国家科技重大专项(20132X10004002-003-05)
- 作品数：3 被引量：3H指数：1
- 相关作者：谢力王晓囡李鸿钧曹颖李杨更多>>
- 相关机构：昆明学院昆明医科大学中国医学科学院更多>>
- 发文基金：国家科技重大专项云南省教育厅科学研究基金云南省重点新产品开发计划更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 腺病毒载体表达轮状病毒G1型外壳蛋白VP7及其诱导的免疫应答研究
- 2015年
- 构建表达地方流行株轮状病毒G1型外壳蛋白VP7的复制缺陷型重组腺病毒,免疫小鼠评价其体液及细胞免疫反应效果,探讨基因工程轮状病毒疫苗的实验基础及可行性。RT-PCR扩增轮状病毒VP7基因并克隆至pshuttle-CMV穿梭质粒,pshuttle-VP7与腺病毒骨架质粒同源重组后转染293细胞包装重组腺病毒rAd-VP7。RT-PCR、western blot检测rAdVP7在体外细胞中的转录及表达。rAd-VP7经肌注或滴鼻免疫小鼠后检测其血清IgG、肠道IgA及中和抗体效价;流式、ELISPOT检测淋巴细胞亚群变化及IFN-γ分泌情况。结果显示ELISA可检测到免疫小鼠血清IgG和滴鼻组肠道IgA抗体的产生;肌注和滴鼻免疫组中和抗体平均滴度分别为228和322.5;免疫小鼠脾细胞IFN-γ的分泌增加。表达轮状病毒VP7的重组腺病毒不但能够激发体液及细胞免疫反应,滴鼻免疫途径还可诱导粘膜免疫应答。
- 谢力闫姗姗欧霞郭莉莉吴晋元周艳李鸿钧孙茂盛
- 关键词：轮状病毒VP7重组腺病毒
- G1P[8]型轮状病毒ZTR-68株冷适应株的筛选及其生物学特征鉴定被引量：1
- 2015年
- 通过对G1P[8]型人野生轮状病毒ZTR-68株的梯度降温传代,筛选适应低温的轮状病毒减毒毒株,为轮状病毒减毒疫苗的制备提供研究基础。自腹泻婴儿粪便样品中分离轮状病毒,在MA104猴肾细胞中自37℃始传代培育,每传代8代后降温3℃,连续传代至28℃,累计传代32代,低温适应过程中检测病毒生物学性状的变化。梯度降温传代后得到的冷适应株RNA基因组电泳迁移条带仍与原始毒株保持一致,血凝滴度降低,病毒蚀斑形态趋于变小且不规则,37℃回复培养时病毒呈现增殖速度减慢且感染性滴度降低的变化。结果显示:野生轮状病毒经冷适应传代后可以得到具有减毒效应的稳定毒株,该毒株出现了部分生物学特征的改变,冷适应株的选育为轮状病毒减毒活疫苗的研制提供了一种备选策略。
- 谢力米锴叶静牛香莲孙晓琴易山李鸿钧孙茂盛
- 关键词：轮状病毒
- 表达轮状病毒nsp4基因重组腺病毒的构建与免疫评价被引量：2
- 2014年
- 目的:应用非复制腺病毒表达系统构建表达人轮状病毒非结构蛋白4(NSP4)的重组腺病毒,初步评价其免疫保护效果。方法:构建含野生轮状病毒NSP4基因的穿梭质粒pshuttle-NSP4,与腺病毒骨架质粒pAdeasy经同源重组后在Ad-293细胞中包装获得pAd-NSP4重组腺病毒颗粒。电镜、RT-PCR、免疫荧光等方法鉴定病毒特征及在体外细胞中的表达。肌肉注射及滴鼻方式免疫小鼠,检测小鼠血清抗体效价及其中和保护效果。结果:获得了滴度为108.25CCID50/ml的重组腺病毒pAd-NSP4,免疫荧光检测到特异性目的蛋白的表达。二次免疫后肌肉注射和滴鼻小鼠的ELISA血清平均效价分别为1∶320和1∶1436.8;中和抗体效价1∶45.3和1∶71.8。结论:表达轮状病毒NSP4蛋白的非复制型重组腺病毒颗粒具有良好的免疫原性。滴鼻途径比肌肉注射可更加有效地诱导小鼠的免疫应答。
- 谢力王晓囡李杨严敏曹颖李鸿钧孙茂盛
- 关键词：轮状病毒NSP4重组腺病毒NSP4
