国家自然科学基金(30872681)
- 作品数：2 被引量：8H指数：2
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- 相关机构：第三军医大学西南医院成都军区总医院更多>>
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- 氯喹对脂多糖/内毒素诱导的RAW264.7细胞TLR4-MyD88非依赖信号转导途径的抑制作用被引量：7
- 2010年
- 目的探讨氯喹对脂多糖/内毒素(lipopolysaccharide/endotoxin,LPS)诱导TLR4-MyD88非依赖途径的抑制作用。方法MTT法检测不同浓度氯喹(5、10、20、40、60μg/ml)对RAW264.7细胞活性的影响,ELISA检测培养体系中TNF-α、IL-6在2、6、12、18、24h的释放情况,RT-PCR检测TNF-α、IL-6、TLR4、TRAMmRNA的表达,EMSA检测NF-κB的活性,Westernblot检测IκBα磷酸化水平和IRF3的降解情况。结果氯喹浓度小于40μg/ml时对RAW264.7细胞活性无影响(P>0.05);应用氯喹预处理后LPS诱导的RAW264.7细胞TNF-α、IL-6在蛋白水平和核酸水平均受到明显抑制(P<0.05),TLR4和TRAM在核酸水平均受到显著抑制(P<0.01);EMSA结果显示NF-κB的活化受到抑制,而Western blot检测显示IκBα磷酸化及IRF3的降解也受到抑制。结论氯喹对LPS诱导的RAW264.7细胞TLR4-MyD88非依赖信号转导途径具有抑制作用。
- 王艳艳刘鑫曹红卫王宁鲁永玲郑江
- 关键词：氯喹内毒素干扰素调节因子3
- LPS-TLR4复合物内化障碍与LPS介导巨噬细胞活化的实验研究被引量：3
- 2011年
- 目的建立内化障碍的小鼠RAW264.7细胞模型,观察脂多糖(LPS)-Toll样受体4(TLR4)复合物内化障碍对巨噬细胞活化作用的影响。方法应用内化抑制剂单丹磺酰尸胺(MDC),构建内化障碍的小鼠RAW264.7细胞模型;四甲基偶氮唑盐(MTT)检测MDC对巨噬细胞的毒性;应用LPS刺激内化障碍巨噬细胞,流式细胞仪、激光共聚焦显微镜检测LPS-TLR4复合物内化抑制情况;酶联免疫吸附测定(ELISA)法检测肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素6(IL-6)蛋白的表达;实时PCR法检测TNF-α及IL-6 mRNA的表达。结果应用化学抑制剂MDC,在流式细胞仪和激光共聚焦显微镜下,均观察到RAW264.7细胞中LPS-TLR4复合物的内化被显著抑制,成功建立了内化障碍的模型RAW264.7细胞;反映该细胞活化的指标IL-6在蛋白水平和核酸水平均受到明显抑制(P<0.05),而TNF-α的表达在蛋白水平和核酸水平均无显著抑制。结论 LPS-TLR4复合物内化与LPS介导巨噬细胞活化密切相关,内化障碍条件下,由LPS介导的细胞活化表现为对IL-6的释放受到显著抑制,而对TNF-α的释放则抑制不显著。
- 王艳艳郑江
- 关键词：内毒素类肿瘤坏死因子Α白细胞介素6内化
