO,构建重组质粒ppSUMO-Api6;重组质粒转化原核表达宿主菌E.coli Rosetta感受态;采用蛋白原核表达的方法,不同诱导前菌液浓度,不同温度、不同异丙基硫化半乳糖苷（Isopropy1-β-D-thiogalaotopyrano-side,IPTG）浓度、不同诱导时间,筛选诱导表达Api6重组蛋白的最优条件;Western blot鉴定其表达情况。结果：成功构建重组质粒ppSUMO-Api6;成功诱导Api6重组蛋白的原核表达,表达的最优条件为：OD600=0.5~0.8的重组菌,16℃、0.5 mmol/L IPTG诱导16 h。结论：含有人Api6 cDNA全长序列的重组质粒ppSUMO-Api6,经转化原核表达宿主菌E.coli Rosetta感受态细胞,在诱导前菌液OD600=0.5~0.8、16℃、0.5 mmol/LIPTG、诱导16 h这一优化的诱导条件下,重组菌ppSUMO-Api6-Rosetta可诱导重组蛋白ppSUMO-Api6的原核表达。
- 方严练雪梅
- 关键词：原核表达融合蛋白
- Api6/AIM/Spα调节免疫和脂质代谢的生物学功能研究
- 2011年
- 凋亡抑制因子6(apoptosis inhibitor 6,Api6),又称作AIM/Spα,是清道夫受体富含半胱氨酸残基超家族新成员。Api6/AIM/Spα由巨噬细胞特异性表达,具有抑制CD4+/CD8+双阳性胸腺细胞、T淋巴细胞、NKT淋巴细胞和巨噬细胞凋亡的作用。作为模式识别受体,Api6/AIM/Spα直接与病原体相关分子模式LPS/LTA结合,在机体固有免疫和适应性免疫中发挥重要的作用。近年研究发现,Api6/AIM/Spα可以通过抑制动脉粥样硬化斑块部位巨噬细胞凋亡加重动脉粥样硬化早期斑块的进展,也可以通过抑制脂肪酸合成酶(FAS)的生物学活性提高脂肪细胞的脂解作用,在肥胖的进展中发挥重要作用。重点综述了Api6/AIM/Spα调节免疫和脂质代谢等生物学功能的研究进展。
- 方严刘丹练雪梅
- 关键词：清道夫受体肝X受体
- 细胞凋亡抑制因子6(Api6)在高脂肺损伤中的作用研究被引量：2
- 2011年
- 目的:了解单纯高脂饮食对小鼠肺组织形态学的影响及细胞凋亡抑制因子6(Api6)的表达情况.方法:将8周龄雄性C57BL/6小鼠随机分为2组,分别饲以普通饮食和高脂饮食,14周后获得上述2组小鼠的肺部组织切片,进行油红O染色、HE染色和免疫组化实验,观察单纯高脂饮食对小鼠肺组织形态学的影响;提取小鼠肺组织RNA,检测Api6在病变小鼠肺组织中的表达.结果:与普通饮食组小鼠肺组织相比,油红O染色可见高脂饮食组小鼠肺组织有明显的脂质沉积;HE染色和增殖期细胞核抗原(PCNA)免疫组织化学染色可见高脂饮食组肺组织肺泡间隔增宽,肺组织炎性细胞浸润,同时增殖期细胞明显增多;Api6在高脂饮食组小鼠肺组织中的表达明显升高.结论:高脂饮食可直接导致小鼠肺组织脂质蓄积和炎性损伤,Api6可能在其发病机制中发挥一定的作用.
- 龚雪沈炼桔刘丹叶秀峰唐任宽练雪梅
- 关键词：高脂饮食脂代谢异常
