国家自然科学基金(30700711)
- 作品数：3 被引量：12H指数：2
- 相关作者：唐家琪胡福泉刘丽娜赵岩朱军民更多>>
- 相关机构：第三军医大学中国人民解放军南京军区军事医学研究所更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家高技术研究发展计划更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 猪链球菌2型感染实验动物模型的研究进展被引量：5
- 2010年
- 猪链球菌为革兰阳性兼性厌氧性球菌,感染后可引起猪的关节炎、脑膜炎、肺炎、败血症甚至死亡,严重影响着世界各国的生猪养殖业,导致极大的经济损失。近年来,人感染猪链球菌的病例时有报道,并于1998年和2005年在我国引起两次大规模流行,危害人类健康。建立和选择理想的动物模型,对于研究猪链球菌的致病机理、与宿主间的相互作用及研发防治猪链球菌感染的新药、疫苗及诊断试剂都有着十分重要的意义。本文就已建立的各种猪链球菌感染动物模型展开综述,希望能帮助人们根据不同的试验目的与研究方向选择合适的动物模型。
- 宋洁黎庶
- 关键词：猪链球菌2型动物模型猪链球菌感染
- 猪链球菌2型溶血素sly基因的表达及其产物的纯化和活性研究被引量：1
- 2007年
- 目的克隆并表达猪链球菌2型(SS2)溶血素基因(sly),为筛选SS2疫苗保护性抗原奠定基础。方法用PCR方法从SS2临床分离株05ZYH33的基因组DNA中扩增出溶血素基因片段,将目的基因插入表达载体pET-30b(+)中,构建重组表达载体pET30b-sly。重组载体经限制性内切酶酶切和DNA测序鉴定后,转化大肠埃希菌(E.coli Rosetta)。IPTG诱导表达,镍离子亲和层析纯化重组蛋白,鉴定目的蛋白的免疫学活性以及溶血活性。结果PCR扩增的sly基因长度约为1500 bp,经测序分析,插入载体的sly基因序列准确并保持了正确的读框。经IPTG诱导的目的蛋白表达量约占总蛋白的30%,亲和层析纯化后,蛋白纯度达80%以上。Western blot检测证实该蛋白能与感染SS2的人血清发生特异性结合。溶血试验表明重组蛋白溶血素能使猪红细胞发生溶解,溶血价为256。结论成功构建了表达载体pET30b-sly,该载体可在大肠埃希菌中表达,表达蛋白具有免疫反应原性及溶血活性。
- 刘丽娜胡福泉朱军民赵岩潘渠李明唐家琪
- 关键词：猪链球菌2型活性研究
- 猪链球菌2型疫苗候选分子FBP的表达及免疫学活性研究被引量：6
- 2008年
- 目的表达SS2纤连蛋白结合蛋白(fibronectin-binding protein,FBP),研究其免疫学活性,探讨其保护活性和作为疫苗候选分子的可能性。方法用PCR技术从SS2临床分离株05ZYH33的基因组DNA中扩增出fbp基因片段,插入表达载体pET-30b(+)中,构建重组表达载体pET30b-fbp。该载体经酶切鉴定和DNA测序鉴定后,转化E.coli.Rosetta,IPTG诱导表达,镍离子亲和层析纯化重组蛋白。Western blot证实目的蛋白的分子量和免疫反应原性。重组蛋白免疫小鼠后收集多抗血清,间接ELISA检测其效价。结果PCR扩增的fbp基因长度约为1700bp,所构建重组表达载体酶切鉴定无误、测序证实碱基序列100%正确且保持正确读框。IPTG诱导表达,目的蛋白表达量约占菌体总蛋白的10%。亲和层析获得目的蛋白,纯度达80%以上。Western blot检测证实该蛋白能与感染SS2的病人血清发生阳性反应。重组蛋白免疫小鼠后血清效价达1∶25600以上。结论成功构建了表达载体pET30b-fbp,可在工程菌E.coli.Rosetta中表达;表达蛋白具有良好的免疫原性和反应原性。
- 刘丽娜胡福泉朱军民赵岩陈志瑾唐家琪
- 关键词：免疫学活性
