北京市自然科学基金(5062010)
- 作品数：3 被引量：15H指数：2
- 相关作者：高俊莲孙建光陈强曾艳王敏更多>>
- 相关机构：北京市农林科学院农业生物技术研究中心中国农业科学院农业资源与农业区划研究所四川农业大学更多>>
- 发文基金：北京市自然科学基金国家高技术研究发展计划北京市留学人员科技活动择优资助项目更多>>
- 相关领域：生物学农业科学更多>>
- 一株高抗汞细菌的分离鉴定及其抗性基因的克隆与表达被引量：9
- 2009年
- 【目的】本研究旨在从重金属汞抗性细菌中分离鉴定汞抗性基因【方法】从北京凉水河河床底泥中分离抗汞细菌,采用16SrRNA基因序列分析结合生理生化特征对菌株进行鉴定。根据GenBank中已发表的多种抗汞细菌的merA基因序列设计引物,以抗性细菌基因组DNA为模板,扩增merA基因,并在大肠杆菌(Escherichia coli)BL21(DE3)表达。同时对表达菌株的重金属汞抗性进行测定。【结果】分离得到一株能在含HgCl2为70mg/L的平板上生长良好的高抗汞细菌,编号为KHg2。16S rRNA基因序列分析结果表明,菌株KHg2与Bacillus silvestris的模式菌株DSM12223T有96%的同源性,其形态特征及生理生化特性与文献报道的Bacillus silvestris一致。从菌株KHg2中扩增得到1687bp DNA片断,其序列与Pseudomonas putida的merA基因序列同源性达到99%,将该DNA片断克隆于pET-30a(+)得到重组质粒pZY2,转化宿主菌获得表达菌株E.coliBL21(DE3).pZY2,经IPTG诱导后产生相对分子量约为33KD的蛋白。重金属汞抗性测定结果表明,表达菌株E.coliBL21(DE3).pZY2可以在含HgCl2为20mg/L的培养基中生长,而转入空载体pET-30a(+)的阴性对照菌株E.coliBL21(DE3)pET-30a(+)则不能在含HgCl2为20mg/L的培养基中生长。【结论】分离的抗汞菌株KHg2与Bacillus silvestris关系密切;从菌株KHg2中克隆到汞抗性基因merA,并在大肠杆菌中得到了成功表达;表达merA基因的大肠杆菌具有抗重金属汞的特性。
- 曾艳陈强王敏孙建光高俊莲
- 关键词：重金属污染土壤RRNA基因序列分析
- 一株高抗镉细菌KCd1的分离鉴定及其抗性基因初步研究被引量：2
- 2010年
- 从北京凉水河床底泥中分离得到一株能在含450 mg/L CdCl2的LB平板正常生长的高抗镉细菌,编号为KCd1。16S rDNA序列分析结果显示,该菌株与Bacillus cereusATCC 14579T的序列同源性达99%;结合脂肪酸测定与生理生化测定结果,确定该菌株在分类上属于Bacillus cereus。根据GenBank中已发表的抗镉细菌cadA序列设计了巢式引物,以菌株KCd1基因组DNA为模板,扩增得到约500 bp的PCR产物,将该PCR产物克隆于pGEM T-Easy载体,测序结果显示其大小为468 bp,与已报道的Staphylococcus haemolyticus的cadA基因对应序列相似性达到99%,由此可知本实验所获得到468 bp基因片段为cadA基因的一段保守序列。该菌株cadA全长基因的获取工作还有待于进一步展开。
- 曾艳孙建光王敏陈强高俊莲
- 关键词：RDNA
- 元蛋白质组分析——研究微生物生态功能的新途径被引量：5
- 2007年
- 随着对微生物纯化培养和元基因组学研究的不断深入,积累了大量的微生物基因组信息,元蛋白组分析将促进我们对基因组功能的理解。目前,对微生物群落的元蛋白质组(metaproteome)的研究已成为后基因组时代进一步认识微生物生态功能的有效途径。对这一新技术的介绍结合元蛋白质组的提取和鉴定方法、元蛋白质组在研究微生物生态功能上的应用进行了综述,并对这一新的研究领域所面临的困难与挑战进行了讨论。
- 牛泽杨慧刘芳马荣才高俊莲
- 关键词：微生物生态环境微生物
