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国家重点基础研究发展计划(2007CB707804): 作品数：39 被引量：258H指数：9; 相关作者：许正宏谭天伟饶志明方柏山徐美娟更多>>; 相关机构：江南大学北京化工大学华侨大学更多>>; 发文基金：国家重点基础研究发展计划国家高技术研究发展计划国家自然科学基金更多>>; 相关领域：生物学化学工程轻工技术与工程理学更多>>

不同供氧水平对L-精氨酸分批发酵过程的影响被引量：8: 2008年; The effect of different oxygen supply levels by controlling flask capacity on the performance of producing L-arginine using Corynebacterium crenatum SYPA5-5 was investigated in the batch fermentation process.The analysis of fermentation kinetic models and metabolic flux indicated that the hexose monophosphate (HMP) pathway was much more active to produce nicotinamide adenine dinucleotide phosphate (NADPH) for bacterial growth at a high oxygen supply level.L-arginine production was also enhanced at a high oxygen supply level because of high glucose consumption.On the other hand,there was more metabolic flux from α-KG to Glu,the precursor of Arg.; 许虹窦文芳许泓瑜张晓梅饶志明许正宏; 关键词：L-精氨酸钝齿棒杆菌发酵供氧

少根根霉同步糖化发酵生木薯粉生产富马酸被引量：2: 2012年; 以生木薯粉作为碳源,利用少根根霉发酵生产富马酸。考察了木薯粉细度、碳酸钙添加量、转速及添加氧载体对富马酸产量的影响。在摇瓶发酵情况下,比较了葡萄糖和生木薯粉两种碳源生产富马酸发酵过程。摇瓶发酵时,富马酸的产量最高可达46.36g/L,时空产率达0.32g/L/h。采用2.5L自制气升式发酵罐(培养温度30℃、通气量1.54vvm、装液量1.3L),发酵培养144h后,富马酸产量达42.32g/L,时空产率达0.29g/L/h。; 韩卫强古春博邓利王芳谭天伟李克非; 关键词：少根根霉富马酸同步糖化气升式反应器

钝齿棒杆菌乙酰谷氨酸激酶编码基因argB的克隆表达、纯化及酶学性质研究被引量：2: 2010年; 本研究的钝齿棒杆菌(Gorynebacterium crenatum SYPA)是筛选得到的高产精氨酸突变菌株,其中argB基因编码的乙酰谷氨酸激酶(NAGK)是精氨酸合成过程中的关键酶。为了进一步研究该酶的相关特性,以钝齿棒杆菌(Corynebacterium crenatum SYPA)基因组为模板,扩增得到其arB基因,成功构建了pET-28a-argB重组质粒,并在E.coli BL21(DE3)中诱导后高效表达。利用载体pET-28a上的His6·Tag标记选用Ni柱亲和层析法纯化表达具有活性的NAGK,纯化后酶的比活力达到7.28 U/mg,纯化倍数达66.18。并对该酶的酶学性质进行了初步研究,该酶的最适反应温度为30℃;最适pH值为9.0;酶学动力学参数以N-乙酰谷氨酸为底物的Km为3.35mmol/L;金属离子Cu^(2+)、Mn^(2+)、螯合剂对乙酰谷氨酸激酶均有明显的抑制作用。; 刘飞饶志明徐美娟许泓瑜张晓梅窦文芳许正宏; 关键词：钝齿棒杆菌纯化酶学性质

高产精氨酸的钝齿棒杆菌在高低供氧条件下的差异蛋白质组学初步研究被引量：5: 2011年; 溶氧水平直接影响钝齿棒杆菌合成精氨酸产量的高低,运用双向电泳结合MALDI-TOF-MS及MS/MS质谱鉴定技术的方法对高低供氧条件下高产精氨酸的钝齿棒杆菌的胞内可溶性蛋白进行分离鉴定。结果表明,钝齿棒杆菌菌体蛋白的等电点主要分布在4-7的范围内,采用pH4-7的IPG胶条进行分离,得到了645±12个蛋白点。通过软件比对分析发现,在高低两种供氧条件下存在32个显著差异的蛋白点,成功鉴定出了其中的29个蛋白点,代表了27种差异蛋白。采用数据库检索发现这些蛋白参与不同的代谢途径,包括糖类代谢、氨基酸代谢及能量代谢等。其主要集中在HMP途径、TCA循环和尿素循环。分析结果表明,在高供氧条件下能量代谢水平提高,HMP途径的增强可明显缓解高供氧条件下的氧化压力,同时TCA和尿素循环途径活跃有利于精氨酸的合成。; 陶帅窦文芳张晓梅许泓瑜饶志明许正宏; 关键词：钝齿棒杆菌蛋白质组

L-乳酸脱氢酶在大肠杆菌BL-21(DE3)中的表达被引量：2: 2011年; 为了在大肠杆菌中构建利用葡萄糖生产L-乳酸的途径,以鼠李糖乳杆菌(Lactobacillus rhamnosus)LA-04-01基因组为模板,设计引物扩增L-乳酸脱氢酶基因L-ldh。将该基因连接到表达载体pET-28a(+)上,并转化大肠杆菌Top10。通过卡那霉素抗性平板筛选,提取重组质粒pET28a-L-ldh并测序,结果正确。将pET28a-L-ldh转化大肠杆菌BL-21(DE3),通过卡那霉素抗性平板筛选,得到产乳酸的大肠杆菌基因工程菌。经IPTG诱导后,SDS-PAGE电泳,检测到目的蛋白条带,L-乳酸脱氢酶比酶活力达到9.44 U/mL。该基因工程菌通过摇瓶发酵,L-乳酸产量达到3g/L,成功构建出一条在大肠杆菌中生产L-乳酸的新途径。; 李倩王梦刘珞谭天伟; 关键词：大肠杆菌鼠李糖乳杆菌

缺陷短波单胞菌高产L-脯氨酸菌株的选育及其发酵条件优化被引量：4: 2012年; 以缺陷短波单胞菌(Brevundimonas diminuta)JNPP-1为出发菌株,利用紫外诱变及亚硝基胍复合诱变的方式,获得1株遗传性能稳定、可抗磺胺胍、能耐高渗透压以及能以琥珀酸钠为唯一C源的、在培养基上有生长优势的L-脯氨酸高产菌株JNPP-NSS(SGr、Sucg、NaClr)。经发酵条件优化后,L-脯氨酸的最高质量浓度可达47.3 g/L,与出发菌株相比提高了45.1%,生产速率由0.45 g/(L·h)提高到0.78 g/(L·h)。; 赵世杰窦文芳李会张旦旦史劲松许正宏; 关键词：L-脯氨酸诱变选育

谷氨酸棒杆菌ilvE基因的敲除对相关氨基酸合成的影响被引量：4: 2012年; L-缬氨酸是谷氨酸棒杆菌SYPS-062发酵生产L-丝氨酸的主要副产物。为减少L-缬氨酸的积累,利用基因重组技术敲除SYPS-062转氨酶B编码基因ilvE内部的987 bp核苷酸序列,构建了ilvE基因缺失突变株SYPS-062△ilvE。研究表明,重组菌ilvE基因的缺失直接导致了分支氨基酸(Val、Ile、Leu)的合成能力的降低,影响了菌体的生长,其中Ile成为生长限制性因子,在培养基中添加分支氨基酸能明显促进其生长。重组菌培养96 h,发酵液中L-缬氨酸含量低于0.5 g/L,与出发菌株相比,其生成率降低90%。; 罗玉常窦文芳张晓梅史劲松许正宏; 关键词：L-缬氨酸 L-异亮氨酸 L-丝氨酸谷氨酸棒杆菌

钝齿棒杆菌N-乙酰鸟氨酸转氨酶的克隆表达分析及其重组菌的精氨酸发酵被引量：7: 2011年; N-乙酰鸟氨酸转氨酶(EC 2.6.1.11,ACOAT)是钝齿棒杆菌Corynebacterium crenatum精氨酸合成途径中的第4个酶,催化底物N-乙酰谷氨酸半醛生成产物N-乙酰鸟氨酸。为研究N-乙酰鸟氨酸转氨酶在钝齿棒杆菌中精氨酸合成中的作用,考察其酶学性质,对培养基成分和发酵过程工艺条件的优化提高精氨酸产量提供依据。从精氨酸高产菌株钝齿棒杆菌SYPA 5-5染色体扩增获得ACOAT编码基因argD,全长1 176 bp,编码390个氨基酸,在Escherichia coli BL21(DE3)及C.crenatum SYPA中成功表达。采用Ni柱亲和层析纯化后获得的重组蛋白比酶活达108.2 U/g,对其部分酶学性质进行初步研究。构建重组钝齿棒杆菌C.crenatum SYPA(pJCtac-CcargD),加强精氨酸合成途径ACOAT蛋白表达量,对重组菌产精氨酸进行初步发酵分析。多次发酵结果表明重组钝齿棒杆菌与出发菌株相比胞内ACOAT酶活得以增强;重组菌CCD1精氨酸平均产量为39.7 g/L,产酸提高14.7%。结果还表明在重组菌发酵精氨酸的同时不仅ACOAT得到了加强表达,同时还提高了重组菌在发酵过程中菌体自身的氧利用率。; 徐美娟张显饶志明杨娟窦文芳金坚许正宏; 关键词：钝齿棒杆菌 L-精氨酸酶学性质发酵

基于二级结构氨基酸组成识别酸性、中性及碱性酶: 2009年; 本研究系统分析了酸性、碱性和中性酶在二级结构氨基酸组成上的差异。结果发现在形成特定二级结构过程中,酸性酶和碱性酶有着不同的氨基酸使用偏向;同时,在酸性和碱性酶中,中性氨基酸和侧链微小的氨基酸含量明显较高,这可能是它们适应极端pH的普遍机制。基于此,提出了一种提取蛋白质序列特征值的新方法,其10倍交叉验证的精度可达80.3%。与其他常见特征值提取方法相比,其精度提高了9.4%到18.7%不等;而随机森林算法比其他机器学习算法识别精度也高出2.7%到21.8%不等。; 张光亚高嘉强方柏山; 关键词：氨基酸组成酸性酶特征提取

短乳杆菌产NADH氧化酶的发酵条件优化: 在生物催化过程中大量的酶促反应需要辅因子的参与。烟酰胺类辅因子是许多脱氢酶和还原酶的重要辅酶,其保留和再生利用是酶工程领域的重要研究课题。目前,在氧化型辅酶NAD+的酶法再生方面,已见报道的只有为数不多的几个体系,而且还...; 林锡煌方柏山; 文献传递

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