国家重点基础研究发展计划(2010CB530202)
- 作品数：11 被引量：36H指数：3
- 相关作者：吴清民王真于圣青韩先干胡青海更多>>
- 相关机构：中国农业大学中国农业科学院上海兽医研究所北京农学院更多>>
- 发文基金：国家重点基础研究发展计划国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：农业科学更多>>
- 动物布鲁氏菌病防控技术及策略的探讨
- <正>布鲁氏菌病(简称'布病')是由布鲁氏菌引起的动物源性人畜共患病,主要侵害人以及牛、羊、猪、犬等动物。因严重损害人畜健康、阻碍社会经济发展、频繁诱发公共卫生安全事件并引起社会恐慌,布鲁氏菌在国外被列为'B类生物恐怖战...
- 吴清民
- 文献传递
- 动物布鲁氏菌病疫苗的来历及亚单位疫苗的研究概况被引量：13
- 2014年
- 布鲁氏菌病是一种严重危害人和动物健康的人畜共患病,人群感染主要来源于感染的动物及被污染的畜产品,目前疫苗免疫仍是控制动物布鲁氏菌病的主要措施。现有国际参考疫苗主要有牛种疫苗株S19和羊种疫苗株Rev.1,这些疫苗为动物群布鲁氏菌病控制提供重要保障的同时也存在关键的技术瓶颈问题,如安全性差,接种动物出现流产;血清抗体体内持续时间较长,干扰常规诊断等。随着布鲁氏菌基因组测序工作的相继完成及DNA重组技术的发展,新型布鲁氏菌病疫苗的开发成为研究的热点。亚单位疫苗本着其较高的安全性和有效性,在动物群布鲁氏菌病控制过程中具有较大的应用前景。笔者综述了布鲁氏菌病疫苗的发展史,并对布鲁氏菌病亚单位疫苗的研究进展进行概述。
- 王真HAN Gilsu吴清民
- 关键词：布鲁氏菌病疫苗亚单位疫苗
- 寡肽转运酶OppC对羊种布鲁氏菌致病性的影响
- <正>布鲁氏菌病(简称'布病')是由多种布鲁氏菌引起的,临床上未孕母畜感染通常缺乏明显的临床症状,但怀孕母畜感染则会诱发流产、不孕、胎盘炎和胎衣不下,且胎衣、阴道分泌物及流产胎儿成为潜在传染源[1],这也正是牛群布病感染...
- 王真王根立吴同垒吕艳丽吴清民
- 文献传递
- 流产布鲁氏菌ATP/GTP结合蛋白基因缺失株保护力及安全性研究被引量：1
- 2013年
- 为筛选具有诊断标记的布鲁氏菌病疫苗菌株,本研究利用同源重组和负筛选技术,构建了流产布鲁氏菌株2 308的ATP/GTP结合蛋白基因缺失株BDA14,并通过菌落染色和凝集特性,培养传代,小鼠接种试验及怀孕羊攻毒试验对其生物学特性、安全性和免疫效果进行了研究。结果表明:1)缺失菌株BDA14为粗糙型菌株,体外培养传代表型不发生改变;2)缺失菌株BDA14在小鼠体内的毒力与亲本菌株2308相比显著降低,且不产生针对OPS(O-antigen)的抗体;3)缺失菌株BDA14可提供与疫苗株RB51相当的攻毒保护力;4)缺失菌株BDA14对怀孕靶动物的安全性显著提高,接种怀孕羊不引起流产。说明ATP/GTP结合蛋白基因缺失株BDA14作为安全、有效且能鉴别诊断的疫苗菌株有明显优势。
- 王真欧齐星王双山吕艳丽吴清民
- 关键词：流产布鲁氏菌ATP免疫效力
- 布鲁氏菌病检测技术及检测用靶蛋白抗原筛选的概况被引量：1
- 2014年
- 布鲁氏菌病是一种重要的人畜共患病,也是引起动物繁殖障碍的主要疾病之一。近年来,我国人、畜间布鲁氏菌病呈高发态势,严重威胁畜牧业发展和人群身体健康。及时准确诊断对控制和净化布鲁氏菌病具有重要意义。本研究从病原学和血清学两方面对布鲁氏菌病的现有诊断技术进行概述,同时指出布鲁氏菌免疫原性蛋白抗原的筛选和研究,对布病的控制和净化意义重大。
- 王真鲁琳吴清民
- 关键词：布鲁氏菌病细菌学血清学分子生物学
- 布氏杆菌外膜蛋白D15的克隆表达及生物学活性分析
- 本实验通过PCR技术扩增牛型布氏杆菌外膜蛋白基因D15,将D15全长克隆至表达载体pCold TF中,构建重组表达质粒pCold TF-D15,转化大肠杆菌BL21（DE3）后,在IPTG诱导下表达大小约为130Ku的融...
- 孙晓庆韩先干童永亮宋军丁铲胡青海于圣青
- 关键词：外膜蛋白生物学特性
- 文献传递
- 布鲁菌BMEI1829基因的原核表达、蛋白纯化及动物免疫试验被引量：3
- 2010年
- 利用PSORTb及CELLO生物学软件对布鲁菌16M菌株基因组序列进行分析,预测其外膜蛋白基因序列;选取BMEI1829基因进行PCR扩增并与原核表达载体pET32a(+)连接,转入E.coliBL21(DE3)感受态细胞;IPTG诱导蛋白表达,SDS-PAGE分析及Western blot鉴定目的蛋白的表达;经His-TrapTMHP纯化,免疫Balb/c小鼠,间接ELISA法检测特异性抗体。结果表明,BMEI1829蛋白在原核表达系统中成功表达,纯化后蛋白免疫Balb/c小鼠可产生特异性抗体,抗体亚型分布以IgG1、IgG2b为主,为进一步研究其功能奠定了基础。
- 赵晓燕朱亮姜德玉高啸段越强王希良李培锋
- 关键词：布鲁菌原核表达
- 流产布鲁氏菌疫苗候选株RB6生物学特性研究被引量：5
- 2012年
- 为了开发布鲁氏菌病新型标记疫苗,本研究对流产布鲁氏菌基因缺失株RB6的培养特性、染色特性、凝集特性、稳定性及小鼠体内毒力和免疫保护力进行了系统鉴定,旨在阐明该菌株具备的生物学特性。通过对亲本菌株和RB6的比较,发现固体培养基上RB6菌株单菌落可被结晶紫染成紫色,RB6菌株液体培养物可与0.1%吖啶黄染料以及抗布鲁氏菌粗糙型抗体发生凝集反应,证明该菌株为粗糙型。将RB6菌株在体外连续传代培养20次和牛体内连续5次继代,检测结果证明其表型未发生变化,说明该菌株遗传稳定性良好。通过小鼠体内试验发现该菌株毒力显著降低,并对流产布鲁氏菌强毒菌株2308攻毒的免疫保护力与现有疫苗A19接近。本研究结果表明,流产布鲁氏菌基因缺失株RB6为粗糙型菌株,毒力较低、安全性高、遗传性状稳定,并具有良好的免疫保护效力,有望开发成为动物布鲁氏菌病粗糙型标记疫苗。
- 王真吕艳丽吴清民
- 关键词：流产布鲁氏菌稳定性毒力免疫效力
- 牛种布鲁氏菌RpoE2蛋白部分生物学特性研究被引量：2
- 2017年
- 为探讨牛种布鲁氏菌sigma因子RpoE2的功能,采用酵母双杂交技术对RpoE2蛋白与anti-sigma因子之间的互作进行研究;通过环境应激试验评价了rpoE2缺失株对强氧化环境、酸性pH、杀菌性阳离子多肽、铁缺乏环境的耐受能力;通过比较亲本菌株和缺失株在巨噬细胞感染模型和小鼠感染模型中的生存能力,研究了rpoE2基因是否与牛种布鲁氏菌毒力相关。结果显示:牛种布鲁氏菌的RpoE2蛋白可以与anti-sigma因子相互作用,牛种布鲁氏菌rpoE2基因缺失后,对各种应激环境的耐受能力均无影响,并且巨噬细胞和小鼠感染模型中毒力均不降低。牛种布鲁氏菌的RpoE2蛋白是一个ECF16家族的sigma因子,并且其与布鲁氏菌的毒力无关。
- 董浩董礼华彭小薇王宁曲萍孙雨赵柏林胡冬梅石慧王晓英宋晓晖吴清民
- 关键词：毒力环境应激
- 染色质免疫共沉淀技术对羊种布鲁氏菌转录调控因子MucR靶基因的筛选被引量：3
- 2016年
- 为研究羊种布鲁氏菌转录调控因子MucR蛋白的毒力相关机制,对染色质免疫共沉淀技术进行了优化。构建了表达MucRFlag融合蛋白的羊种布鲁氏菌菌株,并用商品化抗Flag标签抗体对MucRFlag蛋白进行富集,从而替代MucR蛋白抗体的制备过程。通过该染色质免疫共沉淀方法对羊种布鲁氏菌MucR蛋白的结合靶点基因进行了鉴定,结果显示:通过使用该方法鉴定出羊种布鲁氏菌MucR蛋白可以结合到BMEI0430和BMEI1364(mucR基因)的启动子序列上。结果表明优化的染色质免疫共沉淀技术适用布鲁氏菌转录调控因子结合靶点的研究。
- 董浩彭小薇王晓英孙雨宋晓晖吴清民
- 关键词：布鲁氏菌转录调控因子
