辽宁省海洋与渔业厅资助项目(201005)
- 作品数：9 被引量：86H指数：6
- 相关作者：李华李强刘海燕吴秋仙王轶南更多>>
- 相关机构：大连海洋大学中国检验检疫科学研究院中国海洋大学更多>>
- 发文基金：辽宁省海洋与渔业厅资助项目海洋公益性行业科研专项国家科技支撑计划更多>>
- 相关领域：农业科学更多>>
- 复方中草药对大菱鲆非特异性免疫力的影响被引量：29
- 2013年
- 将牛膝、板蓝根、甘草、陈皮、肉桂、麦芽、神曲7味中草药,粉碎后经80目筛网过滤,按一定比例混匀,以2%、4%和6%的质量分数添加于基础饲料中连续投喂体质量为(29.00±1.82)g的大菱鲆Scophthalmus maximus,对照组投喂不添加中草药的基础饲料,试验共进行28 d,试验结束后测定大菱鲆的非特异性免疫指标及抗病力。结果表明:在整个试验周期内,4%浓度组大菱鲆血清溶菌酶活力和抗菌活力均比对照组有显著升高(P<0.05);试验前2周4%和6%浓度组鱼血清抗蛋白酶活力较高,后2周2%浓度组鱼血清抗蛋白酶活力逐渐升高,并显著高于其他组(P<0.05);试验前3周4%浓度组鱼血清补体C3含量与对照组相比显著升高(P<0.05);在整个试验周期内,2%、4%、6%浓度组鱼血清NBT阳性细胞数与对照组相比均显著升高(P<0.05),且4%和6%浓度组升高更为明显;在整个试验周期内,4%和6%浓度组头肾白细胞吞噬活性均呈现先降低后升高的趋势,均在第4周达到峰值,且显著高于对照组和2%浓度组(P<0.05);攻毒试验表明,各组的存活率从大到小依次为4%浓度组>2%浓度组>6%浓度组>对照组。本研究表明,该复方中草药可以显著提高大菱鲆的非特异性免疫力和抗病力,2%浓度组在一定水平上有促进作用,4%浓度组效果更为显著。
- 李华张太娥李强
- 关键词：大菱鲆复方中草药非特异性免疫力抗病力
- 条石鲷检出的虹彩病毒特性研究被引量：12
- 2011年
- 2009年8月份辽宁地区某网箱养殖场出现条石鲷大量死亡病情,对病鱼组织切片观察,在脾脏和肾脏等器官内发现许多形态异常肿大的嗜碱性粒细胞。病鱼组织匀浆液感染GF细胞出现了明显的细胞病变效应（CPE）。经透射电镜观察发现,脾脏、肾脏、肝脏及肠组织细胞质内存在大量呈六边形的病毒粒子,该病毒由核衣壳（100110nm）和囊膜构成,直径150180nm,似虹彩病毒。使用真鲷虹彩病毒（RSIV）959bp PstI片段特异性引物对病鱼各脏器组织进行PCR扩增,在脾脏、肾脏、鳃、肠、心脏和脑扩增出570bp大小的目的片段。同时,针对虹彩病毒主衣壳蛋白序列进行PCR扩增后得到1 400 bp大小的基因片段。病毒主衣壳蛋白序列系统进化分析显示,该病毒与真鲷虹彩病毒（RSIV-U1）等几株病毒位于同一进化分枝内。根据上述实验结果,作者认为引发条石鲷大批死亡的病原为真鲷虹彩病毒（Red sea bream iridovirus,RSIV）。
- 李华孙志鹏李强江育林
- 关键词：条石鲷虹彩病毒
- 黄海希瓦氏菌单抗介导间接ELISA快速检测技术的建立被引量：9
- 2010年
- 应用农业部海洋水产增养殖学重点实验室制备的特异性抗黄海希瓦氏菌Shewanella smarisflavi AP629单克隆抗体3D9作为一抗,以碱性磷酸酶(AP)标记的羊抗鼠Ig作为酶标二抗,建立了仿刺参Apostichopusjaponicus"化皮病"病原菌——黄海希瓦氏菌AP629的间接ELISA快速检测方法,并进行了条件优化。结果表明:抗原的最佳包被浓度为107个/mL,一抗工作的最佳稀释度为1∶32,病原菌的检测灵敏度为5×105个/mL。该方法特异性强,与希瓦氏菌属其它种类、弧菌和气单胞菌等均无交叉反应。该方法的建立有助于快速准确地诊断由黄海希瓦氏菌AP629引起的仿刺参疾病。
- 景宏丽李强吴秋仙李华
- 关键词：仿刺参单克隆抗体间接ELISA
- 几种中草药对海水养殖中常见病原菌的抗菌作用被引量：18
- 2011年
- 采用水煎煮法、微波乙醇提取法和微波水提取法对补骨脂、肉桂、黄连、五倍子、石榴皮、大黄、黄芩、苦参、乌梅、白头翁10种中草药进行提取,并用其提取液对海水养殖中7种常见致病菌(灿烂弧菌Vibriosplendidus、黄海希瓦氏菌Shewanella marisflavi、哈维氏弧菌Vibrio harveryi、副溶血弧菌Vibrio parahaemolytic-us、迟钝爱德华氏菌Edwardsiellosis tarda、海豚链球菌Streptococcus iniae、杀鲑气单胞菌Aeromonas salmonici-da)的最低抑菌浓度(MIC)和最低杀菌浓度(MBC)进行了测定,同时进行联合药敏试验,研究了几种中草药对海水养殖中常见病原菌的抗菌作用。结果表明:五倍子和石榴皮的抑菌杀菌效果最好,五倍子的MIC分别为0.78～1.56 mg/mL(水煎煮法、微波水提取法)、0.39～1.56 mg/mL(微波乙醇提取法),石榴皮的MIC分别为1.56～3.13 mg/mL(水煎煮法)、0.78～1.56 mg/mL(微波乙醇提取法)、0.78～3.13mg/mL(微波水提取法);五倍子的MBC分别为3.13～6.25 mg/mL(水煎煮法)、1.56～3.13 mg/mL(微波乙醇提取法、微波水提取法),石榴皮的MBC分别为6.25～25 mg/mL(水煎煮法)、3.13～6.25 mg/mL(微波乙醇提取法、微波水提取法)。其次是黄连、黄芩和乌梅,而大黄、补骨脂、肉桂、苦参、白头翁的抑菌、杀菌效果一般或者较弱。用3种方法提取的中草药对7种病原菌的抗菌作用依次为:微波乙醇提取法提取液≥微波水提取法提取液≥水煎煮法提取液。联合药敏试验结果表明,复方五倍子与乌梅、五倍子与甘草对灿烂弧菌,黄芩与甘草对迟钝爱德华氏菌,石榴皮与乌梅对海豚链球菌,五倍子与石榴皮、五倍子与黄芩对黄海希瓦氏菌的抑制分别有协同作用,该结果可为水产养殖临床用药提供参考资料。
- 李华李强付雷
- 关键词：中草药抑菌联合药敏
- 孔雀鱼暗尾丝虫病病原性确认与鉴定被引量：4
- 2012年
- 近年来，随着休闲渔业的兴起，观赏鱼养殖业蓬勃发展，目前我国出口的观赏鱼类已达120多种，产品远销东南亚、日本、欧洲、美国等，年出口创汇约达2亿美元。其中孔雀鱼、剑尾鱼等小型热带观赏鱼深受养殖爱好者青睐，其贸易量约占淡水观赏鱼总贸易量的30％以上 。但在观赏鱼养殖中由于养殖密度高、管理不善、防病治病措施不力等原因，养殖期间病害极易暴发流行。
- 杨丽文潘宏博李华李强吴亚楠
- 关键词：孔雀鱼人工感染试验SSURRNA基因序列
- 鲶爱德华氏菌间接酶联免疫快速检测法的建立被引量：11
- 2010年
- 用鲶爱德华氏菌兔抗血清作为一抗,碱性磷酸酶(AP)标记的羊抗兔IgG作为酶标二抗,建立黄颡鱼"红头病"病原菌—鲶爱德华氏菌的间接酶联免疫(ELISA)快速检测法,并优化检测条件。抗原最佳包被浓度为107/mL,一抗工作的最佳稀释度为1∶211,病原菌的检测灵敏度为105/mL,交叉反应实验证明该方法特异性强,与迟钝爱德华氏菌、弧菌等13种标准菌株无交叉。应用上述技术对人工感染发病鱼中分离的优势菌进行检测,结果表明阳性检出率为80%;对自然发病黄颡鱼体内分离获得的20株优势菌检测结果表明,12株菌为鲶爱德华氏菌。
- 李重实李强刘海燕叶仕根李华
- 关键词：黄颡鱼多克隆抗体
- 应用双抗体夹心酶联免疫方法检测仿刺参病原菌--黄海希瓦氏菌AP629被引量：6
- 2011年
- "化皮病"是当前仿刺参养殖的最严重的疾病,导致大量死亡,严重影响我国水产养殖的经济效益。以仿刺参病原菌——黄海希瓦氏菌(Shewanella smarflavi)AP629兔源多克隆抗体和鼠源单克隆抗体3D9分别作为包被抗体和检测抗体,建立了黄海希瓦氏菌AP629的双抗体夹心ELISA快速检测方法。多克隆抗体和单抗3D9的最佳稀释倍数分别为1∶400和1∶80,该方法特异性强,与弧菌、气单胞菌、爱德华氏菌、大肠杆菌等均无交叉反应,检测灵敏度高。以PBS和仿刺参体壁匀浆上清液为悬菌介质的最低检出限分别为104cells/mL和106cells/mL。对人工感染黄海希瓦氏菌的10头仿刺参进行检测,其检测结果均为阳性,稳定性和重复性良好。该方法的建立有助于快速准确地诊断由黄海希瓦氏菌AP629引起的仿刺参疾病。
- 吴秋仙李强李华王轶南
- 关键词：双抗体夹心ELISA
- 鮰爱德华菌黄颡鱼分离株外膜蛋白的抗原性分析被引量：6
- 2011年
- 以黄颡鱼"红头病"致病菌——鮰爱德华菌(Edwardsiella ictaluri)A86作为实验菌株,通过十二烷基肌氨酸钠(Sarkosyl)抽提并结合超速离心的方法提取主要外膜蛋白(OMPs),SDS-PAGE图谱分析结果显示,OMPs主要有6条条带,相对分子质量分别为45 000、42 000、41 000、36 000、30 000和22 000。用A86 OMPs免疫新西兰大白兔,获得多克隆抗体22 mL,抗体效价为1∶20 480,抗体按照1∶2 560稀释时具有较高的特异性,仅与迟缓爱德华菌(E.tarda)、海豚链球菌(Streptococcus iniae)和创伤弧菌(Vibrio vulnificus)存在微弱的交叉反应,与鮰爱德华菌参考株及不同地区的分离株呈现特异性结合。多克隆抗体与OMPs的免疫印迹结果显示,主要有2条明显的免疫反应发色带,相对分子质量分别为36 000和30 000,且36 000蛋白染色最为明显。多克隆抗体与包括菌株A86在内的分离自南北方不同地区的10株鮰爱德华菌全菌免疫印迹试验发现,所有受检菌株反应结果相同,主要有4条明显的反应条带,相对分子质量分别为106 000、54 000、36 000和30 000,其中36 000和30 000两条蛋白带染色最深。因此,认为从黄颡鱼体内分离的鮰爱德华菌OMPs中36 000和30 000蛋白具有很好的免疫原性,36 000蛋白尤甚。
- 李强刘海燕黄华李华
- 关键词：黄颡鱼外膜蛋白抗原性
- 黄海希瓦氏菌多克隆抗体部分特性的分析被引量：2
- 2011年
- 采用免疫学方法,以仿刺参Apostichopus japonicus"化皮病"病原菌——黄海希瓦氏菌Shewanella marisflavi AP629福尔马林灭活疫苗作为免疫原,对新西兰大白兔进行免疫,制备了高效价的多克隆抗体。通过间接酶联免疫、间接免疫荧光和免疫印迹等技术对多克隆抗体的部分特性进行了分析。结果表明:获得的多克隆抗体的效价为1∶32768;多抗与黄海希瓦氏菌标准菌株存在很强的阳性反应,与弧菌和气单胞菌、链球菌和大肠杆菌交叉反应很弱或不存在交叉反应;多抗不仅与菌体本身反应,与菌株表面的分泌物也发生特异性结合。免疫印迹结果显示,多克隆抗体与黄海希瓦氏菌AP629结合的抗原决定簇主要蛋白带有6条,相对分子质量分别为131 000、128 000、113 000、62 000、38 000和33 000,其中38 000和33 000蛋白条带的抗原性最强;与胞外产物结合的抗原决定簇清楚的蛋白条带主要有3条,相对分子质量分别为62 000、38 000和33 000,其中62 000蛋白条带的信号最强。
- 李强齐楠杨丽文李华王轶南
- 关键词：仿刺参多克隆抗体
