河南省科技攻关计划(0223013800)
- 作品数：21 被引量：173H指数：9
- 相关作者：崔保安陈红英魏战勇赵丽王学斌更多>>
- 相关机构：河南农业大学河南省动物性食品安全重点实验室南京农业大学更多>>
- 发文基金：河南省科技攻关计划国家科技重大专项国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：农业科学生物学更多>>
- 杂交猪白细胞介素-18全基因的克隆与序列分析被引量：2
- 2007年
- 通过RT-PCR方法直接从猪脾脏淋巴细胞中扩增出猪白细胞介素-18(IL-18)全基因的cDNA,其大小为579bp,编码192个氨基酸。与GenBank上已发表猪IL-18序列(ABO10003)进行比较,核苷酸同源性为99.8%,在第550位处(以ATG为1计)由A→G,存在有意义突变。与GenBank上的ABO10003、AF176949、AY262109、NM1997序列进行比较分析,氨基酸同源性分别为99%,98.5%,99.8%和99%。从系统进化树可以看出,河南良杂猪IL-18基因与ABO10003、AY262109亲缘关系最近。河南良杂猪IL-18基因和人及其他动物IL-18基因核苷酸序列进行比较分析,结果显示猪与人、猫、牛、鸡、鸭、海豚、山羊、马、家鼠、老鼠、绵羊的IL-18基因核苷酸同源性分别为83.1%、88.3%、90.7%、26.8%、31.4%、26.3%、90.0%、91.5%、67.7%、65.1%和90.8%。
- 崔保安郑兰兰陈红英方忠意陈瑞亮赵现敏冯向杰
- 关键词：IL-18克隆杂交猪
- 猪细小病毒NJ-1株VP2基因克隆与抗原性分析被引量：5
- 2007年
- 参考Gen Bank公布的NADL-2株序列,设计出1对引物,并利用该引物扩增了猪细小病毒NJ-1株VP2主要抗原基因,将其克隆到pGEM-T Easy载体上,测序获得882 bp核苷酸序列,并推导出其氨基酸序列,共编码294aa,与NADL-2株相应的序列进行比较分析,两者核苷酸同源性为99.2%,氨基酸同源性为99%;应用DNAStar软件对氨基酸的抗原表位进行了预测,共有9个抗原表位,分别在氨基酸N端的第34-40,62-70,88-92,137-157,167-181,189-200,206-219,258-272和280-294区段,此序列具有较好的免疫原性.
- 魏战勇王学斌黄克和金喜新崔保安
- 关键词：猪细小病毒VP2基因抗原性分析
- 海兰鸡白细胞介素18成熟蛋白基因的克隆及在大肠杆菌中的表达被引量：4
- 2008年
- 通过RT-PCR方法从用植物血凝素(PHA)活化60日龄海兰鸡的脾脏淋巴细胞中扩增出海兰鸡白细胞介素18(IL-18)成熟蛋白基因的cDNA,并将其克隆到pGEM-T Easy Vector载体上,DNA序列测定表明,克隆得到的海兰鸡ChIL-18 cDNA基因全序列包括终止密码子在内其编码区大小为510 bp,编码169个氨基酸多肽.将该基因片段克隆到原核表达载体pQE30构建重组质粒pQE30-ChIL-18,转化大肠杆菌M15,并用IPTG诱导.重组菌菌体裂解物SDS-PAGE可检测到相对分子质量为19 000的重组蛋白.
- 赵丽崔保安陈红英宋凌云方忠意郑兰兰
- 关键词：鸡白细胞介素18成熟蛋白克隆原核表达
- 一氧化氮对猪细小病毒体外增殖的影响研究被引量：1
- 2005年
- 本文研究了来源于不同前体物的一氧化氮(Nitro oxide, NO)对猪细小病毒(Porcine parvovirus,PPV)体外增殖的影响。结果表明,NO前体物S 硝基 N 乙酰青霉胺(SNAP)、L 精氨酸(L Arg)均能够有效地诱导 PK 15 细胞产生NO,进而显著地抑制PPV在PK 15 细胞上的复制,其效果与前体物的浓度呈正相关,在浓度为 100μmol/L和200μmol/L时,SNAP产生NO的能力与抑制病毒复制的作用要强于 L Arg。在病毒感染前 6 h和 3 h添加SNAP或L Arg对病毒复制的抑制作用比在病毒感染后3 h 和 6 h添加的作用强,表明 NO的抗病毒作用主要发生在病毒感染的初始阶段。此外,添加具有抑制 L Arg产生 NO作用的 N 硝基 L 精氨酸(L NNA)能抵消 L Arg体外抗病毒的作用。
- 魏战勇崔保安黄克和王学斌金喜新张龙现
- 关键词：一氧化氮猪细小病毒N-硝基-L-精氨酸
- 固始鸡α干扰素基因克隆与序列分析被引量：1
- 2007年
- 参照GenBank上登陆的鸡α干扰素基因序列设计一对引物,应用PCR技术直接从固始鸡肝组织基因组DNA中扩增鸡α干扰素基因.将特异性片段克隆入pGEM-T Easy载体中,转化JM109感受态细胞,经质粒PCR鉴定及酶切鉴定筛选阳性菌株送往大连宝生物公司测序.测序结果表明,固始鸡α干扰素基因为582 bp.用DNAStar软件对克隆的固始鸡α干扰素基因与GenBank发表的其它品种鸡α干扰素基因序列进行同源性分析,核苷酸同源性在97.9%以上,氨基酸同源性在96.9%以上.
- 宋凌云崔保安陈红英方忠意赵丽管倩吕晓丽
- 关键词：固始鸡IFN-Α基因克隆
- 复合RT-PCR检测猪乙脑病毒和猪流感病毒方法的建立被引量：10
- 2008年
- 根据GenBank上已发表的猪乙脑病毒(JEV)的E基因序列和猪流感病毒(SIV)的NP基因序列,设计合成了2对特异引物,分别建立了JEV和SIV的单项RT-PCR诊断方法,通过对扩增条件的筛选,最终成功地建立了JEV和SIV的复合RT-PCR诊断方法,利用一次RT-PCR反应,即可同时扩增JEV的349 bp和SIV 155 bp的特异性片段,而猪瘟病毒(HCV)、猪蓝耳病病毒(PRRSV)、正常细胞(PK-15)核酸扩增结果为阴性,对JEV和SIV的最低检出量分别为100和10 pg的cDNA.该方法适合对JEV和SIV的联合检测和鉴别诊断.
- 吕晓丽崔保安陈红英魏战勇王东方郭小参
- 关键词：复合RT-PCR猪流感病毒
- 不同毒株猪细小病毒VP2基因的克隆与序列分析被引量：5
- 2007年
- 应用PCR扩增了猪细小病毒NJ-1株、NJ-2株、7909株和Vaccine株的VP2基因，分别克隆于pGEM-T Easy载体中，测定其核苷酸序列，并推导出相应的氨基酸序列，对其核苷酸和氨基酸序列进行分析和同源性比较。所测4个序列中，NJ-1株、NJ-2株和7909株序列均为1437bp，共编码479个氨基酸；而Vaccine序列为657bp，比其他毒株缺失780bp，共编码219个氨基酸。将所得4个序列与GenBank中NADL-2株、Kresse株、China株及VR-1株相应的核苷酸及氨基酸进行同源性比较。发现其核苷酸和氨基酸的同源性分别在97．7％～99．9％和97．2％～99．2％之间，具有高度同源性；通过绘制系统进化树可知，分离自国内的China株、NJ-1株、NJ-2株、7909株及Vaccine株亲缘性最为相近。与其他毒株的亲缘关系较远。
- 魏战勇黄克和王学斌崔保安王亚宾金喜新杨明凡
- 关键词：猪细小病毒VP2基因
- 一起猪乙脑的RT-PCR诊断与防制被引量：2
- 2007年
- 2006年9月,新郑市某猪场发生了一种以初产猪流产、死产为特征的疾病。提取流产胎儿的脑RNA,采用猪乙脑病毒E基因的一对特异引物,经反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)扩增,检测猪乙脑病毒为阳性,结合病史和临床症状,诊断为猪乙脑病毒病。对该猪场采取综合防制措施,取得了较好的效果。
- 吕晓丽崔保安陈红英魏战勇赵丽王东方高文明管倩
- 关键词：PCR防制
- 猪白细胞介素-18基因克隆、序列分析及其真核表达载体的构建被引量：1
- 2007年
- 采集6月龄河南良杂猪脾脏,分离淋巴细胞后直接提取总RNA,进行反转录聚合酶链反应(RT-PCR)扩增,扩增产物进行T-A克隆、测序,获得了河南良杂猪IL-18全基因序列。序列测定表明,plL-18全基因核苷酸长度为579bp,编码192个氨基酸。与GenBank上已发表序列ABO10003进行比较,核苷酸同源性为99.8%,在第550位处(以ATG为1计)存在A→G的有意义突变。与从GenBank下载读取的ABO10003、AF176949、AY262109、NM1997序列进行比较分析,氨基酸同源性分别为99%、98.5%和99.8%、99%。将该基因片段克隆到真核表达载体pcDNA3.1,构建重组质粒pcDNA-ILl8m,所获重组质粒经过酶切、测序鉴定,证实含有目的片段,且连接、构建正确,为核酸疫苗的研究应用奠定了基础。
- 郑兰兰崔保安陈红英贾云飞陈瑞亮方忠意李小康赵丽
- 关键词：克隆
- PK15、Vero、BHK、CEF细胞增殖猪伪狂犬病病毒的比较被引量：10
- 2007年
- 为了研究伪狂犬病病毒,从而预防该病的发生。[方法]对PK15、Vero、BHK、CEF 4种细胞增殖猪伪狂犬病病毒后细胞病变进行比较,并对4种细胞增殖的PRV分别进行毒价测定。[结果]4种细胞增殖PRV毒价分别为:PK15细胞107.15TCID50/ml;BHK细胞107.00TCID50/ml;Vero细胞106.96TCID50/ml;CEF细胞106.70TCID50/ml。[结论]PRV毒株在不同细胞上增殖CPE表现不同,毒价也存在差异。
- 王岩杨明凡崔保安张素梅王学斌
- 关键词：猪伪狂犬病毒
