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国家自然科学基金(81173486): 作品数：18 被引量：64H指数：6; 相关作者：陈随清董诚明苏秀红乔毅琳曹利华更多>>; 相关机构：河南中医药大学新乡医学院北京中医药大学更多>>; 发文基金：国家自然科学基金国家科技重大专项河南省教育厅科学技术研究重点项目更多>>; 相关领域：医药卫生生物学农业科学更多>>

冬凌草HMGS基因的克隆与表达分析被引量：10: 2016年; 羟甲基戊二酰辅酶A合酶(3-Hydroxy-3-methylglutaryl-coenzyme A synthase,HMGS)是甲羟戊酸途径(MVA)中的第一个催化酶。根据冬凌草转录组数据库中HMGS基因序列设计特异引物,采用RT-PCR技术克隆冬凌草IrHMGS基因cDNA全长,并对其序列进行生物信息学分析,通过荧光定量PCR的方法分析其组织表达特性。IrHMGS基因cDNA全长1 382bp,编码460个氨基酸,序列分析结果表明该基因编码的氨基酸序列含有羟甲基戊二酰辅酶A合成酶N末端、C末端等保守结构域。荧光定量PCR表明,IrHMGS在冬凌草组培苗叶和根中的表达量显著高于在组培苗花、茎和愈伤组织中的表达量。本研究为后续深入研究IrHMGS在冬凌草二萜类物质合成途径中的功能奠定了基础。; 朱畇昊爼梦航苏秀红董诚明陈随清; 关键词：冬凌草生物信息学分析荧光定量PCR

不同产地冬凌草生态特征比较被引量：4: 2013年; 目的:通过对不同产地冬凌草的生态特征进行比较,探讨冬凌草种质资源的多样性,为其新品种的选育提供依据。方法:对不同产地的冬凌草进行观察描述,比较不同产地冬凌草的叶片形状、叶缘形状、叶面特征、叶背、叶脉、叶毛、茎色、茎绒毛、叶片大小、分枝数等之间的差异性。结果:不同产地冬凌草的生物学性状呈现明显差异。结论:不同产地冬凌草的生物学性状呈现不同差异,证明冬凌草种质资源较为丰富。; 娄玉霞董诚明乔毅琳; 关键词：冬凌草生态特征生物学性状

冬凌草AACT基因的克隆与表达分析被引量：11: 2016年; 目的:克隆冬凌草乙酰辅酶A酰基转移酶(acetyl-CoA C-acetyltransferase,AACT)基因并分析其在冬凌草不同组织中的表达模式。方法:在冬凌草转录组测序的基础上设计特异引物,采用逆转录PCR技术克隆冬凌草IrAACT基因全长,并进行生物信息学分析,采用实时荧光定量PCR法分析其组织表达模式。结果:克隆得到的IrAACT基因全长1 254 bp,编码417个氨基酸,该序列与丹参等植物中的AACT基因有较高的同源性。生物信息学预测IrAACT具有Ⅱ型硫解酶催化作用的活性中心结构域。实时荧光定量PCR表明,IrAACT在冬凌草花和叶中的表达量明显高于根、茎和愈伤组织。结论:该研究获得了IrAACT基因的全长cDNA序列,并揭示了其在不同组织中的表达差异,为进一步阐述该基因在冬凌草二萜类成分合成途径中的功能奠定了基础。; 朱畇昊苏秀红董诚明陈随清邵远洋张风波; 关键词：冬凌草生物信息学分析荧光定量PCR

固相萃取-高效液相色谱法测定拟缺香茶菜中3个二萜类成分的含量被引量：1: 2015年; 目的：建立测定拟缺香茶菜药材中二萜类成分 Kamebacetal-A 、Kamebacetal-B、肾形香茶菜丙素的方法。方法采用固相萃取-高效液相色谱法（SPE-HPLC）测定3个二萜类成分的含量。使用Venusil C18（4．6 mm ×250 mm，5μm）反相色谱柱；流动相：乙腈（A）－水（B）梯度洗脱；流速：1 mL／min；柱温：30℃；检测波长230 nm。结果拟缺香茶菜中 Kamebacetal-A 、Kamebacetal-B、肾形香茶菜丙素分别在0．056～0．448 g／L（r ＝0．9992），0．0026～0.0208 g／L（r ＝0．9994），0．016～0.128 g／L（r ＝0．9997）内与峰面积成良好的线性关系；平均回收率分别为97．53％（RSD ＝2.16％），96．02％（RSD ＝2．01％），98．23％（RSD ＝2．10％）。结论所建立的方法灵敏、准确、稳定，可用于拟缺香茶菜中 Kamebacetal-A 、Kamebacetal-B、肾形香茶菜丙素的含量测定，为拟缺香茶菜抗肿瘤谱效关系的研究奠定基础。; 代丽萍陈随清赵猛王晓雪鲁信达王智民; 关键词：二萜高效液相色谱法

冬凌草种子质量分级标准的研究被引量：2: 2013年; 目的:研究制定冬凌草种子的质量分级标准。方法:对不同产地的40份冬凌草种子的净度、千粒质量、发芽率、发芽势、含水量、生活力及带菌率等指标进行测定。采用SPSS17.0分析软件对各检测结果进行分析,得出划分等级的主要指标并制定出冬凌草种子质量的分级标准。结果:将冬凌草种子的质量分为三级,一级种子发芽率不低于89%,发芽势不低于81%,千粒质量不低于0.56 g;二级种子发芽率为78%～89%,发芽势为70%～81%,千粒质量为0.53～0.56 g;三级种子发芽率为71%～78%,发芽势为57%～70%,千粒质量为0.52～0.53 g。结论:发芽率为冬凌草种子质量分级的主要指标,发芽势和千粒质量为质量分级的重要参考指标。; 李晓婷董诚明谢小龙; 关键词：冬凌草发芽率发芽势千粒质量

冬凌草二萜类成分的化学指纹图谱研究及评价被引量：7: 2012年; 为了建立冬凌草(Rabdosia rubescens)二萜类成分的HPLC指纹图谱,并通过指纹图谱对来自不同产地和不同类型的冬凌草进行评价,本研究以10批太行山产冬凌草HPLC色谱图为参照,建立了冬凌草二萜类成分的指纹图谱,色谱条件为,色谱柱:phenomsil C18(250×4.6 mm,5μm)柱;流动相:甲醇∶0.5%磷酸水溶液梯度洗脱;柱温:30℃;检测波长:238 nm;流速:0.8 mL/min。通过化学成分指纹图谱相似度分析以及主成分分析方法,综合评价不同产地冬凌草样品质量的差异。结果表明冬凌草种质资源出现多种分化,不同地区冬凌草二萜类成分差异明显;不同变异类型冬凌草二萜类成分也发生了变化,但没有明显规律性。; 陈随清宋君崔璨; 关键词：冬凌草种质资源二萜类成分高效液相色谱化学指纹图谱主成分分析

冬凌草1-脱氧木酮糖-5-磷酸还原异构酶(DXR)基因克隆与分析被引量：3: 2016年; 目的:为研究冬凌草二萜类合成的相关基因,在冬凌草转录组信息数据的基础之上,以冬凌草无菌苗为研究材料,克隆冬凌草二萜类合成的关键酶1-脱氧木酮糖-5-磷酸还原异构酶(l-deoxy-D-lxyluloses-phosphatereduetoisomerase,DXR)基因。方法:采用逆转录PCR技术克隆冬凌草DXR基因,实时荧光定量PCR法分析其组织表达模式。结果:DXR c DNA基因全长1 500 bp,DXR基因开放阅读框为1 422 bp,编码473个氨基酸组成的蛋白质序列,理论相对分子质量为51.39 k Da,等电点为6.09,是一种亲水性蛋白。DXR在茎中表达量相对较高,在愈伤组织中表达量最低。结论:研究结果为深入研究冬凌草DXR酶的活性和功能及为冬凌草二萜类化合物的生物合成机制、优良基因挖掘奠定基础。; 苏秀红尹磊陈随清; 关键词：冬凌草二萜

不同产地冬凌草种质资源分子生物学分析被引量：6: 2016年; 目的：利用RAPD和ISSR分子标记技术对来自23个主要分布区的冬凌草进行遗传多样性和亲缘关系分析。方法：从48条RAPD引物中筛选出10条多态性引物,对供试材料进行PCR扩增后共获得84条条带,其中多态性条带77条（PPB=91.67%）,23份材料间的遗传相似系数（GS）为0.71~1.00;从70条ISSR引物中筛选出5条多态性引物,对供试材料进行PCR扩增后共获得21条条带,其中多态性条带16条（PPB=76.19%）,23份材料间的遗传相似系数（GS）为0.55~1.00。结果：聚类分析显示,不同地区冬凌草基因水平的分类具有较强的地域性。分布于伏牛山的冬凌草明显聚为一类,分布于太行山的冬凌草则聚为另一类。两种标记结果呈显著相关性,相关系数为0.636 5。结论：我国冬凌草植物的遗传多样性十分丰富,该研究为筛选优质种质资源提供了丰富的遗传基础。; 陈随清尹磊宋君崔璨孟灿; 关键词：冬凌草种质资源 ISSR RAPD

稀土元素镧和铈对冬凌草再生植株生长及次生代谢产物的影响被引量：8: 2015年; 以冬凌草无菌苗为材料,在冬凌草再生植株时期,添加不同浓度的稀土元素镧和铈,用重量法测定其单株平均鲜重及干重,用高效液相法测定冬凌草甲素、乙素、迷迭香酸的含量,参考农作物、园艺作物种质评比的方法,根据冬凌草生产中各项指标的重要性,设置权重,计算加权后得到综合评分对其进行综合评价,探讨稀土元素镧、铈对冬凌草再生植株产量及次生代谢产物冬凌草甲素、乙素、迷迭香酸含量的影响。结果表明:空白对照组综合评分为62.99分,添加稀土元素铈的条件下,1μmol·L-1Ce Cl3·7H2O评分最高为87.96分,添加稀土元素镧的条件下,5μmol·L-1La Cl3·6H2O评分最高为74.44分,这表明Ce Cl3·7H2O对冬凌草再生植株生长及次生代谢产物积累的促进作用优于La Cl3·6H2O;适宜浓度的镧、铈能促进冬凌草再生植株的生长及次生代谢产物冬凌草甲素、冬凌草乙素、迷迭香酸的合成,而高浓度10μmol·L-1La Cl3·6H2O具有抑制的情况。该研究结果将对进一步研究稀土元素对冬凌草再生植株生长的促进作用机制奠定基础,为植物组织培养中如何科学合理地使用稀土元素提供理论依据。; 董诚明曹利华苏秀红张艳贞乔毅琳姚锋; 关键词：冬凌草稀土元素甲素乙素迷迭香酸

稀土元素对冬凌草愈伤组织生长及冬凌草甲素、乙素含量的影响被引量：4: 2013年; 目的:探讨稀土元素镧、铈对冬凌草愈伤组织生长及冬凌草甲素、乙素含量的影响。方法:冬凌草均匀愈伤组织在添加不同浓度La3+或Ce3+的培养基中培养,通过质量法测定愈伤组织鲜质量、绘制生长曲线,HPLC测定甲素、乙素含量。结果:CeCl3.7H2O浓度为1μmol.L-1时,愈伤生物量最高,是空白条件下的2.4倍。空白及对照条件下甲素含量均为0;空白条件下乙素含量最低为0.11%,随着Ce3+浓度升高而升高,当浓度为10μmol.L-1时高达0.58%;乙素随着La3+浓度升高而降低,当浓度为0.1μmol.L-1时含量高达0.44%。结论:0～10μmol.L-1的La3+及Ce3+均有利于冬凌草愈伤生物量的积累及乙素的合成,对甲素的合成无影响,将CeCl3.7H2O浓度10μmol.L-1作为最佳条件选择。; 张艳贞董诚明苏秀红曹利华; 关键词：冬凌草稀土元素愈伤组织冬凌草甲素冬凌草乙素

国家自然科学基金(81173486)

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