国家重点实验室开放基金(2004)
- 作品数：3 被引量：1H指数：1
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- 杆状病毒SeMNPV Se29基因的克隆、表达与抗体制备
- 2011年
- 目的:克隆和表达甜菜夜蛾核多角体病毒(Spodoptera exigua multicapsid nucleopolyhedrovirus,SeMN-PV)ORF29全长基因(Se29),制备SE29蛋白的多克隆抗体.方法:用PCR的方法扩增得到Se29基因,将其克隆至原核表达载体pET-28a(+)上,转化大肠杆菌BL21(DE3),在IPTG诱导下超量表达了SE29蛋白.采用割胶回收的方法纯化SE29蛋白,以纯化的SE29蛋白作为抗原,免疫新西兰大白兔制备了特异的抗SE29蛋白的抗体.结果:构建了Se29基因原核表达质粒,在大肠杆菌中实现了SE29蛋白的原核表达,获得了SE29蛋白的多克隆抗体,West-ern blot分析表明该抗体能与SeMNPV感染的细胞蛋白样品发生特异性反应.结论:SE29蛋白的多克隆抗体的获得为进一步研究SE29蛋白的功能奠定了基础.
- 李赛男李朝飞庞义杨凯
- 关键词：甜菜夜蛾核多角体病毒克隆原核表达抗体
- 斜纹夜蛾核多角体病毒Splt119基因在大肠杆菌中的表达及抗体制备
- 2011年
- 用PCR的方法扩增得到斜纹夜蛾核多角体病毒(Spodoptera litura nucleopolyhedrovirns,SpltMNPV)ORF119全长基因(Splt119),将其克隆至5′端有6×His编码序列的原核表达载体pQE30上,转化大肠杆菌M15[pREP4],在1 mmol/LIPTG诱导下超量表达了一个分子量约28 kD的融合蛋白。经聚丙烯酰胺凝胶电泳纯化,免疫新西兰大白兔制备了特异的抗Splt119抗体。Western blotting免疫印迹分析表明,该抗体适合用作Spltl19蛋白功能的进一步研究。
- 李赛男李朝飞庞义杨凯
- 关键词：斜纹夜蛾核多角体病毒原核表达抗血清
- 甜菜夜蛾核多角体病毒Se29基因的克隆与序列分析被引量：1
- 2011年
- [目的]克隆得到甜菜夜蛾核多角体病毒(Spodoptera exiguamulticapsid nucleopolyhedrovirus,SeMNPV)ORF29全长基因(Se29)。[方法]用PCR的方法扩增Se29基因,将其克隆至pMD18-T载体上,获得了重组质粒T-Se29,进行序列测定和分析。[结果]获得大小为642 bp左右的序列,扩增序列与GenBank登录序列(Genbank accession No.NC_002169)核苷酸同源性100%。序列分析结果表明,Se29基因编码蛋白(SE29)存在一个可能的跨膜区域,有多个蛋白激酶C、酪蛋白激酶Ⅱ磷酸化位点和N-糖基化位点,1个微体C末端靶信号位点。蛋白序列比对结果表明,SE29与棉铃虫单核衣壳核多角体病毒(Helicoverpa armigerasingle nucleocapsid nucleopolyhedrovir-us,HaSNPV)ORF128(Ha128)的编码蛋白(HA128)具有较高的同源性,其在病毒侵染过程中的作用值得关注。[结论]成功克隆出Se29基因,为研究其在病毒侵染过程中的作用奠定了试验基础。
- 李赛男李充璧龚敬文陈焕楷
- 关键词：甜菜夜蛾核多角体病毒克隆
