重庆市卫生局科研项目(2010-2-162)
- 作品数：1 被引量：0H指数：0
- 相关作者：熊倬董晓静张莹孙培文更多>>
- 相关机构：重庆医科大学附属第二医院更多>>
- 发文基金：重庆市自然科学基金重庆市卫生局科研项目重庆市教委科研基金更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 运用纳米板转导siRNA抑制HPV基因表达的量效学探究
- 2013年
- Hela细胞是人宫颈腺癌细胞株,人乳头状瘤病毒(HPV)18表达阳性。本实验用纳米板转导靶向于HPV18E7mRNA的siRNA进入Hela细胞裸鼠皮下移植瘤(宫颈癌动物模型),分析siRNA对HPV基因表达的抑制作用,进而探讨纳米板在动物水平上转导siRNA的优越性及转导的最佳作用时间和浓度。合成针对HPV18E7mRNA的siRNA(简称siE7),细胞实验检测siE7转录后的沉默效果。采用纳米板转导siE7与GenEscort TMⅢ(转染试剂)复合物进入Hela细胞裸鼠皮下移植瘤,逆转录PCR(RT-PCR)、Western blot分别检测作用0、24、48、72h后瘤体组织HPV18E7mRNA及蛋白的表达变化,分析纳米板作用的最佳时间。不同浓度siE7与GenEscort TMⅢ体外孵育复合物,分别用纳米板及腹腔注射转导进入Hela细胞裸鼠皮下移植瘤,RT-PCR、Western blot分别检测72h后瘤体组织HPV18E7mRNA及蛋白的表达变化,选择纳米板最佳作用浓度,对照腹腔注射组分析纳米板转导siRNA在动物水平上的优越性。体外实验结果证明siE7能有效沉默HPV18E7mRNA表达并促进Hela细胞凋亡。动物实验结果证明,纳米板转导的siE7能有效沉默HPV18E7mRNA,并抑制HPV18E7蛋白表达,转导siE7的最佳作用时间及浓度分别是72h、2μmol/L。与腹腔注射组比较,纳米板转导siRNA在动物水平上有明显的优越性。因此,纳米板能有效转导siRNA进入裸鼠皮下移植瘤组织,并且转导进入的siRNA可有效抑制HPV基因表达。
- 熊倬董晓静孙培文张莹
- 关键词：HELA细胞人乳头状瘤病毒
