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国家自然科学基金(30772360)

作品数：14 被引量：59H指数：6
相关作者：周建华张瑜卢宏柱杨凤杰吕倩影更多>>
相关机构：华中科技大学长江大学长江大学附属第一医院更多>>
发文基金：国家自然科学基金国家教育部博士点基金博士科研启动基金更多>>
相关领域：医药卫生更多>>

文献类型

  • 14篇中文期刊文章

领域

  • 14篇医药卫生

主题

  • 6篇乙型肝炎病毒
  • 6篇细胞
  • 6篇基因
  • 6篇肝炎病毒
  • 5篇足细胞
  • 4篇蛋白
  • 4篇乙型
  • 4篇乙型肝炎
  • 4篇肾小球
  • 4篇系膜
  • 4篇系膜细胞
  • 4篇肝炎
  • 4篇病毒
  • 3篇乙型肝炎病毒...
  • 3篇肿瘤坏死因子
  • 3篇坏死因子
  • 3篇补体
  • 2篇调节蛋白
  • 2篇乙型肝炎病毒...
  • 2篇增殖

机构

  • 12篇华中科技大学
  • 2篇长江大学
  • 1篇北京地坛医院
  • 1篇长江大学附属...

作者

  • 12篇周建华
  • 6篇张瑜
  • 5篇卢宏柱
  • 2篇吕倩影
  • 2篇杨凤杰
  • 1篇陈瑜
  • 1篇成军
  • 1篇樊启红
  • 1篇吴衡生
  • 1篇尹晓玲
  • 1篇朱慧
  • 1篇洪源
  • 1篇方峰
  • 1篇刘丹

传媒

  • 4篇中华肾脏病杂...
  • 3篇华中科技大学...
  • 2篇中华儿科杂志
  • 1篇实用儿科临床...
  • 1篇广东医学
  • 1篇重庆医学
  • 1篇Journa...
  • 1篇Asian ...

年份

  • 2篇2014
  • 1篇2013
  • 1篇2011
  • 2篇2010
  • 3篇2009
  • 4篇2008
  • 1篇2007
共 14 条 记 录，以下是 1-10
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排序方式：
HBV X Gene Transfection Upregulates IL-1β and IL-6 Gene Expression and Induces Rat Glomerular Mesangial Cell Proliferation被引量：11
2008年
The X gene of HBV encodes a 17-kD protein,termed HBx,which has been shown to function as a transcriptional trans-activator of a variety of viral and cellular promoter/enhancer elements.The aim of this study was to investigate the effect of HBx on gene expression of interleukin(IL)-1β and IL-6,and proliferation of rat mesangial cells in vitro.The X gene of HBV was amplified by PCR assay,and inserted into the eukaryotic expression vector pCI-neo.The structure of recombinant pCI-neo-X plasmid was proved by restrict endonuclease digestion and sequencing analysis.pCI-neo-X was transfected into cultured rat mesangial cell line in vitro via liposome.HBx expression in transfected mesangial cells was detected by Western blot.The IL-1β and IL-6 mRNA expression in those cells was assayed by semiquantitative RT-PCR.Mesangial cell proliferation was tested by MTT.The results showed that HBx was obviously expressed in cultured mesangial cell line at 36th and 48th h after transfection.The expression of IL-1β and IL-6 mRNA was simultaneously increased.The cell proliferation was also obvious at the same time.It was concluded that HBx gene transfection could induce IL-1β and IL-6 gene expression and mesangial cell proliferation.HBx may play a critical role in mesangial cell proliferation through upregulation of the IL-1β and IL-6 gene expression.
卢宏柱周建华
关键词：HBV白介素-1Β白介素-6X基因
乙型肝炎病毒相关性膜性肾病肾组织细胞凋亡的意义被引量：2
2008年
目的观察儿童乙型肝炎病毒相关性膜性肾病(HBV-MN)肾组织的细胞凋亡情况,以探讨其在HBV-MN发病中的意义。方法采用活性Caspase-3免疫组织化学染色和核糖核苷酸末端转移酶介导的缺口末端标记法(TUNEL)观察HBV-MN患儿肾组织及正常肾组织中的凋亡现象,并分析其与肾组织病理改变、尿蛋白及临床免疫学指标等因素的关系。结果正常肾组织中,Caspase-3仅表达于少数肾小管上皮细胞胞质;在HBV-MN患儿的肾小球和肾小管-间质区,Caspase-3不仅表达于细胞质尚可见于胞核区(即活性Caspase-3),且肾小球和肾小管-间质区活性Caspase-3的表达(凋亡指数)与TUNEL指数均显著相关。HBV-MN患儿肾组织的凋亡指数与肾脏病变病理分期显著相关。肾小球凋亡指数与蛋白尿程度相关,而与HBsAg的沉积强度、血清补体C3水平无相关性;肾小管-间质区凋亡指数与蛋白尿程度、尿视黄醇结合蛋白水平显著相关。结论HBV-MN患儿肾小球及肾小管-间质区均存在依赖Caspase-3的肾脏固有细胞凋亡,活性Caspase-3的表达与肾脏病变严重程度、临床蛋白尿水平及尿视黄醇结合蛋白(RBP)水平相关。肾脏固有细胞凋亡可能在HBV-MN的病理过程中发挥重要作用。
张瑜周建华
关键词：细胞凋亡CASPASE-3
HBV X蛋白对大鼠肾小球系膜细胞增殖及促炎性细胞因子表达的影响被引量：6
2011年
目的探讨HBV X基因表达的蛋白(HBVx)对体外培养的大鼠系膜细胞表达肿瘤坏死因子(TNF)-α、白介素(IL)-1β、IL-6及细胞增殖的影响。方法构建含HBV X基因的真核表达载体pCI-neo-X,采用脂质体法将pCI-neo-X转染给体外培养的大鼠系膜细胞,Western blot测定HBx的表达,以半定量逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)测定体外培养大鼠系膜细胞TNF-α、IL-1β、IL-6 mRNA表达,酶联免疫吸附试验(ELISA)测定培养上清液中TNF-α、IL-1β、IL-6水平,四甲基偶氮唑盐(MTT)法测定细胞增殖。结果转染pCI-neo-X的系膜细胞(MC+pCI-neo-X组),HBx在36、48 h表达明显。同时TNF-α、IL-1β、IL-6 mRNA表达量较未转染和转染空载体组明显增高。上清液中TNF-α、IL-1β、IL-6水平在MC+pCI-neo-X组较未转染和转染空载体组均增高,差异均有统计学意义(P<0.05);细胞增殖在36、48 h MC+pCI-neo-X组最明显,差异有统计学意义(P<0.05)。结论 HBx可诱导大鼠系膜细胞高表达TNF-α、IL-1β和IL-6,促进系膜细胞增殖。HBx对系膜细胞的增殖作用可能与TNF-α、IL-1β、IL-6的高表达有关。
卢宏柱刘丹周建华
关键词：肿瘤坏死因子Α白细胞介素4肾小球系膜细胞
Ad-HBx的构建及在肾小球足细胞系的表达被引量：3
2009年
目的构建携带HBx基因的非复制型重组腺病毒载体,并感染小鼠肾小球足细胞株MPC5,使目的基因HBx在该细胞株有效表达。方法由质粒PCI-neo-HBx中扩增目的基因HBx,插入至pShuttle-CMV(-)穿梭质粒中,而后再与pAdxsi质粒酶切连接为重组腺病毒质粒pAd-HBx,经酶切及测序鉴定正确后,以PacⅠ酶切线性化转染293细胞进行包装扩增得到Ad-HBx。以Ad-HBx感染MPC5细胞,Western blot检测感染后目的蛋白HBx的表达。结果重组腺病毒载体经限制性内切酶酶切、电泳和基因测序鉴定,证实Ad-HBx构建成功;当MOI=50时,MPC5细胞即可100%被重组腺病毒感染,且持续至感染后72 h仍有较强水平的表达;感染Ad-HBx的MPC5细胞可稳定表达HBx蛋白。结论成功构建了Ad-HBx,并能在MPC5细胞中稳定表达,为进一步研究HBx基因在乙型肝炎病毒相关性肾炎发病中的作用奠定了基础。
张瑜周建华
关键词：HBX基因腺病毒载体足细胞
乙型肝炎病毒X蛋白抑制足细胞增殖被引量：16
2010年
目的通过构建复制缺陷型腺病毒载体将乙型肝炎病毒（HBV）X基因（即HBx基因）导入足细胞株，探讨HBx蛋白对足细胞增殖的影响及其分子机制。方法采用pAdxsi系统构建携带HBx基因的复制缺陷型腺病毒载体。以瑞氏-吉姆萨染色观察细胞形态。以MTF检测和羧基荧光素二乙酸盐琥珀酰亚胺酯（CFDA—SE）荧光染料示踪细胞增殖的方法，对细胞增殖进行定量评估。采用流式细胞仪检测细胞周期分布。采用cyelin／DNA双参数流式细胞术和Western印迹检测细胞周期调控蛋白的表达。结果PCR和基因测序鉴定证实，Ad，HBx构建成功。Western印迹显示，足细胞感染Ad．HBx（感染复数MOI=100）后第3、5天均可表达相对分子质量为17000的HBx蛋白，表明HBx可在足细胞株稳定表达。细胞形态学观察最示腺病毒感染后第5天Ad．HBx组细胞呈现明显的有丝分裂障碍特征，双核、多核和多形核细胞比例明显增加。MTF检测结果显示空白组和Ad组足细胞的生长曲线基本吻合，而Ad．HBx组细胞的生长曲线自第4天起较前两组偏低，至第5天时该差异具有统计学意义（P〈0．01）；同时，CFDA—SE细胞增殖示踪实验也证实，于腺病毒感染后第3天Ad．HBx组细胞的增殖速度已明显低于空白组和Ad组（增殖指数11．2比15．4、13．3），且随时间推移进一步减慢（增殖指数32．5比61．6、54．0），表明HBx可显著抑制足细胞增殖。细胞周期分析和细胞周期调控蛋白检测的结果显示，HBx可诱导足细胞周期G2／M阻滞，同时伴有cyclinB1、p21的表达上调及cyclinA的下调。结论乙肝病毒基因编码的HBx蛋白可使eyclinB1降解受阻，同时下调cyolinA和上调细胞周期负凋蛋白p21的表达，导致细胞周期阻滞于G2／M期，从而抑制足细胞增殖。这可能是乙型肝炎病毒相关性肾炎患者肾小球足细胞缺失，肾脏病变慢性进展的重要机制之一。
张瑜周建华
关键词：肝炎病毒乙型足细胞乙型肝炎病毒X蛋白
乙型肝炎病毒X基因对大鼠肾小球系膜细胞增殖和肿瘤坏死因子α表达的影响被引量：5
2008年
目的探讨乙型肝炎病毒(HBV)X基因表达的蛋白HBx对体外培养的大鼠肾小球系膜细胞(GMC)表达肿瘤坏死因子α(TNF-α)及细胞增殖的影响。方法扩增HBVX基因,与pCI-neo载体连接,构建pCI-neo-X真核表达载体。采用脂质体法将其转染大鼠GMC,用Western blot法检测HBx的表达;以半定量RT-PCR测定体外培养大鼠GMCTNF-α mRNA的表达;采用ELISA法测定培养上清液中TNF-α的含量;MTT法测定细胞增殖。结果HBx在转染pCI-neo-X的GMC中表达,转染后36、48h HBx表达明显。转染pCI-neo-X组GMC TNF-α mRNA的表达明显高于未转染和空载体转染组。细胞转染pCI-neo-X后培养36、48h,上清液中TNF-α浓度分别为(185.3±70.7)、(140.3±42.1)pg/ml,而未转染组分别为(41.7±10.3)、(43.7±10.6)pg/ml,空载体转染组分别为(44.l±10.1)、(33.3±8.6)pg/ml,均明显低于转染pCI-neo-X组(均P<0.05)。转染pCI-neo-X后可诱导GMC出现增生反应,且在转染后36、48h最明显,与未转染和空载体转染组差异均有显著性意义(P<0.05)。结论HBx可诱导大鼠GMC增生,并在基因和蛋白水平上调GMC TNF-α表达。HBx对GMC的增殖作用可能与其诱导TNF-α的高表达有关。
卢宏柱周建华
关键词：肿瘤坏死因子-Α乙型肝炎病毒X基因系膜细胞
乙型肝炎病毒X基因转染大鼠系膜细胞对细胞增殖及IL-1β,IL-6表达的影响被引量：1
2009年
目的探讨乙型肝炎病毒(HBV)X基因表达的蛋白(HBx)对体外培养的大鼠系膜细胞表达白细胞介素(IL)-1β、IL-6及细胞增殖的影响。方法将HBVX基因扩增,与PCI-neo载体连接,构成PCI-neo-X真核表达载体。采用脂质体法将PCI-neo-X转染给大鼠系膜细胞,Western blot测定HBx的表达;以半定量反转录PCR测定体外培养大鼠系膜细胞IL-1β mRNA、IL-6 mRNA表达;MTT法测定细胞增殖。结果转染PCI-neo-X的系膜细胞,HBx在36和48h表达明显。同时IL-1β mRNA、IL-6 mRNA表达量较未转染和转染空载体者明显增高。细胞增殖在36和48h最明显,与未转染和转染空载体组有显著差异。结论HBx可诱导大鼠系膜细胞高表达IL-1β mRNA和IL-6 mRNA,促进系膜细胞增殖。HBx对系膜细胞的增殖作用可能与IL-1β、IL-6的高表达有关。
卢宏柱樊启红周建华
关键词：白细胞介素-1Β乙型肝炎病毒X基因系膜细胞
雷帕霉素通过激活自噬减轻亚溶量补体诱导的足细胞黏附损伤
2014年
目的 观察雷帕霉素对亚溶量补体C5b-9（sublytic C5b-9,sC5b-9）所致足细胞黏附损伤的影响,并探讨细胞自噬在其中的作用.方法 建立sC5b-9攻击足细胞体外模型,采用透射电镜观察足细胞自噬泡形成,罗丹明标记鬼笔环肽（rhodamine phalloidin）染色后激光共聚焦显微镜下观察细胞骨架蛋白F-actin的分布及细胞形态,细胞黏附实验评价足细胞黏附能力,Western印迹检测微管相关蛋白1轻链3（microtubule-associated protein l light chain 3,LC3）Ⅰ型（LC3-Ⅰ）和Ⅱ型（LC3-Ⅱ）的表达,流式细胞术检测整联蛋白α3的表达.结果 （1）成功建立sC5b-9攻击足细胞体外模型,将细胞溶破率≤5％定义为亚溶量攻击;（2）透射电镜和自噬标志LC3-Ⅱ的检测均显示造模后48 h足细胞的自噬水平明显增强;（3）3-甲基腺嘌呤抑制自噬可明显加剧sC5b-9所致的足细胞黏附能力下降及细胞骨架病变,但对整联蛋白α3的表达无明显影响;（4）雷帕霉素干预可显著改善sC5b-9所致的足细胞黏附能力受损及细胞骨架破坏;（5）雷帕霉素明显增强sC5b-9所诱导的足细胞自噬.结论 雷帕霉素可通过增强自噬的途径直接改善亚溶量补体所诱导的足细胞黏附损伤.
吕倩影周建华陈瑜杨凤杰蒲金赟张瑜
关键词：自噬足细胞西罗莫司
足细胞自噬在被动Heymann肾炎发病中的作用被引量：9
2014年
目的通过膜性肾病经典的动物模型被动Heymann肾炎（PHN），探讨足细胞自噬在膜性肾病病变过程中的作用，以及自噬激活可能的细胞内机制。方法SPF级健康雄性SD大鼠按随机数字表法分为5组即对照组、PHN2d组、PHN4d组、PHN7d组、PHN21d组，建立大鼠PHN模型。采用透射电镜观察足细胞形态和自噬泡，Weibel-Gomez点计数法计数单个肾小球足细胞数量，免疫组织化学染色检测肾小球内膜攻击复合物C5b-9的沉积与半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶（caspase）-3的表达，原位缺口末端标记（TUNEL）法检测肾小球内细胞凋亡，Western印迹法检测肾小球自噬相关蛋白微管相关蛋白1轻链3（microtubule．associatedprotein1lightchain3，LC3）、葡萄糖调节蛋白（GRP）78、磷酸化蛋白激酶R样内质网激酶（phosphorylatedproteinkinaseR-likeERkinase，P．PERK）、磷酸化C．Jun氨基末端激酶（phosphorylatede．iunaminoterminalkinase，P-JNK）、活化转录因子6q（activatingtranscriptionfactor6a，ATF6ct）的表达。结果（1）造模后第4天起即可在肾小球内观察到C5b．9沿基底膜呈线状沉积。同时，透射电镜下可见上皮下少许颗粒状电子致密物沉积及足突融合，病变随时间呈加重趋势，至第21天可见典型膜性肾病改变。此外，尿蛋白定量结果显示，造模第3天起尿蛋白量即有明显升高，至第21天时可高达（50．6±6．0）mg／24h。（2）造模后第21天单位肾小球足细胞绝对数目较对照组显著下降（P〈0．05）。（3）caspase-3表达和TUNEL染色结果一致显示，造模后第21天肾小球内可检出凋亡的足细胞。（4）透射电镜和自噬标志LC3Ⅱ的检测结果均显示，造模后第7天和第21天足细胞的自噬水平均显著升高，但第21天LC3Ⅱ的表达较第7天有所回落。（5）造模后第2天即可检出GRP78高表达，至第7天时显著升高，而病变后期（第21天）又有所回落；同时，�
杨凤杰周建华吕倩影蒲金赟张瑜
关键词：自噬足细胞肾小球肾炎膜性内质网应激
乙型肝炎病毒X蛋白通过激活细胞外蛋白调节激酶转导机制上调大鼠系膜细胞肿瘤坏死因子-α的表达被引量：6
2009年
目的探讨乙型肝炎病毒(HBV)X基因编码的蛋白(HBx)导致大鼠系膜细胞(MC)增殖及TNF-α高表达的细胞外蛋白调节激酶(ERK)1/2信号转导机制。方法PCR扩增HBVX基因,然后与真核表达载体PCI-neo质粒连接,构成含有HBVX基因的质粒(PCI-neo-X),采用限制性内切酶法及测序证实。采用脂质体法将PCI-neo-X转染入体外培养的大鼠MC,采用抑制剂U0126阻断ERK1/2通路,观察培养细胞增殖、TNF-α及其mRNA表达,以不加抑制剂作为对照。Western blot检测HBx、ERK1/2及磷酸化ERK(p-ERK)1/2表达。半定量RT-PCR检测TNF-α mRNA表达,酶联免疫吸附法(ELISA)检测培养上清液TNF-α表达。甲基噻唑基四唑(MTT)法检测MC增殖。结果无论是否加入U0126,在转染PCI-neo-X36、48h后,肾小球系膜细胞(GMC)明显表达HBx,细胞TNF-α mRNA的表达加入U0126较不加入U0126显著下降。不加入U0126组上清液TNF-α水平在转染后36h和48h分别为(189.0±18.1)ng/L和(172.3±24.3)ng/L;加入U0126组上清液中TNF-α水平在转染后36、48h分别为(65.6±11.6)ng/L和(84.0±24.6)ng/L,组间不同时间点比较均有显著性差异(Pa<0.05)。加入U0126后MC增殖也显著下降。结论HBx可促使MC增殖,细胞TNF-αmRNA及上清液TNF-α表达均增高,这一作用可能是通过HBx激活ERK1/2信号通路实现的。
卢宏柱周建华
关键词：乙型肝炎病毒X基因肿瘤坏死因子-Α
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