国家自然科学基金(30772242)
- 作品数：16 被引量：18H指数：3
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- 慢病毒介导shRNA沉默STAT3表达治疗结直肠癌的体内外研究被引量：2
- 2010年
- 目的 探讨慢病毒介导shRNA沉默STAT3表达对结直肠癌生长的影响.方法 分别用慢病毒干扰质粒pRNAT-shSTAT3、慢病毒空质粒pRNAT-GFP和慢病毒包装质粒混合物共转染293T细胞,获得慢病毒分别感染结直肠癌HT-29细胞,筛选培养后获得HT-29-shSTAT3、HT-29-GFP细胞株.将3种细胞株用于建立裸鼠皮下移植瘤模型,分为3组：第1组为HT-29组,第2组为HT-29-GFP组,第3组为HT-29-shSTAT3组,每组5只.MTT法检测细胞生长情况,流式细胞仪检测细胞周期变化,取瘤组织切片行CD34免疫组织化学观察肿瘤微血管密度（MVD）的变化.应用单因素方差分析检测结果.结果 结直肠癌HT-29、HT-29-GFP细胞株生长能力明显强于HT-29-shSTAT3细胞株,3者比较,差异有统计学意义（F=632.50,P〈0.05）.HT-29-shSTAT3细胞株生长明显减慢,G0/G1期细胞占68.7%±2.9%,HT-29-GFP细胞株为38.5%±1.6%,HT-29细胞株为38.7%±2.3%;3者比较,差异有统计学意义（F=166.53,P〈0.05）.HT-29组、HT-29-GFP组和HT-29-sh STAT3组MVD分别为29±5、28±4、10±3,3组比较,差异有统计学意义（F=31.60,P〈0.05）.结论 慢病毒介导的shRNA沉默STAT3表达能明显抑制结直肠癌的生长.
- 钱伟峰阮坚丽管文贤高源乔志明夏春林
- 关键词：大肠肿瘤SHRNA
- 两型星形胶质细胞损伤后胰甘油三酯脂酶的表达
- 2011年
- 目的:通过建立两型星形胶质细胞体外机械损伤模型,于损伤后不同时间点检测两型星形胶质细胞中胰甘油三酯脂酶(PTL)的表达变化。方法:采用震荡培养和差速贴壁法分离纯化新生SD大鼠的1型星形胶质细胞(T1As)和2型星形胶质细胞(T2As),以real-time PCR和Western Blot分别检测损伤后的两型星形胶质细胞中PTL mRNA和蛋白表达变化。结果:损伤后两型星形胶质细胞中PTL表达均出现先升高后降低的趋势,而在T2As中的表达远高于在T1As中的表达水平(P<0.01)。结论:PTL在T2As中高表达提示,中枢神经系统损伤后再生与修复过程中,T2As对脂质代谢及髓鞘形成发挥作用。
- 赵俊利张晔刘凯孙艳芸贾俊霞夏春林
- 关键词：星形胶质细胞细胞损伤
- Tet-off/Tet-on基因工程鼠中脑肿瘤干细胞的克隆与鉴定
- 2009年
- 目的：Tet—off／Tet—on转基因脑肿瘤小鼠模型中分离鉴定脑肿瘤干细胞，为进一步研究其是否起源于神经干细胞奠定基础。方法：从出现临床症状的转基因小鼠天幕区肉眼可见的肿瘤组织中取材，一部分做冰冻切片；另一部分制成单细胞悬液，培养于含生长因子的无血清培养基和含血清培养基。在光镜下观察常规病理，用相差显微镜和电镜分别观察细胞形态及其超微结构，用流式细胞仪检测Hoechst33342阴性的SP细胞，以及其染色体倍体和细胞周期，免疫荧光染色检测细胞球体及其分化细胞中的神经巢蛋白（Nestin）、神经元特异性烯醇化酶（NSE）、glial fibrillary acidic protein（GFAP）表达情况。结果：肿瘤位置均位于小脑天幕上下约2—3mm的松果体区域内，常规病理诊断为髓母细胞瘤。肿瘤细胞在无血清培养条件下，呈悬浮的球状生长，在含血清培养条件下贴壁分化成瘤性胶质细胞、神经元。电镜见到了核质比高、细胞器不发达、具干细胞特征的细胞。流式细胞仪检测肿瘤细胞球中的SP（side population）细胞为17．27％，异倍体细胞为26．77％。免疫荧光染色发现细胞球中大部分细胞表达干细胞标志物Nestin，少数细胞表达分化标志物GFAP和NSE。与之相反，贴壁细胞大部分表达分化标志物微管相关蛋白2（MAP2）或胶质纤维酸性蛋白（GFAP），同时共表达干细胞标志物Nestin。结论：Tet—off／Tet—on转基因小鼠脑肿瘤组织中存在具有自我更新和多向分化潜能的脑肿瘤干细胞。
- 李英斌陈骅夏春林
- 关键词：胶质瘤肿瘤干细胞
- 胰甘油三酯脂酶在大鼠两型星形胶质细胞中的表达被引量：4
- 2008年
- 目的比较胰甘油三酯脂酶在1型星形胶质细胞(T1A)和2型星形胶质细胞(T2A)中的表达情况。方法取新生大鼠脑皮质,体外分离培养纯化的T1A和T2A,应用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR))技术检测胰甘油三酯脂酶mRNA在两型星形胶质细胞中的表达差异,并且通过激光共焦免疫荧光双标技术从蛋白水平进一步证实。结果胰甘油三酯脂酶在T1A中不表达或低表达,主要定位于细胞核中;而在T2A中表达水平较高,分布广泛,在胞浆、胞核及细胞突起中均有表达。结论胰甘油三酯脂酶在两型星形胶质细胞中的表达存在差异,胰甘油三酯脂酶在T2A中高表达,提示T2A在中枢神经系统脂代谢方面起重要的作用。
- 严美娟陆志方夏春林孙茂民刘
- 关键词：细胞培养逆转录聚合酶链反应免疫组织化学
- 川芎嗪对谷氨酸损伤海马神经元的保护作用被引量：5
- 2009年
- 目的观察川芎嗪对谷氨酸损伤海马神经元的保护作用。方法原代培养大鼠海马神经元,培养基中加入1mmol/L的盐酸川芎嗪溶液共同孵育12h后,加入1mmol/L谷氨酸损伤海马神经元20min。采用MTT法检测细胞活性;测定培养液中乳酸脱氢酶(LDH)活力的变化;细胞免疫组化检测各组细胞表达AchE。结果川芎嗪可提高谷氨酸损伤后海马神经元的存活率,抑制因谷氨酸损伤引起的细胞内LDH的释放,可促进谷氨酸损伤细胞中AChE的表达。结论川芎嗪对谷氨酸诱导海马神经元损伤有保护作用。
- 包志军夏春林
- 关键词：川芎嗪谷氨酸海马神经元
- 轴突成束和延伸蛋白ζ-1基因在1型和2型星形胶质细胞中的表达被引量：1
- 2008年
- 目的探讨轴突成束和延伸蛋白ζ-1(FEZ1)基因在1型和2型星形胶质细胞(T1A、T2A)中的表达差异,及其在新生SD大鼠中枢神经系统中的表达。方法培养、分离、纯化T1A和T2A,提取总RNA,分别以Cy3-dCTP和Cy5-dCTP标记T1A和T2A的mRNA,进行基因表达谱芯片检测分析。选取其中与轴突延伸相关的FEZ1基因,应用半定量RT-PCR法研究FEZ1在新生大鼠中枢神经系统多个部位的表达。结果T1A和T2A中差异表达基因138条,其中60条在T1A中高表达,78条在T2A中高表达。FEZ1基因在T2A中高表达。RT-PCR结果显示,FEZ1在新生大鼠中枢神经系统大脑皮层、嗅球和脊髓组织中均有表达。结论T1A和T2A中存在多个差异表达基因,其中与轴突延伸相关的FEZ1基因表达明显差异,提示T1A和T2A可能在诱导轴突生长方面有不同功能;FEZ1基因与中枢神经系统的发育和再生相关。
- 何江虹张晔夏春林张万钰朱婷万明辉
- 关键词：星形胶质细胞基因表达谱芯片反转录-聚合酶链式反应
- 星形胶质细胞的基因表达谱差异被引量：2
- 2007年
- 目的研究1型和2型星形胶质细胞的基因表达谱差异,为深入研究T1A和T2A生物学特性及功能方面的异同打下基础。方法以振荡法和差速贴壁纯化培养1型星形胶质细胞(T1A)和2型星形胶质细胞(T2A),提取总RNA,分别以Cy3-dCTP和Cy5-dCTP标记T1A和T2A的mRNA,进行基因表达谱芯片检测分析。结果基因芯片上检测点4096个,4次结果交集显示共有差异表达基因138条(60条在T1A中高表达,78条在T2A中高表达),其中生物学功能较为明确的差异表达基因为99条(42条在T1A中高表达,57条在T2A中高表达)。结论通过该研究获得了大鼠大脑T1A和T2A的基因表达谱,T1A和T2A之间存在99条生物学功能较为明确的差异表达基因。
- 何江虹严美娟夏春林孙茂民万明辉张晔
- 关键词：星形胶质细胞细胞谱系基因表达谱
- STAT3基因shRNA真核表达载体的构建与鉴定
- 2009年
- 目的构建携带信号传导和转录激活子3(STAT3)基因短发夹状干扰RNA(shRNA)的真核表达载体。方法从GenBank STAT3mRNA上寻找到3条符合特征的靶序列,合成靶序列的DNA寡核苷酸链,合成双链DNA,并和BamHⅠ和HindⅢ酶切后的pRNAT-U6.1/Neo载体质粒连接产生重组质粒,PCR筛选阳性克隆,并行测序鉴定。重组质粒转染大肠癌LoVo细胞,RT-PCR检测STAT3的表达。结果PCR和测序证实重组质粒构建正确。3种重组质粒对大肠癌LoVo细胞STAT3的表达有较强的抑制作用。结论成功构建了携带有STAT3基因的短发夹状干扰RNA的重组质粒。
- 钱伟峰管文贤高源乔志明黄兴锐夏春林
- 关键词：核糖核酸干扰
- 红细胞生成素激活的星形胶质细胞条件培养液对神经干细胞促分化作用及对分化后细胞的保护作用
- 2009年
- 目的观察红细胞生成素激活的星形胶质细胞条件培养液（EACM）对神经干细胞促分化作用及对分化后细胞的保护作用。方法原代培养神经干细胞和1型星形胶质细胞,收集红细胞生成素（EPO）刺激的星形胶质细胞上清液,用于神经干细胞分化实验的研究。对分化后的细胞进行免疫细胞化学染色,计算其分化为神经元的比率;同时利用FeSO4和H2O2制造细胞损伤模型,用EACM继续培养48h,然后检测细胞活性和存活细胞数。结果EACM组神经干细胞分化明显,神经元比率较星形胶质细胞上清组和对照组均有明显增加。分化后的细胞中加入H2O2后,继续用EACM培养的实验组吸光度（A）值和细胞存活百分比均较对照组高。结论红细胞生成素激活的星形胶质细胞条件培养液对神经干细胞有促其向神经元分化的作用,并对分化后的细胞有保护作用。
- 张静沈慧夏春林
- 关键词：神经干细胞促红细胞生成素分化
- 少突胶质细胞发生过程中S-100β表达的变化
- 2008年
- 目的:探讨少突胶质细胞发生过程中3个主要不同阶段S-100β的表达。方法:采用振荡法和差速贴壁法,获得纯化的O-2A祖细胞;双重免疫荧光细胞化学显色法观察S-100β在少突胶质细胞发生过程中的表达情况。结果:O-2A祖细胞在含有碱性成纤维细胞因子(10 ng/ml)和血小板源性生长因子(10 ng/ml)培养液中培养48 h,不表达S-100β;换成含有3′碘甲状腺原氨酸(30 ng/ml)培养液继续培养24 h,S-100β免疫反应呈现阳性。前少突胶质细胞、少突胶质细胞中表达S-100β。结论:少突胶质细胞发生过程中S-100β的表达始于O-2A祖细胞过渡到前少突胶质细胞之间,可能与其从多潜能分化阶段过渡到形态学上的分化阶段有关。
- 卢玉仙张海燕夏春林
- 关键词：O-2A祖细胞少突胶质细胞S-100Β
