国家自然科学基金(30300412)
- 作品数：3 被引量：4H指数：1
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- 相关机构：中国疾病预防控制中心中国疾病预防控制中心病毒更多>>
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- 提高免疫毒素DT_(386)-GMCSF在E.coli中表达量的研究
- 2007年
- 以人粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)受体(GM-CSFR)为靶向的白喉毒素(DT)与GM-CSF免疫毒素DT386-GMCSF为急性髓系白血病提供了一种新的替代治疗途径,但该蛋白在E.coli中的表达量很低,难以进行工业化生产。为探索造成其低表达的关键影响因素,对DT386-GMCSF中的GM-CSF进行了C端的截短表达,发现GM-CSF中L114编码序列可明显影响融合蛋白的表达量。在此基础上,构建了一系列突变体,发现保留GM-CSF1-123位氨基酸且将L114L115V116突变为G114V115T116的突变体DF123GVT的表达量高于DT386-GMCSF,且对来源于高表达GM-CSF受体的HL60细胞的肿瘤单细胞具有相似的细胞毒作用。DF123GVT突变体的获得为GM-CSFR靶向的免疫毒素的开发应用打下了基础。
- 王健伟欧阳晶崔婷屈建国洪涛
- 关键词：免疫毒素白喉毒素粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子
- 白喉毒素DT_(386)片段的表达纯化及细胞毒性研究被引量：3
- 2004年
- 基于白喉毒素 (diphtheriatoxin ,DT)的免疫毒素在临床试验中普遍发现毒性反应 ,但机制尚不清楚。据推测 ,免疫毒素的细胞毒性源自DT的酶活性区和跨膜转运区 (N端 386～ 388个氨基酸 ,DT3 86)。为考察DT3 86毒素片段与毒性反应的关系 ,将DT3 86在E .coli中进行了表达、纯化 ,并初步观察了其细胞毒性。经Q SepharoseFF离子交换层析 ,获得纯度达 95 %的DT3 86蛋白。DT3 86杀伤HL60细胞的IC50 为 2× 1 0 -6mol L ,比免疫毒素的特异杀伤毒性低 1 0 0倍以上 ;但在高浓度下 ,DT3 86可非特异性杀伤多种细胞。小鼠体内实验初步结果表明 ,给药剂量高则体内毒性反应强烈。结果提示免疫毒素的剂量限制毒性与DT3 86的非特异细胞毒性有一定相关性 。
- 欧阳晶王健伟屈建国洪涛
- 关键词：白喉毒素细胞毒性免疫毒素
- 白喉毒素A片段的表达纯化与单克隆抗体制备被引量：1
- 2004年
- 白喉毒素 (Diphtheriatoxin ,DT)A片段 (DTA)是白喉毒素的酶活性区 ,也是DT类免疫毒素的关键结构域。DTA蛋白及其单克隆抗体在免疫毒素的毒性机理、检测与纯化研究等方面具有重要价值。通过在E .coli中表达了DTA ,经Q SepharoseFF和Ni2 + Sepharose两步层析纯化 ,得到纯度约为 90 %的融合蛋白。以DTA为抗原免疫BalB c小鼠 ,获得了分泌抗DTA特异单抗的杂交瘤细胞株 3B6和 3B9。单抗为IgG1亚型 ,滴度达 1∶10 6 以上 ,与DTA的结合可被抗DT马血清竞争抑制。抗DTA单抗用于免疫印迹试验 ,或制备成免疫亲和柱纯化基于DT的重组免疫毒素 ,均获得较好效果 。
- 欧阳晶王健伟王春晓郭丽脱厚珍崔婷洪涛
- 关键词：纯化单克隆抗体免疫毒素
