国家自然科学基金(30571803)
- 作品数：9 被引量：21H指数：3
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- 相关机构：第四军医大学西京医院第四军医大学更多>>
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- 大鼠未成熟树突状细胞体外扩增及功能鉴定被引量：7
- 2007年
- 目的探讨建立大鼠体外大量扩增未成熟树突状细胞(DC)的方法,以及不同剂量粒细胞巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)对大鼠DC分化成熟的影响。方法分离纯化并扩增大鼠骨髓细胞,用不同剂量GM-CSF培养,6 d和10 d后收集悬浮细胞进行扫描电镜观察和免疫表型鉴定,并行混合淋巴细胞反应,观察其诱导未致敏T淋巴细胞增殖的情况。结果小剂量GM-CSF培养获得的DC(GMlowDC)形态上具有DC的典型特征,在细胞表型、细胞功能试验上具有未成熟的特性,具有DC的典型特征,细胞表面高表达CD11c,低表达CD80,CD86及MHC II类分子,与大剂量GM-CSF加IL-4的联合组培养获得的DC(GMhighDC)相比,其体外刺激未致敏T淋巴细胞的增殖能力较弱。结论笔者所建立的培养未成熟DC的方法是可行的;GM-CSF的剂量与细胞的成熟程度相关。
- 李纪鹏黄怡王为忠董光龙杜建军陈冬利季刚刘骥
- 关键词：树突状细胞粒细胞巨噬细胞集落刺激因子免疫耐受
- 活体小肠移植围手术期的营养调控被引量：2
- 2008年
- 目的:探讨如何恰当地对活体小肠移植病人进行围手术期的营养调控。方法:根据4例活体小肠移植病人术后移植肠的功能恢复程度和全身状况,采用从PN逐步过渡至EN的营养支持方法。同时观察病人术后1周、1、3、6和9个月的临床指标和实验室指标,并进行营养状况评估。结果:4例病人中2例长期生存,分别达8年和4年,各项营养指标均基本恢复正常,健康状况良好;1例术后19 d死于急性肺梗死,1例术后5个月死于多发性器官感染。结论:EN支持可促进移植肠功能的恢复,减少或减轻并发症,提高活体小肠移植的成功率。Gln是EN液中的重要成分。
- 季刚董光龙张洪伟王为忠
- 关键词：小肠移植肠内营养营养调控
- 小鼠颈部异位心脏移植模型建立的改进被引量：2
- 2008年
- 建立了易行、可靠的小鼠颈部异位心脏移植模型,探讨完善小鼠颈部异位心脏移植模型的建立和手术方式的改进。在显微镜下对受体手术,游离受体右侧静外静脉和颈总动脉。对供体,经下腔静脉注射肝素钠全身肝素化后,于低温下切取供心;采用供心无名动脉与受体颈总动脉端端间断吻合,供心肺动脉与受体颈外静脉端端吻合,进行小鼠颈部异位心脏移植。术后通过视诊和触诊检测供心心跳,病理学检查移植心排斥情况。共进行实验50例,其中同系移植25例,同种异基因移植25例。术后复跳率92%;7 d存活率90%,1例因术后失血过多于第1 d死亡,供心总缺血时间40 min。改进后的术式手术成功率高,术中暴露充分、血管处理简单、手术创伤小、污染机率小等,是简单、实用、可靠的手术方式。
- 傅涛王为忠季刚陈冬利杜俊峰何强
- 关键词：心脏移植小鼠
- TGF-β_1基因转染对大鼠树突状细胞生物学特性的影响被引量：5
- 2007年
- 目的观察转化生长因子β_1(TGF-β_1)基因转染后对大鼠树突状细胞(DC)生物学特性的影响。方法将TGF-β_1基因导入大鼠DC,G418筛选,检测转染细胞TGF-β_1的表达及其生物学活性,并进行混合淋巴细胞反应(MLR)。结果TGF-β_1基因转染的DC可以分泌TGF-β_1,而且可特异性抑制血管内皮细胞,对T淋巴细胞的增殖有抑制作用。结论利用构建的TGF-β_1表达质粒转染大鼠DC,转入的TGF-β_1基因可以在DC内稳定表达,并且使DC的生物学特性发生相应的改变。
- 李纪鹏黄怡王为忠董光龙杜建军陈冬利季刚刘骥
- 关键词：转化生长因子树突状细胞基因转染
- TGF-β1基因修饰的未成熟树突状细胞对小肠移植大鼠外周血及移植肠浸润T细胞的影响被引量：3
- 2008年
- 目的探讨经转化生长因子-β1(TGF-β1)基因修饰的未成熟树突状细胞(imDC)预处理大鼠小肠移植受体后的外周血及移植肠浸润T细胞的变化及意义。方法选用近交系F344/N和BN大鼠建立全小肠异位移植模型,实验分4组(每组24只):同基因移植组(BN-BN组)、异基因移植组(F344/N-BN组)、异基因移植+TGF-β1基因转染imDC组(F344/N-BN+TGF-β1组)和异基因移植+TGF-β1基因转染imDC+FK506组(F344/N-BN+TGF-β1+FK506组)。各组大鼠分别于术后3、5、7d各处死6只,获取大鼠静脉血和移植肠。应用免疫组化SABC法检测受体鼠外周血及移植肠CD4+、CD8+、CD25+细胞和IL-4的表达。同时行移植肠组织病理学检查并观察大鼠生存情况。结果TGF-β1修饰的DC细胞能显著抑制外周血及移植肠浸润淋巴细胞CD4+、CD8+及CD25+的表达,并提高IL-4的表达;显著延长受体大鼠的生存时间,但移植肠仍有排斥反应的病理组织学征象。结论TGF-β1修饰的DC通过影响受体外周血及移植肠浸润T细胞对大鼠小肠移植发挥免疫抑制作用。
- 李纪鹏黄怡王为忠董光龙杜建军陈冬利季刚刘骥
- 关键词：小肠移植T细胞
- 人结肠癌血管特异结合短肽的噬菌体肽库筛选及鉴定被引量：1
- 2011年
- 目的建立小鼠结肠癌模型，筛选并鉴定能够与人结肠癌血管内皮细胞特异结合的噬菌体呈现短肽。方法建立小鼠荷瘤模型。鉴定阳性噬菌体的体内归巢能力及内皮细胞结合能力。人工合成噬菌体呈现短肽，通过竞争结合实验观察短肽对其呈现噬菌体的竞争结合抑制作用。并检测短肽与共培养内皮细胞及结肠癌血管的特异性结合能力。结果鉴定出两种外源肽噬菌体，称为pCV1及pCV2。体内实验显示，pCV1、pCV2均能特异性归巢于人结肠癌移植瘤组织，滴度比值pCV1／pCont、pCV2／pCont分别为15．9、20．1倍，明显高于对照组织。体外细胞酶联免疫吸附试验（ELISA）结果显示pCV2在Co—HUVECs上的结合显著高于在HUVECs上的结合，其比值达2．61。人工合成短肽CV2能特异性竞争抑制pCV2向结肠癌移植瘤内的归巢及与Co—HUVECs的特异性结合。免疫荧光染色结果显示，FITC—CV2特异性结合于Co—HUVECs的胞膜与核周胞质，以及结肠癌移植瘤的血管组织。结论得到两个能特异性结合于结肠癌移植瘤的噬菌体单克隆pCV1及pCV2。pCV2能够特异性结合于Co—HUVECs，pCV2所呈现的环状九肽CV2介导了它与Co—HUVECs的特异结合。短肽CV2具有与Co—HUVECs及结肠癌移植瘤血管特异性结合的能力，有可能用于结肠癌的血管靶向治疗。
- 季刚梁树辉董光龙王为忠傅涛
- 关键词：结肠癌噬菌体肽库血管生成短肽
- 大鼠小肠转化生长因子β1重组腺病毒载体的构建和表达被引量：1
- 2008年
- 目的构建可调控性大鼠小肠TGF-β1表达的重组腺病毒载体。方法按RNA提取试剂（TRIzol Reagent）说明书步骤从大鼠小肠组织抽提总RNA，克隆TGF-β1基因；经穿梭载体与可调控性腺病毒载体骨架连接，鉴定后在HEK293细胞包装。获得高滴度病毒后。取上清检测绿色荧光蛋白（GFP）的表达，观察目的基因的表达情况。结果扩增出与预期大小一致的cDNA片段，其中TGF-β1大小为1173bp；其基因序列与GenBank登录的大鼠TGF-β1基因序列完全一致。重组TGF-β1腺病毒获得的滴度约为10nPFU／ml；病毒包装后绿色荧光蛋白表达的检测结果显示，绿色荧光蛋白随着时间的延长，表达量逐渐增高；与预期结果一致。结论构建的可调控性大鼠小肠TGF-β1重组腺病毒载体得到了正确表达，为进一步研究TGF-β1干扰树突状细胞分化成熟诱导小肠移植免疫耐受提供了依据。
- 李纪鹏黄怡王为忠董光龙杜建军陈冬利季刚刘骥
- 关键词：转化生长因子Β腺病毒载体树突细胞
- TGF-β1修饰的未成熟树突状细胞对大鼠移植小肠细胞凋亡的影响
- 2008年
- 目的探讨经TGF-β1修饰的未成熟树突状细胞（imDC）预处理大鼠小肠移植受体后移植肠细胞凋亡的变化及意义。方法选用近交系F344／N和BN大鼠建立全小肠异位移植模型，分4组，每组24只。A组：同基因移植组（BN→BN）；B组：异基因移植组（F344／N→BN）；C组：F344／N→BN异基因移植＋TGF-β1基因转染imDC；D组iF344／N→BN异基因移植＋TGF-β1基因转染imDC＋FK506。术后3、5、7d各处死6只，取出移植肠。行免疫组化检测Bcl-2和Bax表达，TUNEL及电镜观察细胞凋亡。同期进行移植肠组织病理学检查。结果C组中Bcl-2在术后有轻度下降，而Bax的表达则略有升高，但明显低于B组，差异有统计学意义（P〈0．05）；D组术后Bcl-2及Bax的表达与A组无明显差异。C组的凋亡细胞数在术后逐渐增加，但数量始终较少，与B组比较差异有统计学意义（P〈0．05）；D组仅见少量凋亡细胞。结论经TGF-β1基因转染的imDC预处理受体可以抑制细胞凋亡，从而减轻小肠移植术后急性排斥反应的程度。
- 李纪鹏黄怡王为忠董光龙杜建军陈冬利季刚刘骥
- 关键词：树突细胞小肠移植细胞凋亡
- 活体小肠移植术后慢性排斥反应一例
- 2009年
- 患者 男，18岁，因短肠综合征于2002年1月3日入院。患者曾于2001年9月因肠扭转坏死行小肠切除术，残余小肠为距Treitz韧带10cm、长约30cm的空肠，回盲瓣完整存在；患者当时体质量仅30kg。患者入院后经积极术前准备，于2002年2月15日行活体小肠移植术。供体为患者父亲，供体和受体的ABO血型均匹配，HLA和DA为半相符。
- 季刚王为忠董光龙
- 关键词：小肠切除术慢性排斥反应移植术后TREITZ韧带扭转坏死
