国家自然科学基金(30772267)
- 作品数：6 被引量：24H指数：3
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- 去分化脂肪细胞与脂肪来源干细胞成脂分化能力的比较研究被引量：5
- 2010年
- 目的种子细胞是组织工程研究热点,研究具有高成脂分化能力、可应用于脂肪组织工程的种子细胞,以提高组织工程脂肪的构建效率。方法取自愿捐赠的吸脂术脂肪组织采用胶原酶消化后,提取成熟脂肪细胞(mature adipocytes,MA)及脂肪来源干细胞(adipose-derived stromal cells,ADSCs);天花板贴壁培养法诱导MA去分化,获得去分化脂肪细胞(dedifferentiated adipocytes,DA)。取第4代DA和ADSCs行成脂诱导培养,采用倒置相差显微镜观察、油红O染色分光光度计法及细胞计数法比较DA、ADSCs成脂分化能力。结果 MA在体外培养环境下能去分化为成纤维细胞状DA。成脂诱导培养14d内,倒置相差显微镜下观察显示DA脂滴聚集能力显著大于ADSCs。油红O染色分光光度计法显示DA在诱导培养4d后出现显著性脂滴聚集,ADSCs 10d时才出现显著性脂滴聚集;诱导12d后DA的吸光度值大于ADSCs,差异有统计学意义(P<0.05)。油红O染色细胞计数法显示,DA的成脂分化率为65%±6%,ADSCs为35%±5%,差异有统计学意义(P<0.05)。结论 DA成脂分化能力高于ADSCs,有望成为脂肪组织工程种子细胞。
- 廖云君高建华鲁峰
- 关键词：脂肪组织工程去分化脂肪细胞脂肪来源干细胞成脂分化
- 脂肪细胞去分化及构建组织工程化脂肪的实验研究被引量：7
- 2009年
- 目的探讨成熟脂肪细胞去分化及去分化脂肪细胞作为种子细胞构建组织工程化脂肪组织的可行性。方法取健康女性脂肪抽吸术的抽吸物,使用酶消化法获取成熟脂肪细胞,采用天花板贴壁法培养,取第3代细胞进行实验。体外实验:成脂、成软骨和成骨诱导培养,并分别采用油红"O"染色、阿尔辛蓝染色和茜素红染色法鉴定。体内实验:实验组(n=6):取第3代细胞使用荧光染料DiI标记,与纤维蛋白胶混合后注射于裸鼠背部一侧皮下,8周后,从大体观察、组织学、油红"O"染色及荧光显微镜观察新生物形成情况;对照组(n=6):以空白的纤维蛋白胶注射于同一裸鼠背部另一侧皮下,于同一时间点进行检测。结果成熟脂肪细胞呈单房圆形,经天花板贴壁法培养后变为长梭形成纤维细胞状,即去分化脂肪细胞。去分化脂肪细胞在定向诱导培养下能够分别成脂、成软骨及成骨分化。体内实验中实验组8周后在裸鼠背部皮下有新生组织块形成,经检测后证实其为成熟脂肪块并来源于植入的去分化脂肪细胞,对照组无新生组织形成,纤维蛋白胶被降解吸收。结论成熟脂肪细胞可通过体外培养实现去分化,去分化脂肪细胞具有成脂、成软骨和成骨等多向分化能力,以去分化脂肪细胞为种子细胞可在裸鼠皮下构建出脂肪组织。
- 陈晓炜姜平高建华廖云君韩铮
- 关键词：脂肪细胞去分化纤维蛋白胶
- 缺氧对成熟脂肪细胞去分化影响的实验研究被引量：3
- 2008年
- 目的研究缺氧环境下成熟脂肪细胞体外培养的形态学变化,探讨缺氧环境对成熟脂肪细胞去分化的影响。方法从成人吸脂术后抽吸物提取脂肪组织来源的干细胞,诱导为成熟脂肪细胞,在缺血缺氧的环境下培养,观察各时间段细胞的形态变化。结果由脂肪组织来源的干细胞诱导而成的成熟脂肪细胞,在缺氧环境培养数日后,细胞从圆形变为可持续分裂的成纤维细胞状细胞。结论成熟的脂肪细胞在一定条件下可以去分化为成纤维细胞状细胞。
- 廖云君高建华姜平鲁峰
- 关键词：缺氧脂肪细胞去分化
- 脂肪组织来源干细胞促进软组织创面愈合的实验研究被引量：7
- 2010年
- 目的探讨大鼠脂肪组织来源干细胞(rADSCs)对软组织创面的促愈作用并比较全身和局部注射两种移植途径的有效性。方法分离培养获得SD大鼠的ADSCs,体外进行成脂、成骨、成神经的诱导分化鉴定。在大鼠背部制作软组织缺损创面模型,分别经创面局部点状注射和尾静脉注入全身途径移植DiI标记的ADSCs,移植细胞数为2.4×106/只。术后3、7、11、14d观察创口收缩率,愈合时间等,24d收集创面组织标本行荧光显微镜及常规HE染色观察。结果 rADSCs具有成脂、成骨、成神经分化潜能。局部途径在术后3d即可见显著的创面收缩,全身途径在术后7d创面收缩开始加速,这两组创面愈合时间均短于对照组,但两组间比较无显著性差异。组织学观察发现细胞移植组较对照组肉芽丰富,成纤维细胞、腺样结构及新生血管形成更明显。结论 rADSCs对软组织创伤具有促愈作用,局部较全身移植途径起效快且发挥作用更明显。
- 南华高建华鲁峰付冰川
- 关键词：脂肪组织来源干细胞细胞移植创面愈合
- 去分化脂肪细胞与脂肪来源干细胞体内成脂能力比较的初步研究被引量：3
- 2010年
- 目的通过比较去分化脂肪细胞（dedifferentiated adipocytes，DA）与脂肪来源干细胞（adipose—derived stem cells，ASCs）在体内的成脂分化能力，为脂肪组织工程筛选出成脂效率高的种子细胞。方法取健康女性脂肪抽吸术的抽吸物，使用酶消化法获取成熟脂肪细胞及脂肪来源干细胞，采用天花板贴壁法培养成熟脂肪细胞使其去分化，获取去分化脂肪细胞，各取第3代细胞进行实验。将两种细胞分别与纤维蛋白胶（fibringlue，FG）支架体外混合培养，光镜及扫描电镜检测细胞与支架的相容性；DiI荧光染料标记细胞，将DiI标记过的细胞支架复合物（DA—FG组，去分化脂肪细胞一支架，n=8；ASCs—FG组，脂肪来源干细胞一支架，n=8）以及空白支架（空白FG组，n=8）注射于裸鼠皮下。术后8周将新生组织取出，进行大体观察和湿重测定，HE染色、H染色和油红“O”染色后进行组织学观察、纤维化比率测定以鉴定新生物的性质、来源。结果成熟脂肪细胞经天花板贴壁法培养后变为长梭形成纤维细胞状，即去分化脂肪细胞，脂肪来源干细胞呈长梭形。细胞一支架复合物体外培养3d后光镜及扫描电镜检测发现细胞在支架上生长良好。术后8周DA—FG、ASCs—FG组裸鼠背部皮下均有新生组织块形成，经检测后证实其为成熟脂肪块并来源于植入的种子细胞，DA—FG组新生物平均湿重大于ASCs—FG组，平均纤维化比率则低于ASCs—FG组；空白FG组无新生组织形成，支架被降解吸收。结论去分化脂肪细胞与脂肪来源干细胞均可作为种子细胞在裸鼠皮下构建出脂肪组织，较之脂肪来源干细胞，去分化脂肪细胞构建出的组织块具有湿重大，纤维化比率低的优点。
- 陈晓炜姜平高建华廖云君鲁峰
- 关键词：去分化脂肪细胞脂肪来源干细胞纤维蛋白胶
- 人脂肪细胞的可塑性被引量：2
- 2011年
- 目的 探索体外培养环境下人成熟脂肪细胞的去分化现象,旨在挖掘其作为种子细胞的潜能,为组织工程研究开辟新思路.方法 自成人吸脂术后抽吸物提取成熟脂肪细胞及脂肪组织来源干细胞（adipose-derived stromal cells,ASCs）,天花板贴壁培养法诱导成熟脂肪细胞去分化,观察细胞形态变化,获得去分化脂肪细胞（dedifferentiated adipocytes,DA）.相同的条件下,MTT比色法比较DA、ASCs活性并绘制细胞生长曲线;流式细胞仪鉴定DA、ASCs表面分子的表达;油红O染色、茜素红染色、阿尔辛蓝染色分别鉴定DA、ASCs成脂分化、成骨、成软骨分化能力.结果 人成熟脂肪细胞在体外培养环境下能去分化为成纤维细胞状DA;MTT比色法测细胞活性：DA、ASCs均有很强的增殖能力,两者差异无统计学意义;流式细胞仪测定：DA、ASCs中HLA-ABC、CD29、CD44均为阳性,CD45、CD34、CD106均为阴性;成脂分化2周,油红O染色可见DA、ASCs内出现红色脂滴;成骨分化2周,茜素红染色可见DA、ASCs内红色钙盐沉积;成软骨分化2周,阿尔辛蓝染色可见DA、ASCs内软骨基质沉积.结论 成熟的脂肪细胞在体外培养条件下可成为DA,DA具有很强的增殖活性,表达部分干细胞特征性表面蛋白,有成骨、成软骨及强大的成脂分化能力,有望成为组织工程优秀的种子细胞.
- 廖云君高建华鲁峰
- 关键词：脂肪细胞脂肪组织来源干细胞去分化
