国家自然科学基金(30971614)
- 作品数：2 被引量：1H指数：1
- 相关作者：李辉龚燕华阴彬吴旭东刘媛更多>>
- 相关机构：武警医学院中国医学科学院基础医学研究所北京协和医院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家重点实验室开放基金更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- PCGF1蛋白的表达、纯化及其单克隆抗体的制备与鉴定被引量：1
- 2011年
- 目的:原核表达人表观抑制因子Polycomb家族成员PCGF1蛋白片段,并制备其鼠源单克隆抗体(mAb)。方法:应用PCR技术扩增人PCGF1基因编码区部分序列(CDS区第382～567bp的DNA片段)并插入到pET-32a(+)质粒中,在大肠杆菌BL21中进行His-PCGF1-128/189融合蛋白(简写为His-N128/189)的原核表达。利用所表达的融合蛋白中含有的6×His标签进行亲和层析纯化。用所获得的纯化蛋白免疫BALB/c小鼠,利用杂交瘤技术,分别通过ELISA和Western blot法筛选稳定分泌抗体的杂交瘤细胞株,用免疫双向扩散法鉴定mAb的Ig亚类。取1株杂交瘤细胞按照常规方法制备腹水,利用Millipore公司的mAb纯化试剂盒纯化mAb,用Western blot法检测mAb的效价。结果:表达纯化了重组人His-N128/189蛋白;筛选出2株可稳定分泌特异性抗人PCGF1 mAb的杂交瘤细胞株,其免疫球蛋白类型均为IgG1类;通过腹水制备和纯化获得高效价(1∶6000)、高特异性的鼠抗人PCGF1 mAb。结论:原核表达的PCGF1片段融合蛋白可以被纯化,并具有足够的蛋白免疫原性,所制备的相应mAb可特异识别内源性和外源性PCGF1蛋白,可以运用于PCGF1基因功能的研究。
- 李辉吴旭东龚燕华阴彬
- 关键词：单克隆抗体杂交瘤技术
- 肿瘤干细胞与多梳家族
- 2010年
- 肿瘤干细胞（cancer stem cell，CSC）理论认为，正常干细胞是内外环境双重调节下平衡地生长、休眠、分化或自我更新的干细胞；而CSC是内外双重调节紊乱的干细胞。多梳家族（polycomb group，PcG）表观抑制系统是干细胞状态维持机制中重要组成部分。CSC和PcG两者之间的联系十分紧密，已有很多PeG与CSC相关性的研究报道，包括动物实验中PcG对CSC自我更新和移植成瘤能力的影响，及临床研究中PcG与患者预后的关系。
- 李辉刘媛龚燕华
- 关键词：肿瘤干细胞BMI1
