江苏省自然科学基金(BK2008167)
- 作品数：5 被引量：14H指数：2
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- 相关领域：医药卫生更多>>
- Survivin对PC-3细胞微小RNA表达的影响被引量：3
- 2011年
- 目的检测Survivin抑制后PC-3细胞微小RNA（miRNAs）表达谱的变化，探讨Survivin与相关miRNAs之间的关系。方法利用负载Survivin短发夹RNA（shRNA）重组腺病毒（pGSadeno．stirshRNA），体外转染PC-3细胞，96h后，收集细胞提取RNA，检测miRNA表达谱的变化。结果共有650个miRNAs表达信号在雄激素非依赖前列腺癌PC-3细胞中可以被检测到，有9个miRNAs的表达信号水平高于1000，其中的6个miRNAs表达谱同实，呤组比较差异有统计学意义（P〈0．01）。实验组与空白对照组比较有75个miRNAs表达差异有统计学意义（P〈0．01），其中42个表达上调、33个表达下调；阴性对照组与实验组比较有27个miRNAs表达差异有统计学意义（P〈0．01），其中22个表达上调、5个表达下调；实验组与空白对照组及阴性对照组比较均表达上调的miRNAs有15个，表达下调的miRNA有1个。结论抑制PC-3细胞中Survivin的表达对miRNAs表达谱有明显影响，为明确相关miRNAs在PC-3细胞中的作用提供新线索。
- 徐明单玉喜阳东荣薛波新崔勇
- 关键词：MIRNA前列腺癌SURVIVIN癌基因
- 腺病毒载体介导shRNA抑制生存素对PC-3细胞的影响被引量：2
- 2010年
- 目的运用RNA干扰(RNAi)技术抑制雄激素非依赖前列腺癌细胞株(PC-3)中生存素的表达,检测生存素抑制对PC-3细胞的影响。方法构建负载生存素短发夹RNA(shRNA)且携带绿色荧光蛋白(GFP)的重组腺病毒,体外转染PC-3细胞。MTT法监测细胞增殖活性,流式细胞术检测凋亡率,RT-PCR和Western blot分别对生存素mRNA及其蛋白表达进行测定。结果负载生存素shRNA重组腺病毒构建成功;转染96h后,PC-3细胞增殖受到抑制,并可诱导出PC-3细胞凋亡,凋亡率达到(14.43±0.57)%,生存素mRNA及其蛋白的表达强度分别降低了(72.23±1.11)%和(71.75±2.64)%,与阴性对照组及空白对照组比较差异有统计学意义(P<0.01)。结论腺病毒载体介导的生存素shRNA可有效地抑制PC-3细胞中生存素的表达,RNAi结合腺病毒载体系统抑制生存素表达有望成为治疗雄激素非依赖前列腺癌的有效方式之一。
- 徐明单玉喜阳东荣薛波新
- 关键词：前列腺癌生存素腺病毒
- 微小RNA-494过表达与RNA干扰抑制Survivin基因对前列腺癌移植瘤生长的比较被引量：1
- 2013年
- 目的比较过表达微小RNA（microRNA）-494与采用RNA干扰抑制前列腺癌PC．3细胞中Survivin基因的表达，对前列腺癌移植瘤生长的影响。方法将过表达mieroRNA-494的腺病毒载体Ad494及负载Survivin短发卡RNA（shRNA）腺病毒载体Ad-sur分别或联合感染PC-3细胞后，将相应PC-3细胞接种于裸鼠右前肢皮下，建立前列腺癌移植瘤模型。并以磷酸盐缓冲液（PBS）组及空载体组（Ad-GFP）作为对照。动态测量肿瘤体积。55d后处死各组裸鼠，瘤体称重计算抑瘤率。Westernblot检测肿瘤组织中Survivin表达变化。免疫组织化学测定Survivin、B淋巴细胞／白血病-2（bcl-2）、bcl-2相关x蛋白（bax）及半胱氨酰天冬氨酸特异性蛋白酶（Caspase）-3表达变化。结果Ad-sur组、Ad-494组、Ad-sur＋Ad-494组裸鼠前列腺癌移植瘤的生长明显被抑制。第35天时即表现差异。其中Ad-sur＋Ad-494组瘤体积最小，为（40．69±0．69）mm3，Ad-sur、Ad-494组瘤体体积分别为（102．11±5．32）mm3、（99．03±3．50）mm3，3组肿瘤体积均明显小于PBS组（572．72±10．46）mm3、Ad．GFP组（544．85±10．28）mm3（P〈0．05）。但Ad-sur组与Ad_494组间瘤体大小差异无统计学意义（P〉0．05）。55d后，Ad-sur、Ad-494、Ad-sur＋Ad-494组对移植瘤抑制率分别64．62％、65．98％、86．67％，Ad-sur＋Ad-494组具有抑瘤增效的相加作用（Q=0．99）。同对照组比较，实验各组的Survivin基因均表达下降，差异有统计学意义（P〈0．05）。其中，Ad-494组与Ad-sur组间差异无统计学意义（P〉0．05），Ad．sur＋Ad-494组较Ad-494、Ad-sur组更为显著；实验各组中的bax、Caspase-3表达上调，bcl-2表达下调，且Ad-sur＋Ad-494组效果优于Ad-sur、Ad-494组。结论过表达microRNA-494与RNA干扰方法均可抑制前列腺癌裸鼠移植瘤Survivin基因表达，从而抑制移植瘤的生长，且两者联合效果更加显著。
- 孙承文王礼平臧亚晨薛波新单玉喜许立军阳东荣
- 关键词：前列腺癌SURVIVIN基因疗法RNA干扰
- 微小RNA-494通过抑制Survivin诱导前列腺癌PC-3细胞凋亡被引量：9
- 2012年
- 目的观察微小RNA（miRNA）-494对人前列癌Pc-3细胞中Survivin基因的表达抑制及对Pc-3细胞增殖与凋亡的影响。方法TargetScan5．2预测miRNA-494与SurvivinmRNA配对评分为mjrSVR score：-0．4916、PhastConsscore：0．4876；定量聚合酶链反应（qPCR）分析PC-3相对于正常前列腺上皮细胞株RWPE-1中miRNA-494的上下调情况；构建过表达miRNA-94的腺病毒载体，应用逆转录-聚合酶链反应（RT—PCR）、Westernblot、噻唑蓝（MTT）法、流式细胞仪分析分别检测感染前后Survivin基因及蛋白的表达差异、细胞增殖及生长周期和凋亡变化。结果miRNA-494在PC-3中的表达为RWPE-1中的（0．547±0．032）倍；Ad—pre—miRNA-494构建成功；实验组细胞增殖抑制呈现时间依赖性；和对照组比较，72h后实验组Survivin蛋白表达为（21．69±4．62）％，与空载体组比较，差异有统计学意义（P〈0．01），流式细胞仪检测结果显示实验组Pc-3细胞G2／M期阻滞率及细胞凋亡率显著增加。结论miRNA-494通过抑制前列腺癌PC-3细胞中Survivin基因的表达而诱导前列腺癌PC-3凋亡。
- 王礼平阳东荣单玉喜薛波新孙承文
- 关键词：SURVIVIN前列腺癌基因治疗
- 表达生存素相关microRNA-494基因腺病毒载体的构建
- 2012年
- 目的构建表达生存素(survivin)相关microRNA-494基因的重组腺病毒载体。方法应用生物学软件Targetscan 5.2对microRNA-494基因与survivin mRNA作相关性分析。RT-PCR调取目的基因,将其连接线性化后的穿梭质粒载体,联合骨架质粒转染入293细胞后同源重组产生重组腺病毒载体。PCR及测序验证重组质粒,荧光显微镜下观察腺病毒荧光蛋白表达。结果重组腺病毒载体构建成功。结论成功构建了重组腺病毒载体,可用于研究其在前列腺癌PC-3细胞中对survivin基因表达的影响。
- 王礼平阳东荣单玉喜薛波新孙承文
- 关键词：腺病毒载体生存素
