河南省科技成果转化计划项目(092201110008) 作品数:4 被引量:1 H指数:1 相关作者: 张晓根 乔宏兴 边传周 宁豫昌 郑鸣 更多>> 相关机构: 郑州牧业工程高等专科学校 更多>> 发文基金: 河南省科技成果转化计划项目 更多>> 相关领域: 农业科学 生物学 更多>>
抗猪圆环病毒2型Cap蛋白单克隆抗体杂交瘤细胞株的建立 被引量:1 2011年 本试验旨在为PCV2的快速诊断提供技术手段。用纯化的原核表达的重组猪圆环病毒2型(PCV2)Cap蛋白(pET-Cap)免疫BALB/c小鼠,通过杂交瘤技术获得了2株能够稳定分泌抗pET-Cap抗体的杂交瘤细胞株3D5和5C5。经建立的间接ELISA试验检测3D5、5C5细胞上清效价分别为1∶2048、1∶1024;诱生腹水的效价分别为1∶204800、1∶102400,杂交瘤染色体数目分别为95条、96条。Western blotting结果表明,2株单抗能与病毒发生特异性反应。传代培养20代,3个月内复苏冻存3次,3D5、5C5能够稳定分泌抗体。 乔宏兴 边传周 张晓根关键词:猪圆环病毒2型 重组CAP蛋白 单克隆抗体 猪圆环病毒ZZ株ORF2基因的克隆及原核表达 2012年 对所分离鉴定的猪圆环病毒2型(PCV-2)ZZ株,参照GenBank中PCV-2全基因序列,设计1对特异性引物,利用PCR扩增出PCV-2ORF2片段,原核表达载体pET-32a(+)获得重组质粒pET-ORF2,IPTG进行诱导表述,并进行Western blot分析。结果表明,PCR扩增产物长度为702bp,大小与预期的一致,成功构建重组质粒,经IPTG诱导成功获得分子质量约为30ku的表达蛋白,该蛋白具有很好的免疫原性,为进一步研制PCV-2疫苗提供依据。 乔宏兴 张晓根 边传周 宁豫昌关键词:ORF2基因 原核表达 利用反向PCR克隆猪圆环病毒2型全基因组 2011年 参照GenBank数据库中PCV-2的ORF1基因序列,设计1对特异性引物和1对为反向引物,利用常规PCR扩增ORF1基因片段,再利用反向PCR扩增ORF1基因片段侧翼序列,将2次PCR产物克隆测序,经BLAST分析确认为PCV-2基因组序列,利用Vector NTI 8.0软件将两个序列进行拼接获得PCV-2全基因组。结果表明,克隆到的PCV-2全基因组长为1767bp。 郑鸣 王静 郑宝亮 张晓根关键词:猪圆环病毒2型 基因组 反向PCR 猪圆环病毒2型ZZ株全基因组的分子克隆 2012年 为了研究PCV-2的致病机理,试验参照GenBank中PCV-2全基因序列设计1对特异性引物,从河南省某猪场疑似感染断奶仔猪多系统衰竭综合征猪的病料DNA中利用PCR扩增出PCV2全基因组片段。结果表明:扩增基因长度为1 767 bp,经酶切鉴定分子构建正确;将克隆到的全基因组环化后,质粒转染PK-15细胞,盲传3代,免疫荧光检测证实其具有感染性。 乔宏兴 张晓根 边传周 宁豫昌关键词:猪圆环病毒2型 基因组 PCR