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国家自然科学基金(30571863): 作品数：19 被引量：42H指数：4; 相关作者：黄赤兵肖亚张艮甫冯嘉瑜范明齐更多>>; 相关机构：第三军医大学新桥医院第三军医大学第三军医大学西南医院更多>>; 发文基金：国家自然科学基金重庆市自然科学基金更多>>; 相关领域：医药卫生生物学更多>>

供体抗原特异性的CD4^+CD25^+ Treg对心脏移植小鼠体内B细胞功能的影响: 2010年; 目的观察供体抗原特异性的CD4+CD25+Treg对同种异系心脏移植小鼠受体B细胞功能的影响。方法以Balb/c小鼠为供体、C57bl/6小鼠为受体建立小鼠心脏移植模型,于术前1 d、术后2周分别将供体抗原特异性的CD4+CD25+Treg(1×106)于尾静脉注入受体体内,术后1个月抽取小鼠外周血,分离B细胞,检测其在抗Ig M抗体刺激下的增殖情况,检测小鼠外周血IgG、IgA水平,以判断应用CD4+CD25+Treg后小鼠体内B细胞功能状态。实验组:术前、术后2周使用CD4+CD25+Treg(n=8);阳性对照组:术前、术后未使用CD4+CD25+Treg(n=8);空白对照组:未移植小鼠(n=8)。结果实验证实,实验组B细胞增殖水平最低,空白对照组其次,阳性对照组最高,3组差异均有统计学意义(P<0.05)。外周血IgG、IgA水平检测证实,实验组与空白对照组比较差异无统计学意义(P>0.05),二者明显低于阳性对照组(P<0.01)。结论经尾静脉注入CD4+CD25+Treg后心脏移植受体体内B细胞的功能可明显受到抑制,CD4+CD25+Treg可通过对B细胞的这一作用调节受体免疫状态,从而达到控制排斥反应,诱导免疫耐受的作用。; 肖亚黄赤兵张艮甫王平贤范明齐冯嘉瑜; 关键词：CD4+CD25+TREG B细胞小鼠心脏移植

小鼠异位心脏移植模型的改良被引量：4: 2008年; 目的探讨小鼠心脏移植模型的建立与改良。方法供体采用BLAB/c小鼠,受体采用C57小鼠。用24GA Cuff管法套扎供心肺动脉与颈外静脉,用自制Cuff管套扎供心升主动脉与颈总动脉。结果供心冷缺血时间少于15 min,手术时间大大缩短,成功率明显提高。结论改进后的模型显著降低了手术难度,可用于移植免疫的各种研究。; 冯嘉瑜贺伟峰朱晓星宋波杨康张银甫黄赤兵; 关键词：小鼠心脏移植

Foxp3体外诱导产生的调节性T细胞对小鼠心脏移植物存活的影响被引量：8: 2006年; 目的研究Foxp3基因转染的受体na ve CD4+CD25-T淋巴细胞对小鼠同种异体心脏移植物存活的影响。方法将Foxp3重组逆转录病毒载体转染的CD4+CD25-T细胞于术前1d经尾静脉输入受体体内。实验分为3组:A组:Foxp3组,术前输入转染PLXSN-mFOXP3-IRES2-EGFP的受体CD4+CD25-T细胞;B组:调节性T细胞组,术前输入受体CD4+CD25+调节性T细胞;C组:空白对照组术前没有加任何干扰措施。术后第3天、第7天各组随机取2只小鼠,进行病理学检查。其余小鼠每日观察心脏移植物存活情况。结果4组移植物的存活时间分别为:A组(56.7±13.5)d(n=15),B组(59.1±11.5)d(n=15),C组(14.0±4.4)d(n=15)。A、B组移植物的存活时间较对照组显著延长,差异有统计学意义(P<0.01),但A、B两组之间差异无统计学意义(P>0.05),病理检查显示A、B组移植物排斥反应轻于C组。结论转染Foxp3基因的小鼠na ve CD4+CD25-T细胞,可以明显延长小鼠异位心脏移植物存活时间,其能力与自然发生的CD4+CD25+调节性T细胞相当。; 贾维胜张银甫黄赤兵肖亚贺伟峰; 关键词：调节性T细胞心脏移植

Foxp3基因转染小鼠CD4^+ CD25^- T细胞对同种T细胞增殖反应的影响被引量：3: 2006年; 目的观察Foxp3基因转染的小鼠CD4+CD25-T细胞对同种T细胞增殖反应的影响。方法以免疫磁珠法分离小鼠脾细胞中的CD4+CD25+和CD4+CD25-T细胞,用流式细胞术检测细胞纯度,以电穿孔法将质粒PMFOXP3-IRES2-EGFP转染小鼠CD4+CD25-T细胞,用荧光显微镜观察转染细胞中Foxp3的表达,转染细胞和CD4+CD25+T细胞与同种T细胞做混合淋巴细胞培养,以3H-TdR掺入测定CPM值。结果在质粒PMFOXP3-IRES2-EGFP转染CD4+CD25-T细胞24h后,转染细胞中可检测到高水平的Foxp3;转染细胞和CD4+CD25+T细胞CPM值分别为3 927.0±674.7和3 895.3±504.6(P>0.05)。结论以质粒PMFOXP3-IRES2-EGFP转染的CD4+CD25-T细胞对同种T细胞增殖反应具有显著抑制作用,与CD4+CD25+T细胞的抑制作用等同。; 肖亚张艮甫黄赤兵贺伟峰王平贤贾维胜; 关键词：电转染混合淋巴细胞反应 FOXP3基因

应用CD4^+CD25^+Treg细胞诱导大鼠肾移植免疫耐受的研究被引量：4: 2007年; 目的应用供体抗原特异性CD4+CD25+Treg细胞诱导移植免疫耐受,抑制大鼠肾移植慢性排斥反应。方法以SD、Wister大鼠分别为供、受体建立同种异体肾移植慢性排斥反应动物模型;受体脾细胞悬液同供体肾组织抗原孵育培养,诱导获得对供体抗原的特异性;采用MACS法分选具有供体抗原特异性的CD4+ CD25+T细胞,FACS流式细胞法检测分选的CD4+CD25+T细胞及CD4+CD25+Treg细胞纯度;获得之供体抗原特异性CD4+CD25+Treg细胞于同种异体肾移植术后2、4、6、8、10周,分别经尾静脉注射入受者体内(实验组,n=12),选取未注射组为对照(n=12)。观察两组移植肾脏存活时间;术后第10、40、80天MTT法检测比较两组受体脾细胞对供体抗原刺激反应程度;术后第10、20、40、60、80天分别监测各组血肌酐水平。结果FACS流式细胞法检测分选的CD4+CD25+T细胞得率为4.13%,分离纯度为73.34%;CD4+CD25+Treg细胞纯度为65.22%。所分选之CD4+CD25+Treg细胞成功获得供体抗原特异性,对供体抗原的抑制率(IR)为85.4%。移植肾存活时间:治疗组移植肾存活时间为(98.83±6.66)d,显著长于对照组的(78.25±4.71)d,组间差异有统计学意义(P<0.05);术后第40、80天治疗组脾细胞对供体抗原刺激反应程度均明显低于对照组,两组间差异有统计学意义(P<0.05)。术后第20、40、60、80天对照组血肌酐指标明显高于治疗组,同治疗组间差异有统计学意义(P<0.05)。结论供体抗原特异性CD4+CD25+Treg细胞可特异性抑制受体对供体抗原的免疫反应,有效抑制了移植肾慢性排斥反应的发生。; 李健黄赤兵郑峻松张艮甫王琦冯嘉瑜肖亚贾维胜方针强; 关键词：免疫耐受肾移植

供体抗原特异性Treg细胞体外分选与鉴定: 2010年; 目的构建大鼠肾移植受体源性CD4+ CD25+ Treg细胞体外分选、鉴定及供体抗原特异性诱导体系。方法大鼠同种异体肾移植受体脾细胞同供肾组织体外混合培养以诱导供体抗原特异性表型;分选受体CD4+ CD25+ T细胞,鉴定CD4+ CD25+ Treg细胞纯度;等量诱导后的Treg细胞加入供、受体大鼠脾细胞混合体系(测定组1)和第三系大鼠同受体大鼠脾细胞混合体系(测定组2)。以受体大鼠脾细胞悬液为阴性对照组,以供、受体大鼠脾细胞混合体系为阳性对照组,检测各组吸光度OD值,观察Treg细胞对两个测定组的抑制效率(IR)。结果 CD4+ CD25+细胞的得率为4.13%,分离纯度为73.34%,CD4+ CD25+ Treg细胞纯度为91.37%。测定组1、2的IR分别为85.4%及21.9%,两者间有显著性差异(P<0.05)。结论体外分选获得高纯度受体源性Treg细胞,并成功诱导获得供体抗原的特异性表型,可满足细胞功能学及在体实验研究。; 李健许亚宏马小平黄赤兵张艮甫; 关键词：CD4 CD25 TREG细胞肾移植

内支架法原位端-端吻合大鼠移植肾静脉被引量：2: 2008年; 目的建立一种省时、高效的大鼠肾移植静脉吻合方法。方法建立同种异体肾移植动物模型。根据移植肾静脉重建方式不同进行模型分组：实验组（n=32）：内支架法原位端-端吻合；对照组Ⅰ（n=25）：原位端-端吻合；对照组Ⅱ（n=22）：cuff管套扎法吻合；对照组Ⅲ（n=20）：与受体下腔静脉端侧吻合。比较各组移植肾静脉手术操作时间、手术并发症发生率。结果实验组供肾静脉切取用时同对照组Ⅲ间差异有统计学意义[（9．08±0．88）min比（12．07±0．88）min，P〈0．05]；修整用时与对照组Ⅱ间差异有统计学意义[（4．97±0．58）min比（8．14±0．64）min，P〈0．05]；对照组Ⅱ术后静脉血栓发生率最高，同实验组间差异有统计学意义（Х^2=4．77，P〈0．05）；实验组静脉吻合口狭窄的发生率最低，同对照组Ⅰ间差异有统计学意义（Х^2=3．90，P〈0．05）。结论应用内支架法行移植肾静脉端-端吻合操作时间短、并发症少，可有效解决大鼠肾移植静脉重建的问题。; 李健黄赤兵张艮甫郑峻松王琦范明齐; 关键词：内支架静脉吻合肾移植

BTLA介导的负调共刺激信号对小鼠心脏移植受体Treg的影响被引量：2: 2009年; 目的探讨人疱疹病毒侵入介导因子(HVEM)基因突变体腺病毒载体对小鼠心脏移植受体Treg(调节性T细胞)的影响。方法HVEM基因突变体腺病毒载体转染心脏移植物,行颈部异位心脏移植后观察其对受体小鼠Treg数量和功能的影响,并检测该腺病毒对供受体混合淋巴细胞培养体系中IL6和TGF-β的影响。结果HVEM突变体腺病毒载体转染心脏移植物后对移植受体Treg数量有增加,功能有增强的作用,移植物存活时间较对照组显著延长;该腺病毒处理供受体混合淋巴细胞培养体系后,培养上清液中IL-6的表达较对照组显著上调。结论HVEM突变体腺病毒载体在延长小鼠心脏移植物存活同时提高受体Treg的数量,并显著上调了其相关细胞因子的表达,提示HVEM-BTLA通路通过干预受体Treg功能是延长移植物存活的可能机制。; 冯嘉瑜肖亚范明齐黄赤兵张艮甫王平贤贾维胜方针强; 关键词：T淋巴细胞弱化因子

供体抗原特异性CD4^+ CD25^+ Treg细胞对肾移植大鼠免疫状态的影响被引量：1: 2007年; 目的研究供体抗原特异性CD4+CD25+调节性T细胞(Treg)对肾移植后大鼠免疫状态的影响。方法常规分离Lewis和F344大鼠脾脏淋巴细胞,然后将Lewis大鼠淋巴细胞负载F344大鼠抗原,然后从负载抗原后的Lewis大鼠淋巴细胞悬液中用MACS磁珠分选法分离纯化供体抗原特异性CD4+CD25+Treg细胞,并用流式检测分选Treg细胞纯度以及RT-PCR检测分选细胞的Foxp3基因表达。以F344、Lewis大鼠分别为供、受体建立同种异体肾移植动物模型,将供体抗原特异性Treg细胞经尾静脉注射入受者体内(治疗组,n=8),选取未注射组为对照组(n=8)。于术前1d,术后15d检测移植后4组大鼠血清IL-10、IgG,并于术后15d MTT法检测受体脾细胞对供体抗原刺激的反应。结果所分选之CD4+CD25+Treg细胞成功获得供体抗原特异性,对供体抗原的抑制率(IR)为85.4%,并检测到Foxp3表达。移植前治疗组和对照组大鼠血清中均无法检测到IL-10浓度。术后15d治疗组血清IL-10与对照组比较,明显增高(P<0.01)。对照组在术后15d血清IgG浓度已经显著升高,较术前差异有统计学意义(P<0.05)。而治疗组术后15d血清IgG浓度与术前相比有所降低,与术前相比差异无统计学意义(P>0.05),但与对照组相比较均差异有统计学意义(P<0.05)。治疗组对供体脾细胞的刺激反应也明显低于Ⅰ组(P<0.01)。结论供体抗原特异性CD4+CD25+Treg细胞能显著促进体内IL-10的产生以及抑制免疫球蛋白IgG的产生,并且可特异性抑制受体对供体抗原的免疫反应。; 王琦张艮甫黄赤兵郑峻松李健范明齐金欢胜冯嘉瑜肖亚; 关键词：肾移植 FOXP3

腹腔注射1，25(OH)_2D_3对调节性T细胞及大鼠肾移植存活的影响被引量：2: 2006年; 目的观察1,25(OH)_2D_3对大鼠CD4^+CD25^+调节性T细胞、IL-10以及大鼠肾移植后存活的影响。方法以SD大鼠为供体,Wister大鼠为受体,建立大鼠肾移植模型。受体随机分为4组：(1)对照组(组Ⅰ)；(2)CsA组(组Ⅱ)：3mg·kg^(-1)·d^(-1)腹腔注射治疗组,术后连续给药13d；(3)1,25(OH)_2D_3组(组Ⅲ)：1μg·kg^(-1)·d^(-1)腹腔注射治疗组,术后连续给药13d；(4) CsA+1,25(OH)_2D_3组(组Ⅳ)：按VD3组和CsA组用药剂量给药。观察移植后4组大鼠存活时间,并于术前4d,术后6、16d检测血清肌酐、IL-10以及术后6d脾脏Treg含量。结果组Ⅲ、组Ⅳ大鼠移植存活时间分别为(13．3±3．2)d和(24．8±2．6)d,较对照组(8．7±1．8d)明显延长(P＜0．01)；组Ⅲ、组Ⅳ移植后6d Cr水平分别为(62．7±7．5)mmol／L、(77．1±9．4)mmol／L,明显低于对照组(424．3±61．2)mmol／L(P＜0．01)。给予1．25(OH)_2D_3后大鼠IL-10水平(268．1±24．3)pg／ml以及脾脏CD4^+CD25^+ T细胞的比率(18．51±3．73)％,较时照组[分别为(50．1±3．0)pg／ml和(8．95±2．01)％]明显增高(P＜0．01)。结论1．25 (OH)_2D_3能显著促进体内IL-10的产生和CD4^+CD25^+T细胞的增殖,适量1,25(OH)_2D_3与CsA联合应用可以明显改善肾功能,延长移植肾的存活时间。; 王琦黄赤兵郑峻松张艮甫李健范明齐冯嘉瑜肖亚黄辉; 关键词：维生素D TREG IL-10

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