国家自然科学基金(31171104)
- 作品数：7 被引量：30H指数：4
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- 肺高压大鼠肺动脉平滑肌细胞薄荷醇引起的胞浆游离Ca^(2+)浓度增加幅度减低
- 2014年
- 本文通过观察正常(control,CON)、慢性低氧(chronic hypoxia,CH)和野百合碱(monocrotaline,MCT)预处理肺高压大鼠肺动脉平滑肌细胞(pulmonary arterial smooth muscle cells,PASMCs)中,瞬时感受器电位M8(transient receptor potential melastatin8,TRPM8)通道特异激动剂薄荷醇(menthol,MT)引起的胞浆游离钙浓度([Ca2+]i)变化,探讨TRPM8通道在肺高压发病过程中的作用。大鼠处于CH环境或一次性腹腔注射MCT制备肺高压大鼠模型;原代培养CON和肺高压大鼠PASMCs,观察MT激动TRPM8通道引起的PASMCs[Ca2+]i变化,以及TRPM8通道特异阻断剂N-(4-叔-丁基苯基)-4-(3-氯吡啶-2-基)哌嗪-1-甲酰胺[N-(4-tert-butylphenyl)-4-(3-chloropyridin-2-yl)piperazine-1-carboxamide,BCTC]对MT引起[Ca2+]i变化作用的抑制效应;免疫组化检测TRPM8的细胞定位。结果显示,在2 mmol/L Ca2+和无Ca2+台氏液中,MT都可以引起CON组PASMCs的[Ca2+]i增高,且这两种增高作用均可以被BCTC阻断;在2 mmol/L Ca2+和无Ca2+台氏液中,与CON组相比,CH组和MCT组MT引起PASMCs的[Ca2+]i增高幅度均显著减小。免疫组化细胞定位实验显示,PASMCs除胞核外其余部分均有TRPM8棕黄色阳性表达。以上结果提示,PASMCs上的TRPM8通道既存在于胞膜,也存在于肌浆网;CH和MCT预处理可以分别减少PASMCs上TRPM8通道介导的Ca2+内流与Ca2+释放。
- 陈改英焦海霞王明月王瑞幸林默君
- 关键词：肺高压野百合碱薄荷醇
- 阿魏酸预处理对阿霉素诱导H9c2心肌细胞损伤的保护作用被引量：11
- 2014年
- 目的研究阿魏酸(FA)对阿霉素(DOX)诱导H9c2心肌细胞损伤的影响。方法 1μmol·L-1DOX处理H9c2细胞24 h,建立心肌损伤模型。FA预处理组,10、20、40μmol·L-1FA预处理2 h后,再与DOX共培养24 h。CCK-8比色法测定细胞生存率;相差显微镜观察细胞形态学改变;生化试剂盒检测LDH、CK、MDA、SOD;DCF-DA荧光染色流式细胞术检测细胞内活性氧;AO-EB染色、DNA琼脂糖凝胶电泳检测细胞凋亡;Western blot法测定caspase-3、Bax、Bcl-2表达。结果 DOX降低H9c2细胞生存率,诱导氧化应激损伤和细胞凋亡。FA预处理剂量依赖性提高细胞生存率,减轻LDH、CK外漏和损伤细胞形态学改变。FA减少ROS生成,降低细胞MDA水平,增加SOD酶活性,抑制DOX诱导的氧化应激。FA下调促凋亡蛋白caspase-3和Bax,上调凋亡抑制蛋白Bcl-2,减少心肌细胞凋亡。结论 FA可抑制DOX诱导的氧化应激和心肌细胞凋亡,减轻心肌损伤。
- 吴枝娟余靖王瑞幸方秋娟林默君
- 关键词：阿魏酸阿霉素H9
- 慢性低氧对大鼠左右心室的功能及TRPC亚家族表达的影响
- 2014年
- 目的:探讨慢性低氧3周对大鼠左右心室的影响以及规范性瞬时感受器电位亚家族(TRPC)在慢性低氧诱导的右心室心肌肥厚中的表达。方法:将SD雄性大鼠48只随机分为对照组(CON组)和慢性低氧肺动脉高压模型组(CH组)(n=24),CH组将大鼠置于连续的慢性低氧(10%±0.2%)环境饲养三周以诱导大鼠发生心肌肥厚。通过左、右心室插管法测定右心室内压(RVSP)、左心室内压(LVSP)、心率(HR)、平均体循环动脉压(mSAP)、左、右心室内压力最大上升速率(+dp/dtmax)、最大下降速率(-dp/dtmax)、右心肥大指数(RVMI)、左心肥大指数(LVMI);HE染色观察左、右心室心肌组织切片;通过SYBR Green荧光定量PCR法检测CON组、CH组大鼠的肥厚侧心室心肌组织编码TRPC1/3/4/5/6/7的mRNA表达;结合real-time RT-PCR结果对mRNA表达有显著变化的TRPC亚型通过免疫印迹法检测相应蛋白的表达。结果:与CON组相比:CH组的RVSP、RVMI、右心室±dp/dtmax显著增高(P<0.01),LVSP、左心室±dp/dtmax无显著变化,LVMI显著降低(P<0.01);CH组右心室心肌细胞显著增粗(P<0.01),细胞内肌原纤维数量增多,心肌纤维排列紊乱,细胞核深染,形状不整;左心室心肌纤维无明显改变;CH组编码TRPC1的mRNA和蛋白显著增高(P<0.05),而编码其余TRPC亚型的mRNA无显著变化。结论:慢性低氧3周可特异性诱导SD大鼠产生右心室心肌肥厚,上调了编码右心室心肌细胞TRPC1通道蛋白的mRNA和蛋白的表达,TRPC1可能参与了心肌肥厚的发生发展。
- 陈慧勤林默君刘晓如
- 关键词：低氧心肌肥厚CA2+
- 慢性低氧大鼠TRPC1表达与肺动脉收缩变化时间曲线关系被引量：7
- 2014年
- 目的探讨慢性低氧（chronichypoxia，CH）上调TR—PCI表达和SOCE介导肺动脉（pulmonaryarteris，PAs）收缩的时间曲线。方法清洁级6SD大鼠，常压低氧（氧分压为9．5％～10．5％）饲养，观察在不同时问点CH对TRPCI表达量和SOCE介导的PAs收缩的影响，描记其时问依赖性曲线。结果①CH上调平均右心室收缩压（mRVSP），低氧1d压力增高明显，7d达到最大值，21d后达到稳定；右心室质量指数（RVMI）低氧3d后开始增高，此后一直呈持续增高状态，直到21d达到稳定；②半定量RT—PCR检测显示，CH上调TRPCImRNA的表达量，低氧1d上调明显，3d达到最大值一直维持到7d，21d后达到稳定；③CH上调SOCE介导的PAs收缩，低氧3d开始上调，7d达到最大值，21d后达到稳定。结论CH早期TRPCI／SOCE明显上调，两者的时问曲线具有相关性，表明TRPCI和SOCE的上调在慢性低氧致肺高压的机制中发挥着重要作用。
- 穆云萍焦海霞朱壮丽戴耄黄秋虹王瑞幸林默君
- 关键词：慢性低氧肺高压肺动脉
- 动脉平滑肌细胞STIM1过表达上调Akt/mTOR通路并促进细胞增殖被引量：6
- 2016年
- 目的观察基质相互作用分子1(stromal interaction molecule 1,STIM1)在肺动脉高压组织中的表达,并探讨STIM1对动脉平滑肌细胞增殖的影响及机制。方法一次性腹腔注射野百合碱(MCT)建立肺动脉高压大鼠模型;实时定量PCR和蛋白印迹分别测定肺动脉高压大鼠肺组织STIM1 mRNA和蛋白的表达;采用基因转染技术建立STIM1瞬时高表达的动脉平滑肌A7R5细胞模型;用CCK-8法测定细胞增殖能力;用蛋白印迹测定Akt/m TOR通路分子的表达。结果与对照组相比,MCT组的右心室收缩压(RVSP)和右心重量指数(RVMI)均明显增高(P<0.01),形态学观察可见肺小动脉平滑肌层明显增厚,管腔减小;MCT组大鼠STIM1 mRNA和蛋白表达量分别是对照大鼠的2.19和1.66倍;STIM1瞬时过表达的动脉平滑肌细胞与对照组相比,生长速度加快;STIM1过表达可明显增加Akt、m TOR、p70-S6K和4E-BP1的磷酸化水平,而对它们的蛋白水平没有影响。结论肺动脉高压发病中存在STIM1的过表达,STIM1可促进动脉平滑肌细胞增殖,其机制与上调Akt/mT OR信号转导通路相关。
- 张明芳齐元麟王丹王情陈富华林默君
- 关键词：动脉平滑肌细胞细胞增殖哺乳动物雷帕霉素靶蛋白AKT信号通路
- 三七皂苷R1对肺高压大鼠模型肺动脉的舒张作用被引量：10
- 2013年
- 目的探讨三七皂苷R1(notoginsenoside R1)对慢性低氧(chronic hypoxia,CH)和野百合碱(monocrotaline,MCT)致肺高压(pulmonary hypertension,PH)大鼠模型肺动脉(pulmonary arteries,PAs)收缩效应的作用及其机制。方法清洁级♂SD大鼠随机分为3组。正常对照组;CH组:大鼠饲养于氧分压为10.0%±0.5%的密封有机玻璃箱内;MCT组:大鼠按60 mg·kg-1(BW)一次性腹腔注射20 mg·L-1的MCT。观察三七皂苷R1对两种肺高压模型大鼠PAs收缩效应的作用。结果可成功制备CH和MCT致肺高压大鼠;三七皂苷R1(0.1～100μmol·L-1)对10 nmol·L-1内皮素-1(endothelin-1,ET-1)诱发正常大鼠PAs收缩效应呈剂量依赖性舒张,EC50为(5.25±0.14)μmol·L-1;3 nmol·L-1Gd3+阻断ET-1诱发两种肺高压模型大鼠PAs收缩效应后,再加入三七皂苷R1无进一步抑制作用;6μmol·L-1三七皂苷R1对环匹阿尼酸(cyclopiazonic acid,CPA)诱发两种肺高压模型大鼠PAs收缩效应均有明显的抑制作用。结论三七皂苷R1可能通过阻断钙池操纵性钙内流介导的PAs收缩产生治疗肺高压作用。
- 胡莹焦海霞王瑞幸郭立成穆云萍林默君
- 关键词：慢性低氧肺高压三七皂苷R1肺动脉
- 慢性低氧和野百合碱预处理上调大鼠肺动脉平滑肌细胞静息Ca^(2+)内流
- 2013年
- 目的探讨慢性低氧(CH)和野百合碱(MCT)预处理对于大鼠肺动脉平滑肌细胞(PASMCs)静息Ca2+内流的影响。方法持续低氧暴露或一次性腹腔注射野百合碱构建肺高压大鼠模型;酶消化法分离大鼠PASMCs,然后进行α-肌动蛋白(α-Actin)细胞免疫化学鉴定;采用锰(Mn2+)淬灭实验测定PASMCs静息Ca2+内流。结果肺高压大鼠模型构建成功;光镜下PASMCs为长梭形,呈典型的"峰-谷"状生长,免疫化学α-Actin鉴定显示,绝大部分PASMCs胞质呈棕褐色;CH和MCT组PASMCs基础Mn2+淬灭速率和幅度均显著增加。结论 CH和MCT预处理均能上调大鼠PASMCs静息Ca2+内流。
- 陈改英刘青刘晓如王瑞幸林默君
- 关键词：肺动脉野百合碱
